摘要:
目的: 1.探讨芳香烃受体（AHR）信号通路相关基因与稽留流产的关系，并进一步分析其在多环芳烃（PAHs）暴露与稽留流产之间的中介效应。 2.分析稽留流产病例组和对照组8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）水平的差异，探讨其与PAHs暴露的关系。 3.探讨...
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目的: 1.探讨芳香烃受体（AHR）信号通路相关基因与稽留流产的关系，并进一步分析其在多环芳烃（PAHs）暴露与稽留流产之间的中介效应。 2.分析稽留流产病例组和对照组8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）水平的差异，探讨其与PAHs暴露的关系。 3.探讨稽留流产的影响因素。 方法: 选择2021年4月至2022年4月在山西医科大学第一医院产科确诊的稽留流产患者95例为病例组，按照1∶2匹配原则，配比年龄相近（年龄差≤3岁）、同民族（汉族）、同居住地（太原）、同期妊娠但主动要求人工流产的正常孕妇190例为对照组。对研究对象进行面对面问卷调查，问卷内容包括研究对象的一般情况（年龄、文化程度、体质指数BMI等）、行为生活方式（吸烟、饮酒、锻炼等）、孕产史（孕次，不良妊娠史等）和本次妊娠情况等。由临床产科医师行负压流产术吸引流产组织，收集50～300mg绒毛组织，生理盐水清洗血迹及杂质，冰盒运送回实验室后-80℃超低温冰箱保存待测。 采用Trizol法进行绒毛组织RNA提取，反转录为cDNA后进行荧光定量PCR检测AHR通路相关基因的表达水平。采用双抗体一步夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）检测绒毛组织PAH-DNA加合物、8-OHdG浓度。 采用EpiData 3.1建立数据库。使用SPSS 22.0软件进行t检验、卡方检验、Fisher确切概率法、Manny-Whitney U检验、Spearman秩相关分析、ROC曲线分析,logistic回归分析;使用GraphPad Prism 8.0.1和Origin 2022绘制统计图;使用R语言Mediation包进行二分类因变量中介效应检验，双侧α=0.05为显著性水平。 结果: 1.研究对象基本情况:研究对象总体平均年龄为(29.38±6.16)岁。病例组和对照组在年龄、户籍、人均月收入、吸烟、饮酒、体重指数和体育锻炼等方面差异均无统计学意义(P＞0.05)。两组文化程度差异有统计学意义(x2=8.59,P=0.035)。病例组孕周大于对照组(t=12.31,P＜0.001)且不良妊娠史比例高于对照组(x2=15.49,P＜0.001)。 2.PAH-DNA加合物与稽留流产的关系:病例组PAH-DNA加合物浓度为479.68(442.31,534.29)pg/ml 高于对照组的 446.82(394.49,502.45)pg/ml,差异有统计学意义(Z=-4.120,P＜0.001)。根据PAH-DNA加合物浓度的P25和P75,将研究对象分为三个水平:低暴露T1(＜410.14 pg/ml;＜P25)、中暴露T2(410.14～510.96 pg/ml;P25～P75)和高暴露 T3(≥510.97 pg/ml;≥P75)。单变量 logistic 回归分析显示，T2和T3水平的稽留流产风险分别是T1水平的5.07倍(OR=5.07,95％CI:2.26～11.38,P＜0.001)和 6.10 倍(OR=6.10,95％CI:2.55～14.60,P＜0.001)。在校正了年龄、教育程度、孕周、孕次等协变量后，多元logistic回归分析结果表明，T2和T3水平的稽留流产风险分别是T1水平的4.62倍(OR=4.62,95％CI:1.59～13.44,P=0.005)、5.51 倍(OR=5.51,95％CI:1.60～18.92,P=0.007)。 3.AHR通路基因表达情况:病例组与对照组的AHR、ARNT、AHRR、CYP1A1和GSTP1基因表达水平存在显著差异(P均＜0.01)。其中，病例组AHR、ARNT、CYP1A1和GSTP1基因表达水平高于对照组(Z=-7.818,P＜0.001;Z=-4.704,P＜0.001;Z=-3.405,P＜0.001;Z=-3.532,P＜0.001),而 AHRR 表达低于对照组(Z=-6.855,P＜0.001)。 4.AHR通路基因相关性分析:Spearman相关分析显示，AHR与ARNT(rs=0.38,P＜0.001)、CYP1A1(rs=0.36,P＜0.001)和 GSTP1(rs=0.19,P=0.001)的基因表达之间存在显著的正相关，而AHR与AHRR表达之间存在负相关（rs=-0.11,P=0.073),但无统计学意义。此外，ARNT与AHRR(rs=0.23,P＜0.001)、CYP1A1(rs=0.30,P＜0.001)和 GSTP1(rs=0.48,P＜0.001;CYP1A1 与 AHRR(rs=0.34,P＜0.001)和GSTP1基因表达(rs=0.24,P＜0.001)之间均为正相关。 5.AHR 通路基因 ROC 曲线分析:AHR、ARNT、AHRR、CYP1A1 和 GSTP1均能较好地区分稽留流产患者和正常妊娠孕妇，AHR的AUC=0.784(95％CI:0.724～0.785,P＜0.001),ARNT 的 AUC=0.671(95％CI:0.606～0.736,P＜0.001),AHRR 的 AUC=0.749(95％CI:0.688～0.810,P＜0.001),CYP1A1 的 AUC=0.624(95％CI:0.554～0.694,P=0.001),GSTP1 的 AUC=0.628(95％CI:0.564～0.693,P＜0.001)。 6.AHR通路基因与稽留流产的条件logistic回归分析:将各基因作为数值变量进行单变量和多变量条件logistic回归分析，结果发现AHR、AHRR和CYP1A1的表达是稽留流产的预测因素。其中，AHR(OR=1.86,95％CI:1.15～3.00,P=0.012)和 CYP1A1(OR=2.48,95％CI:1.55～3.97,P＜0.001)是稽留流产的危险因素，而AHRR(OR=0.26,95％CI:0.15～0.44,P＜0.001)是保护因素。 为了解AHR通路基因各个水平对稽留流产的影响，根据P33和P67将AHR、ARNT、AHRR、CYP1A1和GSTP1各分为三组(低表达、中表达、高表达)，进而分析其和稽留流产的关系。未调整协变量时，AHR高表达、ARNT中、高表达、AHRR中、高表达、CYP1A1高表达和GSTP1中、高表达均是稽留流产的影响因素。调整年龄、文化程度、孕周、孕次、不良妊娠史、吸烟、饮酒后，AHR高表达(OR=5.30,95％CI:2.03～13.82,P=0.001)、AHRR 中表达和高表达(OR=0.29,95％CI:0.12～0.73,P=0.009;OR=0.20,95％CI:0.08～0.52,P=0.001)、CYP1A1高表达(OR=3.47,95％CI:1.39～8.62,P=0.007)、GSTP1 中表达(OR=4.51,95％CI:1.77～11.51,P=0.002)为稽留流产的影响因素。调整年龄、文化程度、孕周、孕次、不良妊娠史、吸烟、饮酒、PAH-DNA加合物后，结果表明AHR高表达(OR=4.68,95％CI:1.783～12.29,P=0.002)、CYP1A1 高表达(OR=2.95,95％CI:1.16～7.54,P=0.024)、GSTP1 中表达(OR=5.82,95％CI:2.14～15.87,P=0.001)为稽留流产的危险因素，而AHRR中表达和高表达(OR=0.26,95％CI:0.10～0.68,P=0.006;OR=0.20,95％CI:0.08～0.53,P=0.001)是稽留流产的保护因素。 7.基于AHR、AHRR和CYP1A1的logit模型的预测概率构建ROC曲线，AHR-AHRR-CYP1A1 轴的 AUC 为 0.904(95％CI:0.867～0.941,P＜0.001),灵敏度为78.95％,特异度为 89.47％。 8.PAH-DNA加合物与AHR通路基因的logistic回归分析:分别将AHR、ARNT、AHRR、CYP1A1、GSTP1按其P75分组作为二分类变量进行logistic回归分析。结果表明，未调整协变量前，PAH-DNA加合物为T2、T3水平使AHR表达增加的风险分别为T1水平的2.96、6.31倍;使CYP1A1表达增加的风险分别为T1水平的2.86、2.70倍。调整协变量后，PAH-DNA加合物T3水平使AHR表达增加的风险为 T1 水平的 4.66 倍(OR=4.66,95％CI:1.72～12.66,P=0.003);T2 水平使CYP1A1 表达增加的风险为 T1 水平的 2.38 倍(OR=2.38,95％CI:1.06～5.33,P=0.036)。 9.AHR、CYP1A1在PAH-DNA加合物对稽留流产影响的中介效应分析:结果表明，AHR表达介导的与PAH-DNA加合物相关的稽留流产的中介比例为12.97％;未发现CYP1A1表达在PAH-DNA加合物和稽留流产关系中的中介作用。 结论: 1.PAHs宫内暴露、AHR高表达、CYP1A1高表达、8-OHdG、孕周和不良妊娠史可能是稽留流产的危险因素;AHRR高表达可能是稽留流产的保护因素。 2.AHR-AHRR-CYP1A1轴RNA差异表达可作为稽留流产诊断指标之一。 3.PAHs可能通过影响AHR的表达引起稽留流产。
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