中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

[学位论文] 王水珠汕头大学 2002年硕士导师: 邱汉婴共52页

摘要 : 研究的目的：1．采用在体兔心脏模型研究氟哌啶醇(Haloperidol，Hal)对兔动脉血压和心脏电生理参数的影响。2．采用Langendorff离体灌注兔心脏模型，排除神经、体液因素的影响，研究氟哌啶醇对离体兔心脏电生理参数的影响。3．采用多种实验性心律失常... 展开

关键词 : 氟哌啶醇心脏电生理学

2. 安碘酮的慢性作用对家兔急性缺血心肌的电生理影响

[学位论文] 白玉云四川大学 1999年硕士导师: 黄德嘉共48页

摘要 : 目的:探讨胺碘酮的慢性作用对急性缺血心肌单相动作电位(MAP)和缺血心肌缺氧耐受性的影响.方法:家兔20只,随机分为对照组(n=10)和胺碘酮治疗组(n=10).胺碘酮组喂服胺碘酮50mg/kg/d,4周.采用Ag-AgCl乏极外膜接触电极,在固定频率持续右心房起搏下,同步记... 展开

关键词 : 心肌缺血胺碘酮电生理学

3. 成年斑胸草雀弓状皮质栎核（RA）神经元电生理学特性的探究

[学位论文] 刘晓琳华南师范大学 2009年硕士导师: 李东风共39页

摘要 : 本实验运用膜片钳细胞吸附式和全细胞记录的方式对RA核团神经元的电生理学特性进行了探究。（1）运用细胞吸附式电压钳技术，在gap—free模式下，我们观察到了RA核团的神经元有自发动作电位的发放。每个发放都为双向，即都是由一个下降相和接着... 展开本实验运用膜片钳细胞吸附式和全细胞记录的方式对RA核团神经元的电生理学特性进行了探究。（1）运用细胞吸附式电压钳技术，在gap—free模式下，我们观察到了RA核团的神经元有自发动作电位的发放。每个发放都为双向，即都是由一个下降相和接着的一个上升相组成。每一个发放代表细胞发生了一次兴奋。神经元自发放频率的大小可表示神经元兴奋性的高低。（2）实验中在灌流的ACSF中直接加入GABA的阻断剂（PTX）。比较正常组、加药组和洗脱后实验组的自发放频率，P>0．05，各组间无明显差异。说明PTX对RA神经元的自发放频率没有显著的影响。这表明这种自发放是神经元的一种内在电生理学特性，而不受GABA递质的影响。（3）实验中记录了9、10月份雌雄斑胸草雀RA核团神经元的自发放频率。结果显示，雄性斑胸草雀的平均发放频率为12．84Hz，而雌性的发放频率平均只有7．06 Hz。单因素方差分析雌雄鸟自发放频率之间存在显著性差异。且雌雄斑胸草雀RA核团内神经元自发放频率的分布不同，雄鸟RA核团神经元均有一定频率的发放，部分神经元的自发放频率超过13Hz。而雌鸟RA核团神经元的自发放频率相对较低，甚至有一些神经元没有自发放。这些结果为鸣禽性别二态性的研究在电生理学方面提供了新的证据。（4）细胞吸附式下的结果表明，RA核团中存在两种发放类型不同的神经元：Ⅰ型神经元和Ⅱ型神经元。进一步破膜形成全细胞式后的记录结果表明：这两类细胞的其它电生理特性也存在显著差异。其中，Ⅰ型神经元在自发状态下表现出规律的动作电位发放；动作电位后超极化潜伏期及其恢复过程均较长，输入阻抗和时间常数较大。而Ⅱ型神经元在自发状态下很少有动作电位的发放，动作电位后超极化潜伏期和恢复过程较短，输入阻抗和时间常数较小。这些电生理学特性与已报道的细胞内记录的投射神经元和中间神经元很相似。依据这些特性鉴定Ⅰ型神经元为投射神经元，Ⅱ型神经元为中间神经元。收起

关键词 : 成年斑胸草雀神经元电生理学电生理学特性弓状皮质栎核性别二态性

4. 大鼠视网膜干细胞生物学和电生理学特性研究

[学位论文] 陈丽峰第三军医大学 2006年博士导师: 阴正勤共121页

摘要 : 视网膜退行性变疾病是严重的致盲眼病，对于这类疾病目前尚缺乏有效阻止病变进展和恢复视网膜功能的治疗方法。视网膜干细胞移植是新发展起来并具有广阔应用前景的治疗战略，其中关键性步骤是提供功能良好的视网膜干细胞。就视网膜干细胞的功能... 展开视网膜退行性变疾病是严重的致盲眼病，对于这类疾病目前尚缺乏有效阻止病变进展和恢复视网膜功能的治疗方法。视网膜干细胞移植是新发展起来并具有广阔应用前景的治疗战略，其中关键性步骤是提供功能良好的视网膜干细胞。就视网膜干细胞的功能研究方面，目前有许多研究者从形态学及神经化学角度证实了视网膜干细胞增殖和分化特性，但是有关视网膜干细胞电生理学特性的研究，目前仅有关于早期和晚期视网膜干细胞电生理学特性研究的比较，而关于从视网膜干细胞到其分化成成熟神经元的过程缺乏系统的电生理学研究。采用分子生物学手段虽然能够了解每个细胞基因的位置和机能，但是并不能彻底研究神经元的电生理特性。众所周知，神经元的基本功能是信号传递，离子和离子通道是产生生物电信号的基础，也是细胞兴奋产生动作电位的基础。电信号在细胞内整合信息，动作电位沿轴突快速传递到末梢，形成生物体细胞间信息传递及神经元回路构建，因此研究视网膜干细胞不同分化阶段神经元样细胞的离子通道特点，对了解这些视网膜干细胞分化后的细胞能否具备神经元的基本功能具有非常重要的意义。膜片钳技术是一种以记录离子通道的电流来反映细胞膜上单一的(或多个的)离子通道分子活动的新技术，从细胞水平观察离子通道机能，且在同一细胞上可观察不同通道的活动。因此对视网膜干细胞的研究如果仅采用分子生物学手段将具有一定局限性，若能将膜片钳技术与形态学、分子生物学等方法相结合，将有利于将视网膜干细胞的生物学特性和电生理特性结合起来，为研究视网膜干细胞提供强有力的理论依据。同时对视网膜干细胞向特异性视网膜细胞分化能力的研究，也是提供功能良好的视网膜干细胞的关键之一。另外，就视网膜色素变性疾病发展过程中是否存在内源性视网膜干细胞进行初步探讨，为寻求挽救视网膜色素变性患者的视功能新的治疗途径提供实验依据。本研究通过分离和培养胚胎大鼠视网膜干细胞，初步探讨特定发育阶段的视网膜外液微环境对视网膜干细胞分化的影响，分析视网膜干细胞不同分化阶段细胞电压门控离子通道的表达特点及其变化趋势，了解视网膜干细胞不同分化阶段细胞的电生理学特性，以期探索视网膜干细胞功能分化的物质基础。并就视网膜色素变性疾病发展过程中是否存在内源性视网膜干细胞进行了初步研究。本研究在上述这些方面做了大量的工作，具体在以下四方面进行研究：第一部分：视网膜干细胞的培养及冻存 LongEvans胚胎17天大鼠视网膜神经上皮来源的视网膜干细胞培养、传代、冻存、复苏，并对复苏后的细胞进行生物学检测和能否进一步分裂增殖、分化的鉴定，为下面的研究工作做准备。本研究成功建立了培养大鼠视网膜干细胞的方法，获得了可自我扩增传代、性状稳定的视网膜干细胞，在血清诱导分化条件下可分化为多种表达视网膜神经元细胞、神经胶质细胞特异性标志物的细胞。掌握了视网膜干细胞有效冻存和复苏的实验方法，复苏后视网膜干细胞的存活率约为60-70％，细胞性状稳定不发生分化，仍具有自我增殖能力，且可以用血清诱导分化为不同的视网膜细胞。不同的冻存时间对其存活率没有影响。第二部分：细胞外液微环境对视网膜干细胞影响的研究 1、新生鼠视网膜细胞外液微环境对视网膜干细胞特异性诱导分化的影响本部分通过Transwell共培养装置分层培养大鼠视网膜干细胞和新生鼠视网膜混合细胞，同时以成年阶段(30天龄大鼠)的视网膜混合细胞为对照，观察视网膜干细胞的分化比率变化。由于二者细胞外液相通，但细胞不发生接触，这样可以模拟新生和成年时段时的视网膜外液微环境，研究它们对视网膜干细胞诱导分化的影响。 2、视网膜变性鼠视网膜细胞外液微环境对视网膜干细胞的影响将RSCs在Transwell系统中，与RCS大鼠视网膜共培养，在扫描电镜下观察变性视网膜组织分泌物对视网膜干细胞迁移、分化的影响。新生大鼠视网膜混合细胞可能分泌某种物质，可以提高视网膜干细胞向光感受细胞的分化比率，而成熟大鼠视网膜混合细胞不具备此功能，可能与该阶段细胞分化信号途径的关闭有关系；变性视网膜上清液微环境对共培养的干细胞具有趋向诱导作用，并能诱导视网膜干细胞进一步分化，干细胞受到周围组织细胞及细胞外基质的作用和影响可趋向运动并诱导分化。第三部分：视网膜干细胞不同分化阶段细胞电生理学特性检测培养大鼠视网膜干细胞，运用全细胞膜片钳技术(Whole-cellPatchClamp)分析视网膜干细胞不同分化阶段细胞电压门控离子通道的表达特点及其变化趋势，系统和深入地研究大鼠视网膜干细胞分化不同阶段的电生理学特性，以期探索视网膜干细胞功能分化的物质基础。同时将新生鼠视网膜混合细胞外液诱导视网膜干细胞分化与10％胎牛血清非特异性诱导分化的细胞进行了电生理学特性方面的比较研究。在对视网膜干细胞分化不同阶段的细胞行膜片钳全细胞记录的同时，对不同阶段的分化的部分细胞进行细胞内荧光黄(LuciferYellow，LY)标记，观察视网膜干细胞分化不同阶段的细胞的形态学特性，并将其与分离培养的相应时间段的视网膜神经元进行比较。目的在于为视网膜干细胞进一步应用于细胞替代治疗视网膜变性疾病提供功能水平上的理论依据。本研究应用全细胞膜片钳法成功记录视网膜干细胞分化不同阶段细胞上表达的多种不同电压门控离子通道，证实了用全细胞膜片钳法进行干细胞分化后离子通道细胞功能检测分析的可行性。采用细胞内注射技术，能清晰地显示在普通显微镜下不能很好观察的细胞形态，对于干细胞的形态特性及功能分析提供了很好的研究手段。 1、干细胞分化过程中逐渐发育出电压门控性离子通道，这些通道支持短时程、反复性动作电位的发放；视网膜干细胞与其不同分化阶段神经样细胞拥有不同的电压门控性电流，从细胞功能的水平阐述了该视网膜干细胞及其分化细胞的标志，为今后视网膜干细胞移植从功能角度提供了理论依据。 2、大鼠视网膜干细胞分化过程中逐渐发育出电压门控性离子通道，推测离子通道的发育是神经元分化过程中的重要环节，这些通道进一步分化后可支持动作电位发放，表明离子通道的发育是视网膜干细胞分化成具有功能的成熟神经元的有效标志，为今后视网膜干细胞研究从功能角度提供了理论依据。 3、所培养的视网膜干细胞能分化为功能性神经元，可以发放动作电位。今后若能将特异性诱导分化与膜片钳技术相结合，对特异性诱导分化后的细胞进行功能检测，对于探讨诱导不同类型视网膜神经元的调节机制有重要的作用。 4、细胞不同的电生理学特性与细胞不同的形态构筑有一定的相关性，但尚缺乏一套完整的对应机制，有待于深入研究，将功能与形态完美结合。第四部分：视网膜色素变性疾病发展过程中内源性视网膜干细胞的鉴定采用RCS大鼠作为先天遗传性视网膜色素变性疾病模型，初步观察视网膜色素变性疾病过程中内源性视网膜干细胞的存在、定位，为寻求挽救视网膜色素变性患者的视功能新的治疗途径提供实验依据。本研究指出，RCS大鼠不同发育阶段均发现内源性视网膜干细胞的存在，遗传性视网膜色素变性可能作为一种慢性刺激因素激活了自身内部潜在的视网膜干细胞。本研究取得的主要结论如下： 1、大鼠视网膜干细胞的冻存复苏并不影响其原有的增殖及分化特性，有利于为今后建立“人视网膜干细胞库”提供方法学基础。 2、新生大鼠视网膜混合细胞可能分泌某种物质，可以提高视网膜干细胞向光感受细胞的分化比率，而成熟大鼠视网膜混合细胞不具备此功能，可能与特定阶段视网膜细胞外液微环境中分化信号的不同有关系。 3、应用全细胞膜片钳法成功记录视网膜干细胞分化不同阶段细胞上表达的多种不同电压门控离子通道，证实了用全细胞膜片钳法进行干细胞分化后离子通道细胞功能检测分析的可行性。采用细胞内注射技术，能清晰地显示在普通显微镜下不能很好观察的细胞形态。这将不仅有利于今后采用膜片钳技术进一步深入研究视网膜干细胞电生理学特性，而且对干细胞的形态特性及功能分析的结合研究提供了很好的研究手段。 4、干细胞分化过程中逐渐发育出电压门控性离子通道，这些通道支持短时程、反复性动作电位的发放；视网膜干细胞与其不同分化阶段神经样细胞拥有不同的电压门控性电流，阐述了视网膜干细胞及其分化细胞在细胞功能水平的标志，为今后视网膜干细胞移植从功能角度提供了理论依据。 5、大鼠视网膜干细胞分化过程中逐渐发育出电压门控性离子通道，离子通道出现的先后顺序是钾通道先表达，钠通道后表达。钠电流表现为从无到有，电流峰值即使在同一分化时间也大小不一。推测离子通道的发育是神经元分化过程中的重要环节，为今后视网膜干细胞研究从功能角度提供了理论依据。 6、细胞膜的动作电位与钠通道的开放有关。视网膜干细胞分化过程中，当钠通道逐渐发育成熟产生钠离子电流后，进一步分化方可成为可以发放动作电位的功能性神经元，表明离子通道的发育是视网膜干细胞分化成具有功能的成熟神经元的有效标志。 7、本研究对视网膜干细胞不同分化阶段的形态构筑、特异性分化特点及其电生理学特性之间的关系进行了初步探讨，进一步将三者有机结合研究具有非常重要的意义，目前尚缺乏一套完整的对应机制，有待于深入研究，将功能与形态完美结合。 8、视网膜色素变性过程中可能产生某种慢性刺激因子激活了RCS大鼠自身内部潜在的视网膜干细胞。收起

关键词 : 视网膜电生理学色素变性

5. 兔肺静脉和界嵴电生理特点的实验研究

[学位论文] 韩昊北京协和医学院(中国医学科学院) 2006年硕士导师: 马坚共90页

摘要 : 研究背景：研究表明，缠绕于肺静脉和腔静脉壁的心肌组织与房性心律失常(atria arrhythmia，AAR)包括房性早搏(房早)、房性心动过速(房速)、心房扑动(房扑)、心房颤动(房颤)之间存在特殊关系。目前电生理界将这些部位的心肌组织形象地称为“心肌袖”(... 展开研究背景：研究表明，缠绕于肺静脉和腔静脉壁的心肌组织与房性心律失常(atria arrhythmia，AAR)包括房性早搏(房早)、房性心动过速(房速)、心房扑动(房扑)、心房颤动(房颤)之间存在特殊关系。目前电生理界将这些部位的心肌组织形象地称为“心肌袖”(Myocardial Sleeves)。引起人们对肺静脉日渐重视的主要原因，开始于局灶性房颤的解剖与电生理机制的研究，诱发局灶性房颤的异位兴奋灶90％以上来自肺静脉的开口或肺静脉壁内，射频消融治疗心房颤动主要在肺静脉根部进行。但是，对于肺静脉壁成为引发房颤的高发原因，尚缺乏合理的解释，推测可能与肺静脉局部组织内自律性增高、触发活动或是微折返有关。目前大量的临床资料和动物模型，仅局限在寻求治疗房颤的手段，评价射频消融这种方法的可行性、安全性和有效性。与肺静脉电生理密切相关的局部解剖学和组织学特征的研究却相对滞后，缺乏必要的基础研究和形态学资料。界嵴(Cristaterminalis，CT)是右心房心内膜面肌性隆起，起白右心耳内面，经上腔静脉口前方下行，与下腔静脉口前缘瓣膜(欧氏嵴)相延续，其向前发出的平行柱状结构称梳状肌。随着局灶性房性心动过速特别是房颤介入治疗的迅速发展，作为右心房独特解剖结构之一的界嵴在房性心律失常发生中的作用已成为人们关注热点。界嵴是局灶性房颤关键部位之一、局灶性房速最常见部位，同时也是典型心房扑动和不适当窦性心动过速的重要解剖基础，参与了所有类型的房性快速心律失常，Kalman等提出了“界嵴性心动过速”(Cristal tachvcardias)的概念。由于与临床心房电生理密切相关的心脏局部解剖、组织学特征和基础电生理研究相对滞后，临床上射频消融的安全性和有效性受到了一定程度的限制。虽然射频消融治疗发展迅速，但药物在心律失常治疗中仍占有重要地位。本课题以兔左心房一肺静脉和界嵴为研究对象，从解剖、组织电生理和电药理的角度分三部分探讨左心房-肺静脉和界嵴在房性心动过速特别是心房颤动发生和维持中的作用。材料和方法：40只健康成年兔，体重1.5-2.5公斤，雌雄不限。其中10只取心肺组织，10％福尔马林固定后，取界嵴和左心房-肺静脉标本作石蜡切片，行HE染色，在光镜下观察。其余30只兔用于左心房-肺静脉电生理及尼非卡兰电药理研究，采用标准玻璃微电极技术，正常台氏液灌流，分别记录界嵴、左心房、肺静脉远近两端动作电位和不应期，再分别用含有5.5 u M乙酰胆碱、1 u M异丙肾上腺素、2.13mg／L尼非卡兰的台氏液作组织灌流，观察自主神经的影响及Ⅲ类抗心律失常新药、Ikr通道阻断剂-尼非卡兰的电药理作用。结果：界嵴是右房心内膜面的肌性隆起，界嵴上部与腔静脉前肌束相延续。梳状肌从界嵴发出，平行排列或相互交织成网状。梳状肌与基底部相连形成“嵴样结构”或“桥样结构”。界嵴下部与下腔静脉口前缘瓣膜(欧氏嵴)相延续，在峡部向三尖瓣和冠状窦口发出分支，部分止于瓣上肌环。界嵴由许多肌束膜分隔的肌束组成，肌束内纤维与界嵴长轴平行排列，并向梳状肌发出分支。肺静脉壁各层结构完整，由三层组成，即内膜、中膜和外膜。左房心肌延伸入肺静脉壁内形成心肌袖，心肌细胞位于管壁中膜和外膜之间，与中膜的平滑肌各自分开，中间隔有结缔组织膜，与外膜界限不清楚。肌袖肌纤维在肺静脉口附近最厚，在向肺门延伸时逐渐变薄和减少，肌袖远端的肌纤维明显变细，最终消失在结缔组织内。肺静脉壁内心肌走行方向各异，杂乱排列，但以纵行纤维束为多，缠绕或位于肺静脉管壁的一侧。肺静脉细胞的静息电位水平(RMP)、动作电位幅度(APA)、动作电位时程(APD)、0期最大除极速度(Vmax)均小于左心房细胞，但均为快反应动作电位，没有发现4期自动除极和后除极，肺静脉远近两端细胞动作电位没有明显差别。乙酰胆碱可缩短心房和肺静脉细胞的APD和ERP，异丙肾上腺素可诱发心房和肺静脉细胞发生早期后除极。尼非卡兰可延长心房和肺静脉细胞的APD，并有延长ERP的趋势。结论：界嵴和肺静脉有导致心律失常的解剖学和组织学基础，肺静脉肌袖细胞动作电位的特点可能使之成为折返的好发部位，特别是在迷走神经兴奋的情况下。尼非卡兰可能有预防房颤复发，减轻心房电重构的作用。收起

关键词 : 肺静脉界嵴电生理学心律失常

6. 决策中后悔的神经机制研究

[学位论文] 陈满琪首都师范大学 2008年博士导师: 方平共117页

摘要 : 后悔是与决策具有密切关联的情绪。后悔是由选择选项的结果与未选择选项的更好结果之间的反事实比较过程产生的。虽然后悔在行为研究上已日益深入,但是关于后悔的电生理学表现仍然了解甚少。对于后悔电生理学研究的欠缺表现在两个方面。首先,从后悔的... 展开后悔是与决策具有密切关联的情绪。后悔是由选择选项的结果与未选择选项的更好结果之间的反事实比较过程产生的。虽然后悔在行为研究上已日益深入,但是关于后悔的电生理学表现仍然了解甚少。对于后悔电生理学研究的欠缺表现在两个方面。首先,从后悔的加工时程来看,研究尚需探明在面对决策结果直到后悔情绪产生,个体的加工经历了哪些过程以及这些加工进程表现出何种特征,反事实思维在该过程中如何起作用。其次,从后悔情绪的唤醒程度来看,研究尚需探讨后悔的唤醒程度是否受到决策结果奖惩程度以及作为效应等因素的影响,这种影响具有何种电生理学的表现。研究采用运气轮博弈范式,通过四个系列实验试图在该范式的背景下对上述两方面做出探索与解释。通过记录与分析给予个体的反馈刺激所诱发的ERPs,以此了解后悔的电生理学表现,从而为决策过程中后悔的神经机制研究提供更多的证据。研究结果如下： (1)反馈刺激呈现后,在200～300ms决策错误比决策正确诱发了一个更为负走向的波,表现为典型的反馈负波；在300～400ms决策正确比决策错误诱发更大的P300;在更长的时程500～900ms决策正确比决策错误诱发更大的晚正成分,并且表现出明显的右半球优势效应； (2)反馈负波对决策正确与错误敏感,但对得失以及得失的强度大小不敏感；P300对反馈刺激的效价不敏感,但P300对决策结果中得失的方向和强度敏感：晚正成分对得失强度不敏感,但在晚正成分与决策正误、得失方面具有复杂的表现,三者之间表现出相互的交互作用,晚正成分对决策正误的敏感似乎受到了得失的调节,同样对得失的敏感也受到了决策正误的调节； (3)在小赌注的决策情况下,决策错误比决策正确诱发更大的反馈负波,决策正确比决策错误诱发更为正走向的P300,但晚正成分的波幅在决策正确与决策错误之间没有显著的差异； (4)考察反馈负波、P300和晚正成分与赌注大小的关系发现,大赌注的反馈负波波幅大于小赌注的反馈负波,这种差异仅存在于额区和额中央区；大赌注的P300波幅大于小赌注,这种差异仅存在于额区和额中央区；大赌注与小赌注的晚正成分波幅没有显著的差异； (5)拒绝-错误比接受-错误诱发更大的晚正成分,表现出明显的作为效应,接受-正确与拒绝-正确之间所诱发的晚正成分不具有显著的差异。通过上述研究结果表明：在运气轮博弈范式下,反馈负波主要反映了个体对反馈刺激所给予的决策正误等显著性信息加工的过程,并且其波幅表现出对奖励等级的部分敏感性；P300主要对反馈刺激中的结果奖励程度进行编码,奖励程度的不同使得刺激具有不同的动机和情绪强度；晚正成分主要反映了决策正误后诱发的情绪体验。由于反馈负波、P300以及晚正成分在诸多方面表现出非一致性,三者在反馈刺激的加工过程中似乎独立地起着不同的作用,从而可能存在着功能上的分离。这种分离与后悔加工的时程具有密切的关系,体现了个体在面对决策结果直到后悔情绪产生所经历的加工过程。收起

关键词 : 神经机制决策后悔情绪电生理学

7. 电压依赖性钾通道在豚鼠耳蜗单离细胞中的电生理学特性研究

[学位论文] 常青华中科技大学 2004年博士导师: 龚树生共103页

摘要 : 该研究论文主要运用膜片钳技术,研究了电压依赖性K展开

关键词 : 膜片钳技术电生理学药理学特性

8. 慢性炎症痛敏的外周机制研究

[学位论文] 王学庆北京大学 2000年博士导师: 韩济生;于英心共91页

摘要 : 近年来的研究发现:炎症介质及继发性细胞因子对DRG细胞上的离子通道的功能、基因表达及结构具有调节作用.由此推测,慢性炎症痛敏模型中,DRG细胞可能发生可塑性的变化.该工作在这些研究背景的基础上,以膜片钳的电压钳、电流钳模式及两种模式在同一细胞... 展开

关键词 : 慢性炎症痛敏外周机制电生理学

9. 内吗啡肽2抑制骶副交感节前神经元活动的形态学与机能学研究

[学位论文] 陈英标福建医科大学 2015年博士导师: 李云庆共86页

摘要 : 背景：骶副交感核（sacral parasympathetic nucleus，SPN）是脊髓的自主神经中枢之一，它控制盆腔脏器的多种功能，如排尿、排便、阴茎勃起等。位于SPN内的副交感节前神经元（parasympathetic preganglionic neurons，PPNs）在排尿反射过程发挥着重要... 展开背景：骶副交感核（sacral parasympathetic nucleus，SPN）是脊髓的自主神经中枢之一，它控制盆腔脏器的多种功能，如排尿、排便、阴茎勃起等。位于SPN内的副交感节前神经元（parasympathetic preganglionic neurons，PPNs）在排尿反射过程发挥着重要作用。在脊髓完整的成年动物，排尿活动的主要由脊髓以上与排尿活动相关核团之间形成的多突触反射环路控制。但在颈段和胸段水平脊髓横断损伤后的慢性脊髓化动物，感觉传入与PPNs的突起之间形成单突触联系形成排尿反射回路。内吗啡肽包括内吗啡肽1（endomorphin1，EM-1）和内吗啡肽2（endomorphin2，EM-2）两种亚型，因其与μ-阿片受体（μ-opioid receptor，MOR）有高度的亲和力与选择性，故被认为是MOR的内源性配体。吗啡是MOR的外源性配体，它在脊髓水平抑制膀胱活动，这是造成临床上鞘内应用吗啡最常见的并发症----尿潴留（urinary retention）的原因。我们最近的研究表明EM-2免疫阳性的终末与SPN内表达MOR的PPNs构成突触联系。故推测尿潴留与吗啡抑制PPNs从而抑制排尿反射有关。但阿片类物质对SPN的PPNs在细胞水平的作用尚不清楚。目的：揭示SPN内PPNs的形态和化学神经解剖学特点以及内源性阿片肽EM-2影响PPNs的效应和作用机制，为防治吗啡导致尿潴留提供理论依据。方法：先用荧光追踪剂四甲基罗达明（TMR）经盆神经逆行标记方法，特异性显示谷氨酸脱羧酶67-绿色荧光蛋白（GAD67-GFP）转基因小鼠SPN内PPNs的形态结构特点和化学神经解剖学特点；再用全细胞膜片钳记录方法研究 EM-2对24-30天龄大鼠SPN内PPNs兴奋性的影响以及对PPNs的兴奋性和抑制性神经递质突触传递的影响。结果：⑴从形态学上用 GAD67-GFP基因转基因小鼠证实在 SPN内及其周围有含抑制性递质----γ-氨基丁酸（GABA）的抑制性中间神经元，SPN内还有非副交感节前神经元和不含GABA的其它类型的神经元，后者可能为兴奋性中间神经元，或向上位脊髓结构或脊髓以上的中枢部位投射的神经元，也可能是甘氨酸能的抑制性中间神经元。⑵SPN内的PPNs大都表达MOR，非副交感节前神经元和非GABA能的神经元也多数表达MOR，只有个别含GABA的抑制性中间元微弱表达MOR。⑶EM-2（3μM）能够降低61.1%节前神经元的静息膜电位，产生半数最大反应（EC50）的有效浓度为0.282μM；EM-2增加引起动作电位发放的最小刺激值，并抑制动作电位的重复发放，这些结果说明EM-2通过超极化PPNs而降低其兴奋性。⑷电流-电压关系曲线揭示EM-2引起的电流其反转电位为-95±2.5 mV；灌流K+通道阻断剂4-氨基吡啶（4-aminopyridine，4-AP）或 BaCl2可大部分阻断 EM-2在PPNs引起的电流；在电极内液中加入二磷酸鸟苷（GDP）的类似物 guanosine5′-[β-thio]diphosphate trilithium salt(GDP-β-S)可阻断EM-2引起的电流；灌流选择性MOR拮抗剂 D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Orn-Thr-Pen-Thr-NH2(CTOP)可阻断这些电流。这些结果说明EM-2与PPNs膜上的MOR结合后，随之激活G蛋白偶联的内向整流钾通道（GIRK），导致神经元的超极化。⑸EM-2降低PPNs的微小兴奋性突触后电流（mEPSCs）的频率与幅度；EM-2还能降低自发性抑制性突触后电流（sIPSCs）的频率与幅度，但不改变微小抑制性突触后电流（mIPSCs）的频率与幅度。CTOP可阻断EM-2对mEPSCs及sIPSCs频率与幅度的影响。这些结果说明EM-2与突触前终末的MOR结合之后，可以抑制突触前终末兴奋性神经递质的释放，但对抑制性神经递质的释放没有影响。结论：①SPN的神经元由PPNs、GABA能的抑制性中间神经元和其它类型的神经元组成。②SPN内的PPNs与其它类型的神经元表达MOR，仅少许GABA能神经元微弱表达MOR。③EM-2与PPNs突触后膜上的MOR结合，引起PPNs的超极化，降低PPNs的兴奋性；EM-2与突触前终末上的MOR结合，能够使突触前终末减少释放兴奋性神经递质，但不影响抑制性神经递质的释放。这些结果提示EM-2在骶髓的SPN内对PPNs的活动具有直接的抑制作用，且 EM-2还可抑制突触前终末释放兴奋性神经递质，导致初级传入与 PPNs形成回路的排尿反射信息传递被抑制，这些现象可以诠释临床上鞘内使用吗啡引起的膀胱功能异常的原因。收起

关键词 : 中枢神经骶副交感核突触电流电生理学

10. 冲突适应效应研究

[学位论文] 刘晓贞西安电子科技大学 2015年硕士导师: 刘鹏;印宏共85页

摘要 : 实验室环境下，对认知控制的研究常以冲突适应效应的研究进行，冲突适应效应表现为不一致试次后的冲突效应（不一致试次的反应时大于一次性试次的反应时）显著小于一致性试次后的冲突效应。典型的一致性任务包括Simon，Stroop和Eriksen Flanker。尽管... 展开实验室环境下，对认知控制的研究常以冲突适应效应的研究进行，冲突适应效应表现为不一致试次后的冲突效应（不一致试次的反应时大于一次性试次的反应时）显著小于一致性试次后的冲突效应。典型的一致性任务包括Simon，Stroop和Eriksen Flanker。尽管冲突适应效应是一个非常鲁棒的发现，其理论基础却存在广泛争议。冲突监测理论认为位于medial frontal cortex的ACC监测到冲突的发生，并将冲突信号传递给其他脑区，提高控制水平以便更好的解决冲突。近年来，冲突监测理论受到特征整合和偶然学习理论的质疑。特征整合理论认为刺激特征和反应特征捆绑在一起，整合进一个共同的片段记忆表征或事件夹中，且至少保留在下一试次类型的开始，特征之间的解绑和捆绑使得被试反应不同刺激类型所需时间不同。偶然学习通过去除重复排除了特征整合因素的影响，但是这样的设计存在很大的问题，即增加一致试次或者不一致试次的数目会导致随机特征选择的问题。越来越多的研究者提出需要重新考察冲突适应效应及其电生理 index，以防止关于冲突监测的发现其实是特征整合或偶然学习的过程。本研究采用改良的排除了特征整合和偶然学习的Flanker任务，重新考察冲突适应效应及N2冲突适应效应 index。其次，研究者关于冲突适应效应和影像结构的研究，默认冲突适应效应是特质，目前为止，还没有文献详细考察过冲突适应效应的特质性，因此本研究进行冲突适应效应及其电生理的特质性分析。最后，在冲突适应效应的研究中，即使研究者采用相同的实验范式，仍有可能得出了不一致的结论。有文献表明试次数量对冲突适应效应有显著影响，本文在前人工作的基础上，研究试次数目对排除了特征整合和偶然学习Flanker任务的冲突适应效应的影响。招募视力或者矫正视力均正常的57名健康被试，这57名被试习惯用右手，均表示自愿参加实验且获取的抑郁焦虑量表得分正常，无其他精神病史等。实验采用的是经典的数字Flanker任务，为了排除打字指法熟练差异的影响，正式实验前要求被试先做练习，当速度和准确率均满足要求时方可参加正式实验。正式实验共3个刺激集合，每个集合中有10个刺激模块，每个被试随机参加任意一个集合中的任意5个刺激模块。其中每个模块均满足以下要求：共49个试次，第一个为C试次，最后将被排除不参加统计分析，I、C各占24项，CI、II、IC、CC各占12项，同时，程序中不连续出现4个一致项或不一致项，相邻的试次不出现刺激物或者目标物重复，以此来排除特征整合和偶然学习的干扰。本研究对行为学数据和脑电数据进行统计分析，发现在排除了特征整合和偶然学习，冲突效应和冲突适应效应仍然存在，且N2是冲突效应和冲突适应效应的电生理指标。使用SPSS软件对行为学数据和脑电数据进行组内相关系数分析以及皮尔逊相关系数分析，发现反应时的冲突效应和N2的冲突效应的皮尔逊相关系数较高且重测信度较高，具有特质性；反应时的冲突适应效应和N2的冲突适应性效应皮尔逊相关系数较低且重测信度较差，不具有特质性；N2峰稳定时所需要的试次数为33。本次对冲突适应性效应的研究具有较强的鲁棒性。收起

关键词 : 记忆表征冲突适应脑电电位电生理学