中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

[学位论文] 王坤中国中医科学院 2019年硕士导师: 杨岚共80页

摘要 : 双氢青蒿素(DHA)是青蒿素C-10位羰基经四氢硼钠还原为羟基制得的抗疟药物，抗疟活性是青蒿素的8～10倍。现代药理学研究表明，双氢青蒿素除了具有抗疟作用以外，还具有抗肿瘤、抗炎以及免疫抑制等药理活性，具有潜在的临床应用前景。杂质是指药... 展开双氢青蒿素(DHA)是青蒿素C-10位羰基经四氢硼钠还原为羟基制得的抗疟药物，抗疟活性是青蒿素的8～10倍。现代药理学研究表明，双氢青蒿素除了具有抗疟作用以外，还具有抗肿瘤、抗炎以及免疫抑制等药理活性，具有潜在的临床应用前景。杂质是指药品中任何影响其纯度的物质，可以分为有机杂质、无机杂质和残留杂质，其中有机杂质一般为工艺中引入的杂质和降解产物等，由于这类杂质的化学结构通常与活性成分类似或具渊源关系，因此有机杂质又被称为有关物质。根据国内外的文献报道，双氢青蒿素原料及其片剂中存在的主要有关物质为2-[-4甲基-2-氧代-3-(3-氧代丁基)]环己基丙醛(DKA)，2015版《中国药典》第二部中收载了双氢青蒿素原料、双氢青蒿素片剂和双氢青蒿素哌喹片。在2010年及以前的《中国药典》中，双氢青蒿素原料及其片剂均采用薄层色谱法(TLC)检测有关物质，2015版《中国药典》采用主成分自身对照的高效液相色谱法(HPLC)测定有关物质含量，但未按《化学药物杂质研究的技术指导原则》对超过鉴定限度和质控限度的有关物质进行定性鉴别和制订含量限度标准。因此，开展双氢青蒿素原料及其片剂中有关物质研究，对完善该药质量标准、保障用药安全具有重要意义。本文主要从DKA对照品制备和建立双氢青蒿素原料及其片剂中DKA含量测定方法两个方面进行研究。 1.文献综述本文综述了药物有关物质的研究概况，总结了青蒿素类药物(青蒿素、双氢青蒿素、蒿甲醚、蒿乙醚、青蒿琥酯)的有关物质及其测定方法，以及该类药物在酸、碱、高温、氧化、光照等条件的下降解产物。 2.DKA对照品研究双氢青蒿素在无水溴化亚铁作用下转化得到DKA，经硅胶柱层析分离纯化，制得DKA对照品(纯度≥95％);建立了DKA的含量检测方法，并对DKA的稳定性进行了研究。共制备DKA对照品22批次，DKA反应得率约为50％，并制备了DKA对照品30g用于安全性评价。 3.双氢青蒿素原料及其片剂中DKA含量测定建立了DKA的外标法和加校正因子的主成分对照品外标法的HPLC含量检测方法，并对不同批次的双氢青蒿素原料及其片剂中的DKA含量进行了测定。外标法采用色谱柱为AgilentEcliseXDB-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为乙腈∶水(37∶63)，流速为1.0mL/min，柱温为15℃，检测波长为216nm，进样体积为40μL。经方法学验证，该方法专属性强，线性及分离度良好，精密度、重复性、稳定性和加样回收率均符合《药品质量标准分析方法验证指导原则》的要求，用所建立方法对13批次双氢青蒿素原料和10批次双氢青蒿素片剂进行了测定。加校正因子的主成分对照品外标法采用色谱柱为AgilentEcliseXDB-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为乙腈∶水(37∶63)，流速为1.0mL/min，柱温为15℃，检测波长为216nm，进样体积为20μL。经方法学验证，该方法专属性强，线性及分离度良好，精密度、重复性、稳定性和加样回收率均符合《药品质量标准分析方法验证指导原则》的要求。三根不同色谱柱测定DKA与双氢青蒿素的校正因子均值为0.256。用所建立的方法对5批次双氢青蒿素原料和5批次片剂进行了测定，并以外标法对校正因子准确性进行验证，结果表明，加校正因子的主成分对照品外标法与外标法测定双氢青蒿素原料及片剂中DKA含量一致。综上所述，本文采用化学合成的方法制备了DKA对照品(纯度≥95％)，建立了外标法和加校正因子的主成分对照品外标法测定双氢青蒿素原料及其片剂中DKA含量的HPLC方法，经方法学验证，两种方法均准确、可靠，可用于双氢青蒿素原料及其片剂中DKA的质量控制。该研究对完善双氢青蒿素原料及其片剂质量标准，保障药品安全性具有重要意义。收起

关键词 : 双氢青蒿素原料双氢青蒿素片剂环己基丙醛化学合成质量控制

2. 双氢青蒿素的质量研究

[学位论文] 刘宁中国药科大学 2001年硕士导师: 张正行;俞如英共82页

摘要 : 双氢青蒿素是青蒿素经硼氢化钠还原而得到的一种半缩醛衍生物,据文献报道,其为大多数青蒿素类药物在体内的主要活性代谢产物,抗疟作用为青蒿素的4-6倍,是中国自行研制开发并生产出来的一类抗疟药.目前,双氢青蒿素已被中国药典2000年版及国际药典第3版... 展开

关键词 : 双氢青蒿素药物质量药物分析

3. 双氢青蒿素联合紫杉醇对人胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的影响

[学位论文] 曹慧南华大学 2016年硕士导师: 李国庆共73页

摘要 : 目的：以人胃癌MGC-803细胞为研究对象，观察双氢青蒿素与紫杉醇对该细胞增殖和凋亡的影响，以初步探讨两药联合是否能起到协同作用，从而为胃癌的化疗提供新思路。方法：体外培养MGC-803细胞，采用CCK-8法于24h分别检测不同浓度双氢青蒿素、紫... 展开目的：以人胃癌MGC-803细胞为研究对象，观察双氢青蒿素与紫杉醇对该细胞增殖和凋亡的影响，以初步探讨两药联合是否能起到协同作用，从而为胃癌的化疗提供新思路。方法：体外培养MGC-803细胞，采用CCK-8法于24h分别检测不同浓度双氢青蒿素、紫杉醇及两药联合对细胞增殖的影响，并用CHOU-Talalay法评估两药联合的效果；用流式细胞仪分析各药物组对细胞周期阻滞的影响；用AO/EB染色剂处理细胞后，在荧光显微镜下观察各药物处理组作用MGC-803细胞后的凋亡情况；用逆转录聚合酶链反应法和免疫蛋白印迹法检测对人胃癌MGC-803细胞的Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响。结果： 1、双氢青蒿素（191.082、955.410、4777.048、23885.240、119426.202ng/ml）、紫杉醇（2.4、12、60、300、1500ng/ml）及两药联合（191.082+2.4、955.410+12、4777.048+60、23885.240+300、119426.202+1500ng/ml）对人胃癌MGC-803细胞均具有增殖抑制作用并呈浓度依赖（p<0.05）；联合用药组的增殖抑制作用优于单一用药组（p<0.05），其中两药小剂量联合用药时呈协同作用，大剂量联合用药时呈拮抗作用。 2、通过流式细胞仪对药物处理后细胞的周期检测，我们发现双氢青蒿素（955.410ng/ml）作用后出现G0/G1期、S期细胞阻滞（p<0.001），紫杉醇(12ng/ml)作用后出现G2/M期细胞阻滞（p<0.001），两药联合（DHA955.410ng/ml+PTX12ng/ml）表现出S期、G2/M期阻滞（p<0.001）；联合用药组相比于紫杉醇用药组有G2/M期细胞阻滞减少（p<0.001）。 3、荧光显微镜观察发现，双氢青蒿素（955.410ng/ml）、紫杉醇（12ng/ml）处理MGC-803细胞24h后出现较多橙黄及橙红色细胞，相比于绿色细胞而言，体积缩小、胞质浓缩，具有凋亡细胞的明显特征。同样条件下，联合组的凋亡细胞数较单药组明显增多，且晚期凋亡细胞数目居多。 4、双氢青蒿素（955.410ng/ml）及紫杉醇（12ng/ml）作用于人胃癌MGC-803细胞后均能促进Bax、Caspase-3的表达，抑制Bcl-2的表达，而两药联合（DHA955.410ng/ml+PTX12ng/ml）表现出更明显的效果，差异均有统计学意义（p<0.05）。结论： 1、双氢青蒿素、紫杉醇对人胃癌MGC-803细胞的增殖抑制呈浓度依赖； 2、两药联合对MGC-803细胞有增殖抑制作用，它们合用时小剂量是协同作用，而大剂量则为拮抗作用； 3、两药均可通过增加Bax、Caspase-3的表达及减少Bcl-2的表达来诱导细胞凋亡。收起

关键词 : 双氢青蒿素紫杉醇胃癌 MGC-803细胞

4. 双氢青蒿素通过活性氧依赖的内质网应激途径诱导舌鳞癌细胞凋亡

[学位论文] 周群南昌大学(医学院) 2020年硕士导师: 邱嘉旋共46页

摘要 : 目的：探讨双氢青蒿素诱导舌鳞癌细胞凋亡的分子机制。方法： 1.CCK-8和克隆形成实验检测双氢青蒿素对舌鳞癌细胞增殖的影响 2.划痕实验检测双氢青蒿素对舌鳞癌细胞迁移能力的影响 3.流式细胞术检测双氢青蒿素对舌鳞癌细胞... 展开

关键词 : 舌鳞癌双氢青蒿素活性氧内质网应激

5. 复方双氢青蒿素对Friend鼠白血病病毒模型作用的实验研究

[学位论文] 何家靖广州中医药大学 2009年硕士导师: 宋健平共43页

摘要 : 目的：观察复方双氢青蒿素对Friend鼠白血病病毒模型的作用效果。方法：⑴Friend鼠白血病病毒模型的建立；⑵白藜芦醇对Friend鼠白血病病毒模型作用的实验研究；⑶双氢青蒿素、白藜芦醇和复方双氢青蒿素对Friend鼠白血病病毒模型作用的比较实验... 展开目的：观察复方双氢青蒿素对Friend鼠白血病病毒模型的作用效果。方法：⑴Friend鼠白血病病毒模型的建立；⑵白藜芦醇对Friend鼠白血病病毒模型作用的实验研究；⑶双氢青蒿素、白藜芦醇和复方双氢青蒿素对Friend鼠白血病病毒模型作用的比较实验研究；⑷复方双氢青蒿素对Friend鼠白血病病毒模型作用的实验研究。结果：①Friend鼠白血病病毒模型造模成功，以脾肿大为特征指标，实验结果显示，病毒对照组鼠脾肿大与正常对照组比，具有显著性差异（P＜0.01）。②白藜芦醇对 Friend鼠白血病病毒模型作用的实验结果显示，白藜芦醇100mg/kg剂量组脾指数抑制率为35.0%、WBC减少率为16.4%、胸腺水平稍有提高，均表现一定程度的作用，但未见有显著性差异。白藜芦醇50、25mg/kg剂量组未表现出作用。③双氢青蒿素、白藜芦醇和复方双氢青蒿素对Friend鼠白血病病毒模型作用的比较实验结果显示，复方双氢青蒿素能表现出更强的抑制Friend鼠白血病病毒所致鼠脾肿大的作用，其高低剂量组脾指数抑制率分别为76.2%、65.5%，均高于单药AZT、双氢青蒿素、白藜芦醇，其中与单药双氢青蒿素、白藜芦醇相比，具有明显的统计学意义（P＜0.05～0.01）。能明显提高感染鼠胸腺重量（P＜0.01），使接近正常鼠胸腺水平，而且与单药AZT、双氢青蒿素、白藜芦醇相比，具有明显的统计学意义（P＜0.05～0.01）。能降低病毒感染鼠血白细胞（WBC）数作用，恢复鼠胸腺水平，其高低剂量组 WBC减少率分别为77.8%、69.3%，均高于其它各单药AZT、双氢青蒿素、白藜芦醇用药组，甚至复方双氢青蒿素高剂量组明显高于单药双氢青蒿素、白藜芦醇各剂量组（P＜0.05～0.01）。可提高CD4+、CD8+、CD4+/CD8+值，与病毒对照组相比，有明显差异（P＜0.05～0.01），且接近正常鼠水平。其中复方双氢青蒿素高剂量组在CD4+、CD8+、CD4+/CD8+值等方面均明显高于AZT（P＜0.05）。④复方双氢青蒿素对Friend鼠白血病病毒模型作用的重复实验结果显示，复方双氢青蒿素高低剂量组的脾指数抑制率为43.9%、36.6%，略高于 AZT阳性对照组，与病毒对照组比较，均具有显著性差异（P＜0.05）。能明显提高感染鼠胸腺重量（P＜0.01），但明显低于正常鼠胸腺水平（P＜0.01），与AZT相比，均具有明显的统计学意义（P＜0.01）。结论：复方双氢青蒿素对Friend鼠白血病病毒致鼠脾肿大具有抑制作用，能恢复胸腺水平，降低病毒感染鼠的WBC数，升高CD4+/CD8+值，且作用明显。收起

关键词 : 白血病复方双氢青蒿素疗效实验

6. 双氢青蒿素片的处方工艺及质量研究

[学位论文] 林蒙华中科技大学 2011年硕士导师: 方建国;王文清共76页

摘要 : 双氢青蒿素是青蒿素及其衍生物的活性代谢物，它适合用于各种类型疟疾的治疗，尤其是对凶险性和抗氯喹恶性疟疾有较好的疗效，并被世界卫生组织评为治疗恶性疟的真正有效药物。另外临床实验表明双氢青蒿素片虽为口服给药，但在疗效上与青蒿琥酯静脉注... 展开双氢青蒿素是青蒿素及其衍生物的活性代谢物，它适合用于各种类型疟疾的治疗，尤其是对凶险性和抗氯喹恶性疟疾有较好的疗效，并被世界卫生组织评为治疗恶性疟的真正有效药物。另外临床实验表明双氢青蒿素片虽为口服给药，但在疗效上与青蒿琥酯静脉注射液相当，优于肌肉注射的蒿甲醚，而在毒副作用、复燃率及研制成本等方面均较低。第一部分:双氢青蒿素片的处方工艺研究目的：通过对双氢青蒿素片的处方筛选、工艺参数的综合研究，确立一条科学、合理、经济、适合工业化生产的工艺路线。方法：根据中国药典对片剂的要求并参照国家食品药品监督管理局颁布的相关指导原则，结合已上市产品的特点，以性状、硬度、脆碎度、崩解时限、溶出曲线、含量等为考察指标，对本品处方所使用辅料的种类和用量进行设计和筛选，并对工艺条件进行优化。结果：双氢青蒿素原料药为疏松絮状物，流动性差，易聚集成团，且难溶于水，为了改善片剂的性状、崩解与溶出，经过筛选，最终确定以微晶纤维素、乳糖、可压性淀粉为填充剂、以羧甲基纤维素钠为内加崩解剂、羧甲基淀粉钠为外加崩解剂、淀粉浆为粘合剂、硬脂酸镁为润滑剂作为本品的处方。中试生产样品实验数据显示，本品性状较好、与市售产品溶出曲线相似、性质稳定，说明本工艺科学合理，适合工业化大生产。第二部分:双氢青蒿素片的质量标准研究目的：对双氢青蒿素片中试样品进行质量研究。方法：相继参考《中国药典》2005年版、《中国药典》2010年版征求意见稿、《中国药典》2010年版双氢青蒿素片质量标准，进行性状、鉴别、检查（有关物质检查、溶出度检查、微生物限度检查等）及含量测定等项目的研究，并优化其研究方法，丰富和完善药典的质量标准。结果：建立了双氢青蒿素片的质量标准，对《中国药典》2010年版的溶出度及含量测定等项目的研究方法进行了改进，完善了药典的质量标准。经检测，4批中试样品均符合规定。第三部分:双氢青蒿素片的稳定性考察目的：为考察本品在温度、湿度、包装等条件的稳定性，了解本品质量随时间变化的规律，为药品生产、包装、贮存、运输等提供科学依据，建立本品的有效期，根据药典附录的要求，对双氢青蒿素片质量标准中的重点项目进行考察。方法：从性状、鉴别、检查及含量测定等项目，采用影响因素试验、加速试验和长期试验对中试4批样品进行稳定性考察。结果：本品在高温、高湿、光照条件下较稳定；在加速试验6个月与长期试验24个月条件下性质也较为稳定，说明本品性质稳定，能够满足临床使用的需要，并暂定其有效期为24个月，密封避光保存。结论：本品结合市售样品的特点，从片重、硬度、脆碎度、稳定性及溶出曲线相似性等方面对处方所用辅料进行筛选并进行工艺优化，确定了一条科学合理而经济的工艺路线，并进行了中试验证。工艺验证结果表明，双氢青蒿素片整个工艺流程物料平衡、稳定可控，表明本品制剂处方和工艺流程符合大工业化生产的要求。同时，对中试产品进行了质量研究以及稳定性考察，结果表明双氢青蒿素片的各质量检查项均符合规定，影响因素试验、加速与长期稳定性试验也均符合要求。另外，在质量标准研究阶段，国家相继出台了《中国药典》2010版征求意见稿、《中国药典》2010版，因此将三版标准的方法都进行了对比，并对其溶出度与含量的测定方法进行了改进，丰富完善了本品的质量标准，质量控制体系体现了创新、科学、合理。收起

关键词 : 双氢青蒿素片处方工艺恶性疟疾

7. 双氢青蒿素对耐顺铂胃癌细胞恶性生物学行为的影响

[学位论文] 张素云福建医科大学 2019年硕士导师: 杨升; 共62页

摘要 : 目的：探讨双氢青蒿素（Dihydroartemisinin,DHA）对耐顺铂胃癌细胞SGC7901/DDP恶性生物行为的影响及分子机制。方法：维压培养耐顺铂胃癌细胞SGC7901/DDP，CCK-8增殖实验获取作用耐顺铂胃癌细胞SGC7901/DDP48小时DHA的IC50，以0umol/L、0.5倍I... 展开目的：探讨双氢青蒿素（Dihydroartemisinin,DHA）对耐顺铂胃癌细胞SGC7901/DDP恶性生物行为的影响及分子机制。方法：维压培养耐顺铂胃癌细胞SGC7901/DDP，CCK-8增殖实验获取作用耐顺铂胃癌细胞SGC7901/DDP48小时DHA的IC50，以0umol/L、0.5倍IC50、1倍IC50、2倍IC50的DHA作用耐顺铂胃癌细胞SGC7901/DDP，检测1-5天耐顺铂胃癌细胞SGC7901/DDP增殖抑制率。同时观察作用48小时耐顺铂胃癌细胞SGC7901/DDP凋亡、侵袭及迁移能力变化；mRFP-GFP-LC3荧光双标腺病毒转染实验、透射电镜检测自噬变化，Westernblot检测调控自噬、凋亡、血管及淋巴管生成相关基因蛋白表达；增敏实验及检测p-gp表达水平，观察DHA对SGC7901/DDP顺铂耐药性影响。结果：DHA对耐顺铂胃癌细胞SGC7901/DDP作用48小时IC50为70umol/L。DHA抑制耐顺铂胃癌细胞SGC7901/DDP增殖生长呈时间-剂量依赖效应（P均＜0.05）。0、35、70、140umol/L浓度DHA作用48小时，随着DHA浓度提高，耐顺铂胃癌细胞SGC7901/DDP凋亡逐步增多（P均＜0.05），平均穿膜细胞数逐步减少（P均＜0.05），划痕修复率亦逐步降低（P均＜0.05）。各实验组自噬相关蛋白Beclin-2、LC3-II/I相对表达量逐步增多，自噬溶酶体、自噬小体形成亦逐步增多（P均＜0.05）；各组间PI3-K/AKT/mTOR信号通路PI3-K、AKT、mTOR蛋白表达无差异，但PI3-P、P-AKT、P-mTOR表达明显减弱（P均＜0.05），而Caspases-8，Caspase-9、Caspases-3蛋白表达明显增强（P均＜0.05），VEGF-A、VEGF-C蛋白表达则显著减弱（P均＜0.05）。无毒剂量DHA作用24h，可逆转耐顺铂胃癌细胞SGC7901/DDP对顺铂耐药性，耐药逆转倍数为2.95；而相关浓度DHA（0、35、70、140umol/L）作用48小时，随DHA浓度提高，p-gp蛋白表达则逐步减低（P均＜0.05）。结论：双氢青蒿素可有效抑制耐顺铂胃癌细胞SGC7901/DDP增殖生长、促程序性死亡、抗侵袭转移作用，其应是通过上调自噬相关基因Beclin1、LC3-Ⅱ的表达，下调自噬负调控信号通路PI3-K/Akt/mTOR而促进耐顺铂胃癌细胞SGC7901/DDP自噬及自噬性死亡发生，并可有力诱导依赖Caspase死亡受体途径和线粒体途径凋亡，削弱VEGF-A、VEGF-C活性抗血管、淋巴管生成，以及减弱P-gp表达，强效逆转耐顺铂胃癌细胞SGC7901/DDP对顺铂耐药性而共同发挥作用。收起

关键词 : 双氢青蒿素顺铂胃癌细胞恶性生物学行为

8. 双氢青蒿素抑制吗啡介导的小胶质细胞活化的作用和机制研究

[学位论文] 关森青岛大学 2022年硕士导师: 梁永新共55页

摘要 : 目的：吗啡成为一种经典的阿片类镇痛药物已被广泛用于临床，然而长期使用吗啡会导致患者对其产生镇痛耐受，因而严重限制了吗啡在临床中的应用。已发现小胶质细胞的激活在吗啡耐受中起重要作用。最近，关于抑制小胶质细胞活化的药物研究越来越... 展开目的：吗啡成为一种经典的阿片类镇痛药物已被广泛用于临床，然而长期使用吗啡会导致患者对其产生镇痛耐受，因而严重限制了吗啡在临床中的应用。已发现小胶质细胞的激活在吗啡耐受中起重要作用。最近，关于抑制小胶质细胞活化的药物研究越来越火热。青蒿素作为一线抗疟药已被广泛熟知，但除了抗击疟疾外，它还具有抗炎、抗肿瘤等多种作用。研究表明，双氢青蒿素（dihydroartemisinin，DHA）可以抑制脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的小胶质细胞的活化。但DHA是否能够通过抑制小胶质细胞的活化缓解吗啡耐受还未有报道。因此，本研究旨在观察DHA抑制吗啡介导的小胶质细胞活化，并探讨其潜在机制，同时为DHA是否能缓解吗啡耐受进行初步探索。方法：为了探究DHA、小胶质细胞活化、吗啡耐受之间的关系，我们通过体外实验全面系统地研究了DHA在小胶质细胞活化和吗啡耐受中的作用和机制。通过吗啡处理小胶质细胞BV-2以模拟构建体外吗啡耐受模型，并设立米诺环素（minocycline）阳性对照组。首先通过浓度梯度（5、10、20、40μM）的DHA处理小胶质细胞BV-2，CCK-8实验检测细胞活力，以确定DHA处理小胶质细胞BV-2的最佳浓度。在预先使用不同浓度的DHA处理吗啡诱导的BV-2细胞中，再通过Westernblot测试小胶质细胞BV-2中IBa-1的表达量变化程度和ELISA检测细胞炎性因子（IL-1β、IL-6和TNF-α）的表达水平变化，以明确DHA在体外抑制吗啡介导的小胶质细胞BV-2活化的作用。使用qRT-PCR方法，进一步研究miR-16在吗啡介导的小胶质细胞BV-2的活化中发挥重要作用。通过体外实验使用miR-16抑制剂处理小胶质细胞BV-2，观察DHA对小胶质细胞BV-2的活化作用。通过Starbase数据库发现，miR-16可以与TLR4结合，通过荧光素酶实验验证miR-16与TLR4之间可直接结合的相关关系，体外使用miR-16抑制剂观察DHA对小胶质细胞BV-2中TLR4/NF-κB信号通路的活化作用。结果：与对照组相比，随着DHA浓度的增加，小胶质细胞BV-2活性逐渐降低，DHA浓度为40μM时，细胞活性最低（P＜0.01），使用20μM的DHA对经吗啡预处理后的细胞活性的抑制作用与minocycline类似，因此选用20μM的DHA作为最佳浓度处理小胶质细胞BV-2。预先使用不同剂量的DHA处理吗啡诱导的BV-2细胞，Westernblot检测结果发现其小胶质细胞BV-2中IBa-1的表达呈剂量依赖性降低（P＜0.01-0.001）。与对照组相比，吗啡处理小胶质细胞BV-2后，ELISA检测显示细胞炎性因子（IL-1β、IL-6和TNF-α）的表达显著增高（P＜0.001）；与吗啡处理组相比，预先使用不同剂量的DHA处理小胶质细胞BV-2，结果发现小胶质细胞中细胞炎性因子（IL-1β、IL-6和TNF-α）的表达呈剂量依赖性降低（P＜0.05-0.001）。与对照组相比，吗啡处理后，IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达水平显著增加（P＜0.001）；与吗啡处理组相比，随着加入不同浓度的DHA，IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达水平显著降低，差异有统计学意义（P＜0.05-0.001）；阳性对照组minocycline也可降低细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达（P＜0.001）。qRT-PCR检测发现，与对照组相比，吗啡处理小胶质细胞BV-2后，miR-16的表达显著降低（P＜0.001）；与吗啡处理组相比，随着加入不同浓度的DHA，miR-16表达水平显著增高，差异有统计学意义（P＜0.05-0.001）。ELISA检测发现，miR-16抑制剂处理小胶质细胞BV-2，可以显著降低DHA对于小胶质细胞BV-2的活化抑制（P＜0.001）。荧光素酶实验结果显示，TLR4与miR-16存在结合位点。与对照组相比，吗啡处理后，Westernblot检测结果发现TLR4表达水平显著增加（P＜0.001）；与吗啡处理组相比，DHA预处理小胶质细胞BV2后，TLR4表达水平显著降低（P＜0.001）；而miR-16抑制剂可以显著降低DHA对于小胶质细胞BV-2的TLR4的表达抑制（P＜0.001）。与对照组相比，吗啡处理后，免疫荧光检测结果发现NF-κB表达显著增加（P＜0.05）；与吗啡处理组相比，DHA预处理小胶质细胞BV-2后，NF-κB表达显著降低（P＜0.05）；而miR-16抑制剂可以显著降低DHA对小胶质细胞BV-2的NF-κB的表达的抑制（P＜0.05）。结论：本研究首次揭示了DHA可以通过调控miR-16的表达，抑制TLR4/NF-κB信号通路的活化进而抑制小胶质细胞的活化。DHA通过抑制小胶质细胞的激活和神经炎症，有效地减弱了慢性吗啡耐受性的发展。进而为缓解吗啡的耐受提供理论依据。本研究将会为减少吗啡副作用的发生和拓展吗啡在临床中的应用提供新的靶点和思路。收起

关键词 : 双氢青蒿素小胶质细胞吗啡耐受

9. 双氢青蒿素在Marc-145细胞中对PRRSV抑制作用的研究

[学位论文] 李志萍华南农业大学 2017年硕士导师: 陈建新共49页

摘要 : 猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）引起的高度传染性疾病，临床上成年猪表现为厌食、发热，妊娠母猪发生流产、... 展开猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）引起的高度传染性疾病，临床上成年猪表现为厌食、发热，妊娠母猪发生流产、早产、产死胎、弱仔、木乃伊胎，仔猪呼吸困难等症状，猪群中一旦感染该病毒便很难根除。PRRS V广泛传播于世界各个地区，我国华东、华南区于2006年爆发该传染病，给我国的养殖业发展造成重创。迄今为止，主要通过疫苗免疫的手段进行预防和治疗。但一方面疫苗免疫存在返毒威胁的危险性，另一方面PRRS V进化出各种逃避宿主的免疫机制，导致疫苗的应用效果受到限制。药物是病毒性疾病防治的第二道防线，但目前尚未出现被批准用于防治PRRS的药物。近年来，大量研究表明天然低毒的中草药对病毒有显著的预防治疗作用，因此，从天然化合物中筛选有效的抗病毒药物成为当前研究的热点。本研究评价了双氢青蒿素在体外对猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）作用效果。采用间接免疫荧光法从青蒿素类化合物中筛选出对PRRS病毒有明显抑制效果的单体----双氢青蒿素和青蒿琥酯，同时由于双氢青蒿素具有比其他同类药物易溶、低毒的特性，本研究着重选择了双氢青蒿素作为后期试验中抗PRRS病毒活性的研究药物，并进一步探讨其作用机理。-建立了PRRSV感染Marc-145细胞的体外药效评价模型，MTT试验确定双氢青蒿素的药效，间接免疫荧光法确定最佳药物作用浓度。然后通过荧光定量PCR和蛋白免疫印迹（Western blot）实验，在病毒感染48 h后测定双氢青蒿素的抗PRRSV药效。再分三种不同的作用模式考察双氢青蒿素对PRRS病毒感染Marc-145细胞不同阶段的影响，即药物与病毒直接作用，药物预先作用于细胞，药物作用病毒感染细胞的不同阶段，运用RT-PCR检测技术测定病毒NSP-9 mRNA的表达水平。-双氢青蒿素在0.6、1.25、2.5μg/mL的浓度对病毒的抑制作用呈现出良好的量效关系，且不影响细胞的生长状态。荧光定量PCR和Western blot结果显示，双氢青蒿素对PRRSV NSP-9 mRNA和N蛋白的表达具有显著的抑制效果，且呈现良好的量效关系。另外，在病毒感染细胞的吸附、内化、合成、释放不同阶段，双氢青蒿素均显示出不同程度且具有量效关系的抑制作用。而在双氢青蒿素与病毒直接作用和预先作用细胞的结果中，均没有表现出显著差异性。说明双氢青蒿素的作用机制可能是通过抑制病毒感染细胞的不同阶段发挥抗病毒作用，而对病毒粒子本身没有作用，也不能事先作用于细胞受体。收起

关键词 : 生猪养殖病毒感染双氢青蒿素兽医药理

10. 双氢青蒿素抗结直肠癌作用及其机制的研究

[学位论文] 黄燕广州中医药大学 2009年硕士导师: 战晓农共40页

摘要 : 目的：研究双氢青蒿素抗结直肠癌作用并探讨其作用机制。方法：⑴系统的查阅、归纳、总结并分析大量的国内外相关文献，从而全面了解当前结直肠癌以及双氢青蒿素的研究现状。⑵将培养好的人结直肠癌 LoVo细胞接种于裸小鼠，建立移植瘤裸鼠模型。... 展开

关键词 : 肠道肿瘤中药治疗双氢青蒿素实验药理