摘要: 核酸在遗传信息传递和生命物质合成中发挥着不可或缺的作用，研究表明，microRNA（miRNA）异常表达及单核苷酸多态性（singlenucleotidepolymorphisms,SNPs）的发生与肿瘤等多种重大疾病的发生发展密切相关。实现miRNA及SNPs的早期精准检测对相关疾病... 展开 核酸在遗传信息传递和生命物质合成中发挥着不可或缺的作用，研究表明，microRNA（miRNA）异常表达及单核苷酸多态性（singlenucleotidepolymorphisms,SNPs）的发生与肿瘤等多种重大疾病的发生发展密切相关。实现miRNA及SNPs的早期精准检测对相关疾病诊断和预后治疗具有重要意义，但传统检测方法存在灵敏度低、特异性差及需要大型仪器辅助等缺陷。基于此，本文以级联信号放大策略为基础，结合磁纳米探针与免疫层析技术，构建系列荧光及比色生物传感器，实现miRNA与SNPs灵敏、特异及便携式检测。具体研究内容如下： 1.基于杂交链式反应（HCR）与滚环扩增（RCA）级联信号放大策略（HCRA），构建高灵敏miRNA荧光生物传感器：制备特异性磁纳米核酸探针（MBs@b-Lcp），当目标miRNA21存在时，可介导三明治复合物（MBs@b-Lcp/miRNA21/引发链（Dp））形成，并依次触发HCR及RCA反应产生G-四链体结构，增强其配体硫黄素T（ThT）的荧光强度。通过检测ThT荧光信号，实现miRNA21的定量检测。该传感灵敏度高且特异性强，检测限低至17.7fM，同时适用于血清样本miRNA检测，加标回收率良好，具有较高的准确性。 2.基于HCRA级联信号放大策略与免疫层析技术，构建便携式miRNA比色生物传感器：在HCRA级联信号放大策略基础上，进一步结合免疫层析技术，构建便携式检测平台，克服需大型仪器测试等弊端。目标miRNA31存在时，激活HCRA产生G-四链体结构，与氯化血红素结合形成具有过氧化物拟酶活性的配合物。通过链霉亲和素与生物素相互作用富集到试纸条T线，催化3，3，5，5-四甲基联苯胺（TMB）底物发生显色反应。通过收集比色信号，实现miRNA31的定量检测。该传感可实现miRNA31高灵敏、高特异性及便携式检测，检测限低至3.21fM，同时适用口腔癌患者唾液样本检测，结果与qRT-PCR高度一致。 3.基于HCRA与连接酶链式反应（LCR）多重级联信号放大策略，构建高灵敏SNPs荧光生物传感器：以野生型mRNA（WtRNA）为目标分子，其介导LCR产生大量双链DNA产物，并进一步触发HCRA反应产生G‐四链体结构，可增强ThT的荧光强度。通过统计荧光信号，实现目标分子的定量检测。该传感灵敏度高且特异性强，可区分低至0.5%的突变型mRNA（MutRNA），同时适用于实际样本检测，加标回收率良好，具有较高的准确性。 收起