中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

[学位论文] 李钊上海中医药大学 2017年博士导师: 陈凯先共215页

摘要 : 目的:恶性肿瘤是危害人类健康的第二大杀手，至今没有找到很好的治疗办法。因此，全世界的医药工作者都在为攻克癌症这一历史性难题不断地做出自己的贡献。本论文在课题组前期研究工作的基础上，基于天然活性化合物紫杉醇和小檗碱，通过结构改造设计与... 展开目的:恶性肿瘤是危害人类健康的第二大杀手，至今没有找到很好的治疗办法。因此，全世界的医药工作者都在为攻克癌症这一历史性难题不断地做出自己的贡献。本论文在课题组前期研究工作的基础上，基于天然活性化合物紫杉醇和小檗碱，通过结构改造设计与合成，获得到新化合物后，测试肺癌、结肠癌、骨髓瘤和前列腺癌等细胞的抗肿瘤活性，旨在发现针对上述肿瘤的药物先导化合物。方法:1、利用过渡金属催化剂将紫杉醇C-7位的β-OH翻转为α-OH，获得了理化性质不同于紫杉醇的新化合物。通过筛选反应条件，获得了最优催化剂及最佳反应条件组合。进一步以碳酸二（2-吡啶）酯(DPC)为缩合剂在C-7位羟基无保护的条件下对其C-13位进行结构修饰，制备全新的紫杉醇衍生物。2、以苯甲腈和N,N-二乙基-2-甲基苯甲酰胺为原料经过加成关环反应、烯丙基取代反应、奥弗曼重排反应、威克氧化等反应步骤制备全新的芳基异喹啉衍生物。3、以N-丙醛基取代芳基异喹啉为原料，经过伯米朗兹-弗里契反应、浓盐酸水解反应、酯化反应、铃木偶联反应等反应步骤制备全新的小檗碱类似物。4、测试了紫杉醇衍生物在人类前列腺癌细胞DU145等六种肿瘤细胞株上的抗肿瘤活性，芳基异喹啉衍生物及小檗碱类似物在肺癌细胞SPC-A4、结肠癌细胞SW-620上以及人骨髓瘤细胞H929、H929R和ARP-1上的抗肿瘤活性，并分析构效关系。结果与讨论:1、通过对紫杉醇母核改造条件的筛选，获得了最佳反应条件是:催化量的Ag2O(0.1 equiv)在DMF中100℃反应3个小时。反应后催化剂可以过滤回收（回收率99％）且反应活性不减。2、设计并合成得到全新的33个紫杉醇衍生物、39个芳基异喹啉衍生物和47个小檗碱类似物。3、抗肿瘤活性研究发现:紫杉醇衍生物A-19抑制人类前列腺癌细胞DU145的IC50达到了15.9 nM，具有很好的选择性;芳基异喹啉衍生物中化合物B-5e在SPC-A4和SW-620两株肿瘤细胞上作用最强，IC50在0.3μM左右，其中A环为苯并二噁烷，C环为二甲氧基苯基时活性最好;小檗碱类似物中化合物C-1-1e在肿瘤细胞SPC-A4和SW-620上的IC50达到了0.01-0.09 μM水平，与阳性对照长春新碱接近，在抑制骨髓瘤方面，C-1-1e的IC50达到了0.17 μM，其中A环为苯并二噁烷，D环为二甲氧基苯基时活性最好。收起

关键词 : 抗肿瘤活性紫杉醇衍生物小檗碱类似物前列腺癌结构修饰

2. 水茄和荷叶的化学成分研究及药理活性筛选

[学位论文] 袁谱龙上海中医药大学 2016年博士导师: 陈凯先共165页

摘要 : 水茄(Solanum torvum)和荷叶(Nelumbo nucifera)分别是“沙溪凉茶”和“荷叶凉茶”的主要配方之一。也是近年来研究非常活跃的两种中药，它们在传统中医药和现代保健品中都有广泛的运用。为了全面认识这两种中药的化学成分以及发掘它们的药理活性，本... 展开水茄(Solanum torvum)和荷叶(Nelumbo nucifera)分别是“沙溪凉茶”和“荷叶凉茶”的主要配方之一。也是近年来研究非常活跃的两种中药，它们在传统中医药和现代保健品中都有广泛的运用。为了全面认识这两种中药的化学成分以及发掘它们的药理活性，本课题进行如下两部分研究。第一部分，水茄的成分及活性研究。水茄作为广东传统保健饮品“沙溪凉茶''的主要配方之一，常以根茎入药。为了全面了解水茄干燥根和茎中的化学成分，为水茄植物的开发利用提供科学依据，并为水茄的质量标准制定、生理药理学研究提供更多的化学物质基础，本文利用薄层硅胶色谱技术作为检测手段，利用正相硅胶柱、反相硅胶柱、凝胶柱、大孔树脂柱、MCI柱、半制备等柱色谱技术分离纯化化合物，通过核磁共振一维波谱、二维波谱、质谱、红外、旋光等现代波谱分析手段鉴定化合物结构，并对已分离得到的化合物进行药理活性的筛选。结果从水茄茎中分离33个化合物并通过波谱技术鉴定了结构，分别为松柏醛(1)、芥子醛(2)、阿魏酸(3)、对羟基苯甲酸(4)、异香草酸(5)、吲唑(6)、5-hydroxymethyl furfural(7)、丁香酸(8)、4，4-二甲基-1，7-庚二酸(9)、原儿茶醛(10)、壬二酸(11)、2，4，6-三甲氧基苯酚(12)、3，5-二甲氧基-4-羟基苯甲醛(13)、soltorvum A(14)、soltorvum B(15)、soltorvum C(16)、13-hydroxysolavetivone(17)、4-hydroxynon-2(E)-enoic acid(18)、ω-hydroxypropioguaiacone(19)、 soltorvumD(20)、1-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)propan-1-one(21)、(+)-medioresinol(22)、soltorvum E(23)、香兰素(24)、10β，14-dihydroxy-allo-aromadendrane(25)、1-(4-hydroxy-3，5-dimethoxyphenyl)propan-1-one(26)、N-顺式阿魏酰基酪胺(27)、N-反式阿魏酰基酪胺(28)、7-(3-ethoxy-5-methoxyphenyl) propane-7，8，9-triol(29)、β-谷甾醇(30)、2a羟基齐墩果酸(31)、3，5-二甲氧基苯酚(32)和isopterocarpolone(33)。其中化合物14、15、16、20和23为未见文献报道的新化合物;化合物1、2、6、7、11、18、21、25、26、29和33为首次从茄属植物中分离得到;化合物4、8、9、12、13、17、19、22、27、28和32为首次从水茄植物中分离得到。从水茄根中分离30个化合物并通过波谱技术鉴定了结构，分别为torvoside D(G1)、N-p-香豆酰酪胺(G2)、10β，13，14-trihydroxyalloaro-madendrane(G3)、pterodontriol A(G4)、10β，12,14-trihydroxyalloaromadendrane(G5)、3β,11-dihydroxy-4,14-oxideenantioeudesmane(G6)、 Spiro[4.5] deca-6,9-dien-8-one,2-[(1Sor R)-1,2-dihydroxy-1-methylethyl]-6,10-dimethyl(G7)、 soltorvum F(G8)、1β，10β，12,14-tetrahydroxy-allo-aromadendrane(G9)、2-(1',2'-dihydroxy-1'-methylethyl)-6,10-dimethyl-9-hydroxyspiro[4,5]dec-6-en-8-one(G10)、1β,10β,13,14-tetrahydroxy-allo-aromadendrane(G11)、 methyl4-O-feruloyl-5-O-caffeoylquinate(G12)、 Irgafos168(G13)、(+)-lyoniresinol3β-O-β-D-glucopyranoside(G14)、methyl3-O-feruloylquinate(G15)、绿原酸(G16)、阿江榄仁酸(G17)、邻苯二甲酸二丁酯(G18)、neochlorogenin(G19)、eochlorogenin6-O-β-D-xylopyranosyl-(1→3)-β-D-quinovopyranoside(G20)、terminolic acid(G21) Uncargenin C(G22)、neochlorogenin6-O-β-D-quinovopyrano side(G23)、角鲨烯(G24)、十六烷酸(G25)、 Spiro[4.5]deca-6,9-dien-8-one,7-hydroxy-6,10-dimethyl-(1-methylethenyl)(G26)、2，5-bis(2-phenylpropan-2-yl)phenol(G27)、solavetivone(G28)、3β-乙酰基齐墩果酸(G29)和(+)-anhydro-β-rotunol(G30)。其中化合物G6、G8、G9、G11和G27为未见文献报道的新化合物;化合物G3、G4、G5、G12、G13、G14、G15、G21和G22为首次从茄属植物中分离得到;化合物G7、G10、G16、G17和G18为首次从水茄中分离得到。综上所述，共从水茄中分离得到63个化合物，包括10个新化合物。从获得的化合物类型可以看出，水茄茎中主要为酚类和倍半萜类化合物，水茄根中主要为倍半萜，甾体和三萜类化合物。药理结果显示，水茄中的部分倍半萜类单体具有较好的抑制ConA诱导的脾细胞增殖的作用，其中化合物14、17、20、23、25、G26和G28的抑制作用较强，化合物15、16和30也有抑制作用，但作用较弱。第二部分，荷叶的成分及活性研究。荷叶是“荷叶凉茶”的主要配方之一，具有清暑利湿、升阳发散、祛瘀止血等作用，并有用于减肥的报道。查阅荷叶文献发现荷叶中含有大量的异喹啉类生物碱，它们的活性主要集中在降脂降糖、抗菌和抗肿瘤等方面，许多生物碱单体的药理活性没有进行研究，所以通过分离获得生物碱单体进而进行活性筛选具有重要意义。同时近年来发现低聚原花青素类成分有较好的降糖降脂等作用，与荷叶在凉茶中功效相符合。本论文对荷叶的研究集中在荷叶中生物碱单体的分离纯化、原花青素类成分的鉴定及相关活性筛选方面。利用薄层硅胶色谱技术跟踪化学成分并利用正相硅胶柱、反相硅胶柱、凝胶柱、大孔树脂柱、半制备等柱色谱技术分离纯化化合物，通过核磁共振一维波谱、二维波谱、质谱等现代波谱分析手段从荷叶中分离11个化合物并通过波谱技术鉴定了结构，分别为正二十烷(N1）、β-谷甾醇(N2)、荷叶碱(N3)、2-羟基-1-甲氧基阿朴啡(N4)、鹅掌楸碱(N5)、观音莲明碱(N6)、原荷叶碱(N7)、杏黄罂粟碱(N8)、去氢荷叶碱(N9)、N-去甲基荷叶碱(N10)和北美鹅掌楸尼定碱(N11)。针对分离得到的9种生物碱，我们进行α-糖苷酶的抑制活性的测试。药理结果显示3种生物碱表现出一定活性，在300μmol/L的浓度下，鹅掌楸碱、2-羟基-1-甲氧基阿朴啡和Lysicamineα-糖苷酶的抑制活性分别为40.29％±3.06％，27.62％±2.21％和25.94％±1.09％。实验提示，荷叶生物碱的降糖作用可能是一个多物质的协同作用过程，也与传统中药降糖活性通常比较温和相一致。虽然中药中的低聚原花青素类成分研究近年来有一些报道，但对荷叶中的原花青素类化学成分研究甚少，化学结构不明确，相关的药理活性研究更少。我们通过HPLC-DAD/ESI-MS方法对荷叶中的原花青素类成分进行定性鉴别，结果初步鉴定了荷叶中的22种原花青素。同时我们有相同方法将荷叶与同植物的莲藕部分进行比对研究，结果从莲藕中的17种原花青素。比对研究发现荷叶中的原花青素和莲藕中的原花青素在组成上具有明显的差异，荷叶中主要是B-typeprocyanidin(PC)三聚体，莲藕中主要是B-type prodelphinidin(PD)二聚体，对不同部位原花青素结构差异的原因我们进行了分析。药效研究中发现荷叶荷叶原花青素粗提物在浓度100μg/ml下对PA诱导的H9C2心肌细胞具有一定的保护作用，而莲藕原花青素粗提物在同浓度下则无明显保护作用。此外，荷叶原花青素能减少PA诱导的INS-1胰岛β细胞损伤的活性，莲藕原花青素作用不明显。生物活性上的差异与荷叶和莲藕中原花青素结构的不同具有密切联系，这也为合理利用植物莲的不同部位提供科学的依据。此外针对得到的荷叶生物碱单体我们还进行了抗菌实验。实验测得鹅掌楸碱对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的MIC均为32μg/mL，Lysicamine的抗菌谱与鹅掌楸碱相同，但作用强度略低，其对大肠杆菌的MIC为64μg/mL，对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的MIC为128μg/mL。杏黄罂粟碱对红色毛癣菌和石膏状小孢子菌的MIC为16μg/mL。抗菌结果显示杏黄罂粟碱具有较强的抗真菌作用，鹅掌楸碱和Lysicamine对多种致病菌也均表现出较明显抗菌效果，他们可能是荷叶抗菌活性的来源。收起

关键词 : 水茄荷叶化学成分结构鉴定药理活性

3. 桂皮中低聚原花青素的化学成分和药效学研究

[学位论文] 陈亮上海中医药大学 2014年博士导师: 陈凯先共160页

摘要 : 本论文围绕桂皮多酚中低聚原花青素(PCO)类成分展开。进行了不同桂皮中PCO成分的种类和含量的比较、PCO单体成分系统的分离纯化、不同类型PCO类成分之间的氧化转化机制以及PCO甲基化衍生物的制备分离等方面的研究，并在此基础上对其降血糖和抗类风湿关... 展开本论文围绕桂皮多酚中低聚原花青素(PCO)类成分展开。进行了不同桂皮中PCO成分的种类和含量的比较、PCO单体成分系统的分离纯化、不同类型PCO类成分之间的氧化转化机制以及PCO甲基化衍生物的制备分离等方面的研究，并在此基础上对其降血糖和抗类风湿关节炎两方面的药效学进行了研究和探讨，为开发新的具有治疗Ⅱ型糖尿病或者自身免疫疾病（如类风关等）的药物制剂打下了基础。桂皮多酚中存在的PCO主要有两种类型:C4-C8和C2-O-C7两根键连接的A-type类型和C4-C8或者C4-C6一根键连接的B-type类型。首先，我们采用福林酚总多酚含量测定的方法，运用单因素分析和正交试验对桂皮总多酚的提取工艺进行了优化，并在此基础上利用HPLC-MS方法对桂皮多酚中PCO成分的类型进行了定性分析。最终确定桂皮多酚的提取工艺为70％乙醇，按料液比1∶25，在30℃下搅拌提取30 min;22批桂皮药材中柴桂，天竺桂等四批桂皮的总多酚含量较高，在8.5％～12.5％之间，经LC-MS鉴定主要含有A-type的PCO成分;其余18批桂皮药材总多酚的含量在3.0％～7.0％之间，经鉴定主要含有B-type的PCO成分。 PCO成分具有酚羟基多极性大、易氧化聚合、结构相似度高等特点，给分离纯化带来很大的困难，是中药化学领域难点之一。通过摸索，利用色谱技术和波谱技术，我们成功的对不同类型的PCO成分进行了分离鉴定，并对主要成分进行了纯化富集。最后分离得到4个B-type的PCO成分，分别是procyanidin B2、procyanidinB1、procyanidinC1和cinnamtannin A2;6个A-type的PCO成分，分别是procyanidin A1、procyanidin A2、cinnamtannin B1、cinnamtannin D1、cinnamtannin A和parameritannin A1。利用形成的有效分离方法，富集了cinnamtannin D1、cinnamtannin B1、procyanidinB2和procyanidin C1至克级。为后续的研究打下了基础。由于分离过程中发现B-type的PCO在放置一段时间后会有A-type的PCO成分生成，我们首次尝试利用HPLC、LC-MS、NMR等技术对B-type向A-type PCO三聚体转化的条件（温度、pH值、自由基以及氧化酶）和机制进行了研究。结果表明该转化速度显著受到温度、自由基和氧化酶等氧化条件的影响，而转化率却不受上述条件的影响。通过对PCO三聚体的氧化转化产物进行分离鉴定，推测B-type向A-type PCO转化机制是通过醌甲基中间体完成的。该实验结果提示植物中B-type PCO成分在自由基和氧化酶的作用下可以通过醌甲基中间体向A-typePCO类成分转化。 PCO成分稳定性很差，在体内的生物利用度较低，同时文献报道PCO甲基化产物是PCO成分在体内的二相代谢产物之一，故我们对PCO成分进行了部分甲基化修饰以改善其在体内的生物利用度和稳定性，也为后期PCO的甲基化代谢产物的活性研究提供了对照品。我们利用碘甲烷试剂在弱碱性条件下超声反应的方法制备了PCO的一甲基取代的衍生物，利用ODS C18柱层析和RP-HPLC半制备的方法分离纯化得到单体，同时利用INS-1大鼠胰岛瘤细胞模型对产物的降血糖活性进行了筛选和比较。结果从PCO甲基化产物中分离纯化得到5个PCO三聚体terminal unit上3'-OH甲基取代的衍生物，均为新化合物;降血糖活性筛选的结果显示甲基化后PCO对INS-1细胞的氧化保护作用明显下降，说明terminal unit上3'-OH是PCO类成分的主要活性基团，提示该位置在体内被甲基化后的代谢产物的生物活性可能会明显下降。在化学成分研究的基础上，利用INS-1细胞模型和db/db小鼠模型我们对两种类型PCO提取物进行了体内外降血糖活性的研究，同时对单体PCO成分的降血糖作用进行了筛选，并对活性成分的作用机制进行了探讨。结果表明两种类型的PCO对体内外模型均有一定的降血糖作用，但其作用存在着差异:B-type PCO主要体现在降血脂作用上，而A-type PCO主要体现在对胰岛细胞的保护作用上，改善了受损伤胰岛的功能。单体活性筛选和作用机制研究结果表明A-type PCO成分cinnamtannin D1(CD-1)对氧化损伤的胰岛INS-1细胞具有明显的保护作用，显示出较好的降血糖作用，其作用机制是通过降低细胞内ROS水平和大幅度减少iNOS的表达来减少棕榈酸或者H2O2诱导的胰岛β细胞氧化损伤，保护β细胞的功能和恢复细胞活力，同时减少胰岛中细胞的凋亡和恢复其胰岛素分泌功能。另外，我们利用concanavalin A(ConA)和Lipopolysaccharide(LPS)诱导的脾细胞增殖模型以及牛Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎模型(CIA)和1-氟-2，4-二硝基苯诱导的迟发型超敏反应(DTH反应)模型对PCO类提取物和单体成分的治疗类风湿关节炎的作用进行筛选比较。结果表明，化合物CD-1和A-type PCO类提取物对ConA和LPS诱导的脾细胞增殖均具有很好的抑制作用，且对CIA和DTH两个模型动物均有较好的治疗作用。结果提示CD-1或者A-type PCO类提取物可以作为潜在的治疗免疫系统疾病如类风湿等的替代药物。由肉桂和黄连组成的交泰丸在文献报道有明显的降糖作用，且作用优于肉桂和黄连单味药，但其机理尚不清楚。我们首次利用caco-2细胞模型考察了肉桂中具有降糖作用的PCO(CD-1)成分对小檗碱吸收和转运的影响。结果表明，CD-1是P-glycoprotein(P-gp)的抑制剂，能够明显降低P-gp对小檗碱的外排作用，促进小檗碱的吸收和转运。该实验结果为交泰丸降糖作用优于黄连和肉桂单味药提供了新的依据，也为开发降糖药提供的新的思路。综上，通过对桂皮PCO成分系统的化学组成和药效学研究，加深了对桂皮药材的认识，为进一步开发桂皮的药用价值提供了参考，也为开发新的降血糖和治疗类风关的药物制剂提供了依据。收起

关键词 : 桂皮低聚原花青素氧化转化降血糖作用免疫抑制

4. 块根糙苏抗糖尿病化学成分研究

[学位论文] 杨颖博上海中医药大学 2014年博士导师: 陈凯先共145页

摘要 : 糖尿病是21世纪危害人类健康最严重的疾病之一，其中2型糖尿病占90％以上。α-葡萄糖苷酶抑制剂能有效降低餐后血糖，是目前应用最广的治疗2型糖尿病的一线用药。我们前期对多种植物进行α-葡萄糖苷酶抑制活性筛选，发现唇形科糙苏属多年生草本植物块... 展开糖尿病是21世纪危害人类健康最严重的疾病之一，其中2型糖尿病占90％以上。α-葡萄糖苷酶抑制剂能有效降低餐后血糖，是目前应用最广的治疗2型糖尿病的一线用药。我们前期对多种植物进行α-葡萄糖苷酶抑制活性筛选，发现唇形科糙苏属多年生草本植物块根糙苏（Phlomis tuberosaL.）的95％乙醇提取物具有显著的α-葡萄糖苷酶抑制活性。本论文以阐明块根糙苏抗糖尿病作用的物质基础，发现具有高效降糖活性的α-葡萄糖苷酶抑制剂为目标，依次从降糖活性部位筛选、化学成分研究及快速筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂三个方面对块根糙苏进行系统研究，具体内容如下: 首先运用体内外实验对块根糙苏进行降糖活性部位筛选。α-葡萄糖苷酶体外抑制活性筛选，发现乙酸乙酯萃取部位具有最好的抑制α-葡萄糖苷酶活性;分别对四氧嘧啶造模糖尿病小鼠及基因敲除糖尿病（db/db）小鼠进行测试，发现块根糙苏乙酸乙酯萃取部位能显著降低糖尿病小鼠的餐后血糖，具有显著的降血糖作用。因此确定乙酸乙酯萃取部位为块根糙苏抗糖尿病的重要活性部位。在明确块根糙苏乙酸乙酯萃取部位为降糖活性部位的基础上，利用多种分离分析技术对活性部位进行化学成分研究，共分离得到68个化合物。包括10个二萜:14-hydroxyabieta-8,11,13-triene-11-carbaldehyde-18-oic-12-carboxy-13-(1-hydroxy-1-methylethyl)-lactone(1)14-hydroxyabieta-8,11,13-triene-17-oic-12-carboxy-13-(1-hydroxy-1-methylethyl)-lactone(2),14,16-dihydroxyabieta-8,11,13-triene-15,17-dioic acid(3),15,16-eposy-8,13(16),14-labdatrien-19-ol(4),糙苏酸(phlomisoic acid,5),15,16-eposy-8,13(16),14-labdatrien(6),baiyunol(7)，baiyunoside(8)，phlomisosideⅤ(9)，phlomisosideⅣ(10);4个喹啉色素类:flavoglaucin(11), aspergin(12), isodihydroauroglaucin(13),:2-(2',3-epoxy-1'-heptenyl)-6-hydroxy-5-(3"-methyl-2"-butenyl)benzaldehyde(14);10个环烯醚萜:山栀子苷甲酯(15)，8-O-乙酰基山栀子苷甲酯(16)，6-O-乙酰基山栀子苷甲酯(17)，1-epishanzhigenin methyl ester(18), phloyosideⅠ(19), phloyosideⅡ(20), sesamoside(21),6'-galloyl-Sesamoside(22), dehydropentstemoside(23),6'-O-β-D-glucopyranosyl sesamoside(24)，10个苯乙醇苷:毛蕊花糖苷(25)，异毛蕊花糖苷(26)，连翘酯苷B(27)，3'"-OMe-Forsythoside B(28), cistanoside E(29), cistanoside F(30), phlomisethanoside(31)，红景天苷(32)， hydrangeifolinⅠ(33)，benzyl1-O-β-D-glucopyranoside(34)，5个甾体:β谷甾醇(Stigmasterol，35)，豆甾醇(36)，胡萝卜苷(37)，豆甾烯二酮(38)，22-脱氢豆甾烯二酮(39)，8个黄酮:木犀草素(40)，芹菜素(41)，槲皮素(42)，槲皮素-4'-O-β-D-萄糖苷(43)，异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷(44)，槲皮苷(45)，槲皮素-3-O-β-D-萄糖苷(46)，刺槐苷(47)，13个酚酸:鞣花酸(53)，没食子酸(54)，没食子酸乙酯(55)，4-羟基苯甲酸(56)，3，4-二羟基苯甲酸(57)，肉桂酸(58)，对羟基肉桂酸(59)，咖啡酸(60)，1-O-咖啡酰奎宁酸(63)，奎宁酸(65)，绿原酸(66)，阿魏酸(67)，阿魏酸辛酯(68)，以及8个其他类成分:1，4-cyclohexanedione，2-(3，7，11，15，19，23，27，31，35，39-decamethyl-2，6，10，14,18,22,26,30,34,38-tetracontadecaen-1-yl)-5,6-dimethoxy-3-methyl(48),5-羟甲基糠醛(49)， methyl-5-(hydroxymethyl) furan-2-carboxylate(50)，正十八烷酸(51)，油酸(52)，3，5-dimethoxy-4-hydroxy-benzene carbonic-1-O-β-D-glucoside(61)，4-羟基-3-甲氧基苯甲醛(62)，2-O-丁基-α-D-呋喃果糖苷(64)。其中，化合物1-4为新化合物，6为新的天然产物。最后，针对目前从植物提取物等复杂体系中快速分离筛选活性天然产物面临的困难，本论文首次创建了二维制备液相系统(Sepbox2D)与薄层生物自显影技术联用快速导向分离复杂体系中活性天然产物的策略，并成功运用于块根糙苏中α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选分离中。运用该策略首次从块根糙苏乙醇提取物乙酸乙酯萃取部分分离获得具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物20个。α-葡萄糖苷酶体外抑制活性实验发现其中15个化合物表现出较强的α-葡萄糖苷酶抑制活性，IC50分别为179.2，124.4，121.1，67.7，482.0，210.4，518.3，1203，695.9，427.8，562.5，229.3，283.0，255.2，371.1μM，均强于阳性药阿卡波糖（IC50为3760.0μM），提示这些化合物具有潜在的抗糖尿病功效。综上，本论文初步阐明了块根糙苏抗糖尿病作用的物质基础，并发现了具有潜在降糖活性的α-葡萄糖苷酶抑制，为进一步开发高效、新型的抗糖尿病药物提供了先导化合物;所创建的二维制备液相系统(Sepbox2D)与薄层生物自显影技术联用导向分离的策略将为从复杂体系中高效、快速分离活性天然产物提供借鉴和参考。收起

关键词 : 块根糙苏抗糖尿病作用化学成分二维制备液相系统薄层生物自显影 &alpha -葡萄糖苷酶

5. 新型二肽基肽酶抑制剂的药效评价和钙流抑制剂拮抗棕榈酸诱导的胰岛β细胞凋亡的机制研究

[学位论文] 周雨人中国科学院大学 2015年博士导师: 陈凯先共129页

摘要 : 本博士论文共分两个部分，第一部分为新型DPP-4抑制剂的药效学评价;第二部分为钙流抑制剂拮抗棕榈酸诱导的胰岛β细胞损伤的机制研究。二肽基肽酶-4(Dipeptidyl Peptidase-4，DPP-4)是一个以同型二聚体存在于细胞膜上和血浆中的多功能酶，在哺乳... 展开本博士论文共分两个部分，第一部分为新型DPP-4抑制剂的药效学评价;第二部分为钙流抑制剂拮抗棕榈酸诱导的胰岛β细胞损伤的机制研究。二肽基肽酶-4(Dipeptidyl Peptidase-4，DPP-4)是一个以同型二聚体存在于细胞膜上和血浆中的多功能酶，在哺乳动物组织中也有广泛表达。DPP-4能够裂解包括胰高血糖素样肽1(Glucagon like peptide-1，GLP-1)在内的多种肽类激素，而GLP-1与2型糖尿病有着密切联系。近年来，DPP-4抑制剂作为一类新型2型糖尿病治疗药物，受到密切关注。伴随着第一个DPP-4抑制剂西格列汀(sitagliptin)在美国上市，对DPP-4的研究也越来越深入，各大跨国药企纷纷投入新型DPP-4抑制剂的研发中。我们根据已报道的上市及在研DPP-4抑制剂结构与DPP-4酶的结合模式，设计并合成了一系列新型DPP-4抑制剂，经过体外酶活水平筛选和体内活性评价，得到了一系列与已上市药物活性相近或更优的新型DPP-4小分子抑制剂。在对DPP-4的体外抑制活性评价中，有12个化合物的抑制活性优于上市药物西格列汀。动物水平的在体实验结果进一步显示其中一些化合物能够显著增强小鼠口服葡萄糖耐量水平，其中，化合物TPN6655、TPN6573、TPN6715的在体急性降糖药效接近阳性药，TPN6691在口服8小时或12小时后，在体急性降糖药效优于阳性药。此外，它们对DPP-4的选择性高，抑制活性大于对DPP-4同源丝氨酸蛋白酶家族DPP-8和DPP-91000倍以上，明显好于大多数上市药物。综上所述，这些新型DPP-4小分子抑制剂具有良好的开发前景，有望成为一类有自主知识产权的新型抗糖尿病药物，化合物TPN6691提供了开发新型长效DPP-4抑制剂的可能。与肥胖有关的2型糖尿病中，脂毒性与胰岛β细胞功能损伤和凋亡密切相关;胰岛β细胞长期暴露于高浓度游离脂肪酸中会出现胰岛素分泌功能障碍和细胞凋亡增加。因此，防止高脂引起的β细胞功能异常和凋亡对糖尿病防治有重要意义。为了研究胰岛β细胞钙流的调节是否对胰岛β细胞脂毒性有拮抗作用，我们采用了两个小分子钙流抑制剂:硝苯地平和二氮嗪，硝苯地平为L型钙通道抑制剂，二氮嗪为钾通道活化剂。我们首先研究了这两个钙流抑制剂是否对棕榈酸损伤的胰岛β细胞有保护作用，结果发现硝苯地平和二氮嗪能够减少棕榈酸损伤下胰岛β细胞株MIN6的凋亡;其次检测了与内质网应激和凋亡相关的蛋白表达，结果显示硝苯地平和二氮嗪有效抑制了棕榈酸诱导的MIN6细胞凋亡通路相关蛋白表达的上调;更进一步，通过使用Fluo-4荧光探针检测胞内Ca2+浓度，我们证实了硝苯地平和二氮嗪能有效抑制棕榈酸引起的MIN6细胞内Ca2+浓度增加;最后我们通过GSIS实验检测了化合物对胰岛素分泌功能的影响，实验结果表明，硝苯地平和二氮嗪能够抵抗棕榈酸对MIN6细胞胰岛素分泌能力的损伤，有效保护胰岛β细胞功能。因此，利用小分子抑制剂调节胰岛β细胞钙流，在预防和治疗糖尿病过程中具有一定意义。收起

关键词 : DPP-4抑制剂降血糖作用钙流策略胰岛&beta 细胞药效学评价诱导凋亡

6. 桂皮多酚提取物及单体抗糖尿病药效机制研究

[学位论文] 孙鹏上海中医药大学 2015年博士导师: 陈凯先共120页

摘要 : 研究目的：来源于樟科樟属植物肉桂、柴桂、阴香等的树皮通称为桂皮，是一类具有广泛应用的天然产物，其在抗糖尿病领域的应用多有报道。但目前对桂皮的降糖活性研究仍然存在部分争议，桂皮中活性成分的药理作用也缺乏深入研究。本论文利用不同... 展开研究目的：来源于樟科樟属植物肉桂、柴桂、阴香等的树皮通称为桂皮，是一类具有广泛应用的天然产物，其在抗糖尿病领域的应用多有报道。但目前对桂皮的降糖活性研究仍然存在部分争议，桂皮中活性成分的药理作用也缺乏深入研究。本论文利用不同来源的桂皮提取物及其中不同的多酚单体，在分子、细胞及动物水平研究桂皮提取物及多酚单体活性成分的抗糖尿病作用机制，为基于桂皮提取物的新型抗糖尿病药物研究提供理论依据。研究方法： 1，利用自发2型糖尿病db/db小鼠模型，评价来源于不同樟科樟属植物肉桂及柴桂多酚提取物在动物水平降低血糖、改善胰岛素抵抗及调节胰岛素分泌的作用;2，结合动物实验中生化指标、形态学数据，在体外胰岛β细胞、脂肪细胞、肝细胞中评价多酚提取物的作用机制;3，对提取物中分离得到的不同结构的单体化合物对胰岛β细胞保护、增加胰岛素敏感性的作用进行研究，阐明多酚提取物中的不同成分发挥降糖作用的分子机制。研究结果： 1，来源于肉桂及柴桂的桂皮多酚提取物在自发2型糖尿病db/db小鼠模型中长期给药后，小鼠随时血糖、糖耐量、胰岛素敏感性均得到显著改善。其中，多酚成分主要为A型原花青素多聚体的柴桂桂皮提取物表现出更为明显增加糖尿病小鼠血清胰岛素水平、改善胰岛β细胞胰岛素分泌功能，而多酚成分主要为B型原花青素多聚体的肉桂桂皮提取物表现出更为明显的抑制脂肪、肝脏细胞甘油三酯分解，增加胰岛素敏感性的作用; 2，结合肉桂及柴桂桂皮提取物成分分析，动物实验结果提示成分不同的桂皮多酚提取物具有不同的抗糖尿病作用机制。进一步的细胞实验证实，A型原花青素多聚体多酚含量较多的柴桂提取物较B型原花青素多聚体多酚含量较多的肉桂提取物具有更为显著的保护胰岛β细胞的作用，即减少2型糖尿病中胰岛β细胞损伤、增强胰岛素分泌功能。而肉桂多酚提取物较柴桂多酚提取物具有更显著的促脂肪细胞分化、抑制甘油三酯脂解，从而增加胰岛素敏感性的作用，与动物水平实验结果一致。 3，从不同桂皮提取物中分离得到了6种主要的原花青素多酚单体。其中，柴桂提取物中主要包括2种A型多酚三聚体，肉桂提取物中主要包括多酚二聚体及B型多酚三聚体。结果发现，在这6种多酚单体化合物中，A型三聚体多酚能够更有效保护胰岛β细胞、减少细胞凋亡、改善胰岛功能;而B型三聚体多酚及四聚体多酚具有更好的促脂肪细胞分化、抑制脂解、增强胰岛素敏感性的作用。结论：作为一类具有潜力的抗糖尿病天然产物，对桂皮提取物的药理作用进行深入研究对阐明其抗糖尿病作用机制及新型抗糖尿病药物研发具有重要意义。本论文结果证实，不同含量、成分的多酚单体是不同来源的桂皮提取物在体作用机制异同的物质基础，其协同作用是桂皮提取物保护胰岛β细胞、增加胰岛素敏感性从而发挥抗糖尿病药效的重要原因。收起

关键词 : 桂皮原花青素多聚体 2型糖尿病胰岛&beta 细胞胰岛素敏感性药效机制

7. 巴东过路黄化学成分及药理活性研究

[学位论文] 曾鹏上海中医药大学 2013年硕士导师: 陈凯先共97页

摘要 : 巴东过路黄（Lysimachia patungensis Hand.-Mazz.）为报春花科珍珠菜属植物，分布于湖北、湖南、广东、江西、安徽等地。为中国特有植物，常作为中药过路黄的替代品用于治疗肝炎、热淋、石淋等症，具有悠久的民间用药历史。但有关该植物化学成分和药... 展开巴东过路黄（Lysimachia patungensis Hand.-Mazz.）为报春花科珍珠菜属植物，分布于湖北、湖南、广东、江西、安徽等地。为中国特有植物，常作为中药过路黄的替代品用于治疗肝炎、热淋、石淋等症，具有悠久的民间用药历史。但有关该植物化学成分和药理活性的研究报道较少。为了明确巴东过路黄的药效物质基础，同时寻找结构新颖、活性显著的小分子实体，我们选取了其干燥全草作为研究对象，对其化学成分进行了系统研究。运用硅胶、大孔树脂DM-130、 RP C-18、 MCI gel CHP-20P和Sephadex LH-20柱层析填料，以及制备、半制备高效液相色谱仪对巴东过路黄95％乙醇提取物进行分离纯化，并结合多种波谱分析方法(LC-ESI-MS、 ESI-MS、 EI-MS、 HR-ESI-MS、NMR和IR等)进行结构鉴定，从该植物中分离并鉴定了38个化合物，分别为:Ardisiacrispin A(LPH-1), Ardisiacrispin(LPH-2), Loniceroside D(LPH-3),Loniceroside F(LPH-4), Loniceroside B(LPH-5),3-O-α-L-arabinopyranosyl hederagennin 28-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosyl(LPH-6),(1 S,3S)-1-methyl-1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid(LPH-7),(1R，3S)-1-methyl-1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid(LPH-8),(3S)-1,2,3,4-tet rahydro-β-carboline-3-carboxylic acid(LPH-9), L-Tryptophan(LPH-10), Neoschaftoside(LPH-11), Schaftoside(LPH-12), Isoschaftoside(LPH-13)，杨梅苷(LPH-14)，槲皮苷(LPH-15),2-hydroxynaringenin-4'-O-glucopyranoside(LPH-16),Quercetin-3,3'-di-O-α-L-rhamnoside(LPH-17), Liquiritinapioside(LPH-18)，芦丁(LPH-19), Methyl-p-coumarate(LPH-20),4'-dihydrophaseic acid(LPH-21),(3S,5R,6S,7E)-3,5,6-trihydroxy-7-megastigmen-9-one(LPH-22), Vaccihein A(LPH-23),3,5-dihydroxycinnamic acid(LPH-24), Vaccihein B(LPH-25), Naringenin7-O-glucopyranoside(LPH-26), Methyl3-(2-O-β-D-glucopyranosyl-3-hydroxy-5-methoxyphenyl) propionate(LPH-27),3-hydroxymegastigmasta-5,7-dien-9-one-3-O-β-D-glucopyranoside(LPH-28),(6S,9S)-roseoside(LPH-29), Benzyl-β-D-glucopyranoside(LPH-30), Icariside C1(LPH-31), Schensianolside A(LPH-32), Icariside C2(LPH-33),2,4,6-trihydroxy acetophenone2-O-glucopyranoside(LPH-34),3,4,α-trihydroxy-methylphenylpropionate(LPH-35), Licochalcone B(LPH-36), Tetrahydroxymethoxy chalcon(LPH-37)，丁香酸(LPH-38)。其中化合物4、17和27为新化合物;化合物3、5-13、16、18、21-25和28-34为首次从珍珠菜属植物中分离得到;除了化合物1和2以外，其余化合物均为首次从该植物中分离得到。此外，通过体外免疫活性筛选实验发现，化合物1、2在100和10μM浓度下对ConA诱导的正常小鼠T淋巴细胞增殖有明显的抑制作用，但其抑制活性是由于化合物自身的毒性作用所产生。化合物15、16在100和10μM浓度下仅表现出对正常小鼠T淋巴细胞的毒性作用，未表现出增殖抑制作用。在体外抗肿瘤活性筛选实验中发现，化合物1、2对HL60细胞和A549细胞，具有一定的增殖抑制活性，IC50介于1-10μM之间。收起

关键词 : 巴东过路黄化学成分药理活性毒性作用分离工艺

8. 基于分子对接方法的抗肝纤维化复方中活性成分预测及作用机制研究二氢杨梅素的结构改造和生物活性研究

[学位论文] 钟建青上海中医药大学 2011年硕士导师: 陈凯先共77页

摘要 : 细胞信号传导具有多通路、多环节、多层次等特点。信号通路调控细胞对刺激信号的反应，从而发挥复杂联系与整体协调的作用。从细胞信号传导角度认识肝纤维化的发病进程，有利于深入了解其中的分子病理机制，进而发现药物体内作用的有效靶标。传统中医... 展开细胞信号传导具有多通路、多环节、多层次等特点。信号通路调控细胞对刺激信号的反应，从而发挥复杂联系与整体协调的作用。从细胞信号传导角度认识肝纤维化的发病进程，有利于深入了解其中的分子病理机制，进而发现药物体内作用的有效靶标。传统中医药复方用药具有多种成分、多重环节、多个途径协同功效的作用特点，对病理机制复杂的疾病可发挥综合优势。现代中医药实验表明，中草药中相当数量的活性成分具有明显的抗纤维化药理活性。本论文的第一部分针对肝纤维化发病机制中的关键激酶进行梳理，选定TGFβ、ERK、FXR、PDGF、PPARγ和VEGF受体蛋白作为肝纤维化信号通路的关键靶标，同时系统地收集并建立了含918个从临床常用的27味抗纤维化中药中分离得到的天然产物小分子的三维(3D)结构数据库及相对应的中草药信息，然后采用分子对接方法，完成了全部918个小分子化合物与6个靶标的分子对接，计算预测了一系列与上述纤维化药物靶标群可能结合的中药活性成分。作为对照，实验还完成了肝纤维化密切相关的6个靶标蛋白的激酶抑制剂/激动剂小分子3D结构数据库中全部136个激酶抑制剂/激动剂与肝纤维化信号通路关键激酶受体的分子对接。根据分子对接结果，挑选出了47个潜在单通路激酶抑制剂/激活剂和52个潜在多通路激酶抑制剂/激活剂。综合分析分子对接结果和已有文献报道，最终挑选出了155种中药小分子，作为潜在高活性的抗肝纤维化天然产物，将开展进一步的生物实验验证工作。本论文的第二部分系统分析了近年来国内外文献对于天然黄酮类化合物及其衍生物的构效关系研究方面的文献报道，依据不同的药理活性进行分类（包括：抗肿瘤、抗氧化、抗炎症、心血管保护作用、抗病毒、抗菌），总结了该类化合物的构效关系研究进展，期望能为黄酮类衍生物的设计与合成提供参考。二氢杨梅素(DMY)是大量存在于自然界中的天然二氢黄酮化合物，具有毒性小、药理活性丰富的优点，但因其生物利用率不高，限制了它的广泛应用。为合理利用DMY丰富的天然资源，本论文的第三部分以DMY为先导化合物，对其进行结构改造，设计合成了7种具有较强激酶活性的新型二氢黄酮类衍生物。激酶抑制/激动活性测定结果表明，它们是AURA，EGFR,HER2，INSR,KDR,SYK和ZAP70激酶的抑制剂，IC50在0.06-75.5μM范围内；另外，部分化合物能激动PKCi，EC50在5.20-66.3μM范围内。这些结果为DMY的进一步结构优化与开发应用打下了基础。收起

关键词 : 分子对接方法肝纤维化二氢杨梅素结构改造生物活性

9. 靶向SOS1小分子调控剂的发现及药理活性评价

[学位论文] 周桂镇南京中医药大学 2023年硕士导师: 陈凯先共71页

摘要 : KRAS是人类癌症中最常见的突变癌基因之一，约有30％的癌症中存在KRAS突变。KRAS蛋白是一种GTP酶结合蛋白，具有内在的GTP酶活性，可以在非活性的GDP结合形式和活性的GTP结合形式之间循环。KRAS突变导致其异常持续激活，进而激活下游信号通路，如MAPK... 展开 KRAS是人类癌症中最常见的突变癌基因之一，约有30％的癌症中存在KRAS突变。KRAS蛋白是一种GTP酶结合蛋白，具有内在的GTP酶活性，可以在非活性的GDP结合形式和活性的GTP结合形式之间循环。KRAS突变导致其异常持续激活，进而激活下游信号通路，如MAPK和PI3K等信号通路，涉及细胞的生长、增殖和侵袭等生命活动，最终导致肿瘤的发生和发展。因此，KRAS突变被认为是很多癌症的重要致癌因素之一。由于KRAS蛋白表面光滑，缺少与小分子药物结合口袋，过去一度认为KRAS不可成药。近年来，针对KRAS突变治疗研究取得了一定进展，靶向KRASG12C突变的小分子药物（如AMG510、MRTX849）相继上市，并且在临床治疗中显示出显著疗效。然而，这些抑制剂仅适用于KRASG12C突变的癌症，对于其它KRAS突变，目前仍缺乏有效的治疗手段。因此，寻找新的泛KRAS调控剂成为了治疗KRAS突变驱动癌症的一个重要研究方向。 SOS1是KRAS重要的鸟苷酸交换因子，能够将KRAS由非活化的GDP结合状态转化为活化的GTP结合状态，抑制SOS1能够阻止KRAS及其下游信号的激活，并且已经被证实是治疗KRAS驱动癌症的有效策略。在本文第二章，我们首先设计并合成了一系列SOS1抑制剂，通过基于SOS1介导的KRAS鸟苷酸交换实验对化合物进行了体外活性评价，筛选出数个有潜力的候选化合物，其中包括化合物8u。然后我们建立了蛋白热迁移方法，证明这类化合物与SOS1存在相互作用，并使用分子对接模型进一步证实了 8u与阳性化合物存在类似的结合模式。我们接着在细胞水平评估了这类化合物的活性，发现化合物8u在携带不同KRAS突变的细胞中表现出最好的抗增殖活性，其IC50与阳性化合物BI-3406相当，同时8u以剂量依赖方式抑制KRAS下游效应因子ERK和AKT的磷酸化。此外，8u与KRASG12C或KRASG12D抑制剂联合给药能够增强对癌细胞的抗增殖作用。这些结果共同表明8u是一种具有潜力、新颖的SOS1抑制剂，有进一步开发的可能。在本文的第三章，我们以SOS1抑制剂BI-3406为靶蛋白配体，通过一系列长度和化学组成不同的Linker与VHL-E3泛素连接酶配体相连，设计并合成了一系列靶向SOS1的PROTACs。在这些PROTACs中，ZZ151在不同KRAS突变细胞系中表现出强效、协同并且高度特异性的SOS1降解活性。在SOS1-PROTAC分子Linker部分进行构效关系研究的过程中，我们发现该类PROTAC的降解活性对Linker的化学组成十分敏感，仅改变ZZ151中Linker部位的一个重原子就会导致该PROTAC诱导三元复合物形成的能力显著降低，从而显著削弱其SOS1降解活性。该降解活性悬崖的现象指明了 PROTAC药物开发过程中对Linker部分进行修饰的边界。此外，ZZ151在一系列携带不同KRAS突变的癌细胞上表现出比抑制剂BI-3406更出色的抗增殖活性。并且，我们还在KRASG12D突变的胰腺癌和KRAS G12V突变的结直肠癌异种移植瘤小鼠模型中评价了 ZZ151的体内活性，结果显示ZZ151具有良好的药代动力学特征，能够显著抑制肿瘤的生长，免疫印迹和免疫组化实验进一步证实了ZZ151能够剂量依赖性地诱导SOS1降解，并抑制ERK的磷酸化。这些结果共同表明ZZ151是一个有前景的泛抗KRAS突变的先导化合物，值得进一步开发。综上所述，本研究基于KRAS鸟苷酸交换因子SOS1开发了抑制剂8u和降解剂ZZ151,并在分子水平、细胞水平和动物水平上全面评价了其药理活性。结果表明，靶向SOS1的抑制剂和降解剂能够有效治疗多种KRAS突变驱动的肿瘤，8u和ZZ151有进一步开发成靶向KRAS突变肿瘤的药物的潜力。收起

关键词 : 靶向SOS1小分子调控剂靶向蛋白降解嵌合体癌细胞抗增殖作用

10. 抗肿瘤靶点WRN和STING小分子调控剂的发现及药理活性研究

[学位论文] 张柯柯南京中医药大学 2023年硕士导师: 陈凯先共67页

摘要 : MSI(microsatellite instability)即微卫星不稳定性，是由于DNA错配修复缺陷(deficient mismatch repair,dMMR)所导致的散布在整个基因组中的短重复DNA序列如微卫星(microsatellite) 的变异性，普遍存在于多种癌症中。WRN(Werner helicase)是DNA解旋酶... 展开 MSI(microsatellite instability)即微卫星不稳定性，是由于DNA错配修复缺陷(deficient mismatch repair,dMMR)所导致的散布在整个基因组中的短重复DNA序列如微卫星(microsatellite) 的变异性，普遍存在于多种癌症中。WRN(Werner helicase)是DNA解旋酶RecQ家族的成员，在DNA复制、DNA重组、DNA损伤修复、基因转录、维持端粒稳定等方面具有重要作用。最近多项研究确证了 WRN是dMMR/MSI-H(由DNA错配修复缺陷导致的微卫星高度不稳定性)癌症的合成致死靶标，对维持dMMR/MSI-H癌细胞的活力至关重要，尤其在结直肠癌细胞系中高度敏感。WRN敲除可诱导dMMR/MSI-H细胞中的DNA损伤和广泛的基因组不稳定性，从而促使细胞凋亡。因此，开发WRN抑制剂作为单药治疗或与靶向药物、化疗、免疫疗法联合治疗MSI癌症具有重要意义。dMMR细胞经历微卫星不稳定性，在(TA)n重复处形成大规模扩增，(TA)n重复扩增大多位于编码区之外，因此可能不会产生免疫原性新抗原，然而由于WRN缺失导致(TA)n处的DNA损伤基序可以触发先天的胞质DNA和RNA依赖的传感和信号通路，因此WRN抑制剂或可用于刺激STING免疫响应，可能与STING激动剂联合作为治疗方案。干扰素基因刺激因子(STING)是固有免疫反应的关键信号转导分子，STING的激活在诱导Ⅰ型干扰素(IFNs)和促炎细胞因子分泌、防御病毒感染及调节体内自发性抗肿瘤免疫反应过程中发挥重要作用。近年来，STING激动剂的研究已经取得了突破性进展，但是开发结构多样、成药性更好的STING激动剂仍然面临着严峻的挑战。本文第二章，通过高通量酶活筛选验证，我们发现了具有较强靶向抑制WRN活性的天然产物——千金藤素(Cepharanthine,CEP),CEP是从中药千金藤属植物中提取的单体，此前未有报道其与MSI癌症的相关性，本研究首次发现其可以作为靶向WRN的抑制剂,抑制MSI癌细胞和异种移植瘤的增殖。分子水平上，我们利用表面等离子共振(SPR)验证了 CEP与WRN蛋白的直接结合。细胞水平上，克隆形成实验和细胞增殖实验共同表明，CEP对MSI癌细胞有显著的增殖抑制作用。蛋白免疫印迹技术(Western Blot)被用于探究CEP发挥增殖抑制作用的可能的分子机制，结果表明，CEP能够以剂量依赖的方式诱导DNA损伤，这可能是CEP靶向WRN抑制MSI癌细胞增殖的潜在基础。最后，在动物水平上，我们建立了 MSI结直肠癌细胞LoVo异种移植瘤小鼠模型，发现CEP能够有效抑制小鼠异种移植瘤的生长，表现出良好的体内活性。本研究拓展了 CEP在抗肿瘤领域的应用，为活性天然产物的发现提供了可行性验证，同时为抗肿瘤靶点WRN的药物筛选提供了新思路。本文第三章，我们针对STING肿瘤免疫开发靶向STING的激动剂，对STING已知的激动剂SR-717结构改造后的化合物进行筛选，通过蛋白热迁移（PTS）实验和SEAP报告基因实验得到了具有显著靶向激活STING活性的化合物12L。Western Blot实验和实时荧光定量（RT-qPCR）实验用于检测12L给药后STING下游信号的应答情况，结果显示12L在人源和鼠源细胞中均能够有效激活STING通路，介导下游TBK1、IRF3、p65和STAT3的磷酸化，并以时间和浓度依赖的方式激活靶基因IFNB1、CXCL10和IL6mRNA的转录。在B16.F10黑色素瘤小鼠模型中，12L能够显著抑制黑色素瘤的生长及肺转移情况，并诱导IFNs的产生，其药效明显强于SR-717和已进入I期临床研究的STING激动剂HG381。此外，12L具有更优的药代动力学特性，克服了 SR-717在小鼠细胞中STING激活活性较差的问题，为STING激动剂的结构改造和筛选提供了新思路。收起

关键词 : 沃纳解旋酶合成致死千金藤素干扰素基因刺激因子肿瘤免疫药理活性