摘要: 目的：人参皂苷CK（GCK）可能是一种有效的抗关节炎和骨保护剂。本研究旨在探讨GCK对骨关节炎的潜在保护作用及其对软骨细胞焦亡的调节作用。 方法：提取新生小鼠膝骨关节原代软骨细胞并传代培养。体外通过TNF-α刺激模拟骨关节炎性环境。实验组在T... 展开 目的：人参皂苷CK（GCK）可能是一种有效的抗关节炎和骨保护剂。本研究旨在探讨GCK对骨关节炎的潜在保护作用及其对软骨细胞焦亡的调节作用。 方法：提取新生小鼠膝骨关节原代软骨细胞并传代培养。体外通过TNF-α刺激模拟骨关节炎性环境。实验组在TNF-α刺激前后加入不同浓度的GCK。通过CCK8实验测定细胞活性，ELISA，免疫荧光染色，免疫印迹测定相关蛋白因子表达，评估GCK对原代细胞的保护。使用2月龄C57BL/6J小鼠建立膝关节骨关节炎（DMM）动物模型，并使用不同浓度GCK治疗。处理后，收集膝骨关节，固定包埋切片，通过HE、番红固绿显示关节病变。免疫组织化学染色法（IHC）检测骨关节炎相关蛋白表达。结果：体外原代软骨细胞在TNF-α刺激后，IL-6、MMP-13、ADAMTS5和MMP-3表达显著升高，但蛋白聚糖（aggrecan）和Ⅱ型胶原蛋白（collagenⅡ）的表达显著下降。GCK以剂量依赖的方式逆转了这些变化。GCK降低DMM小鼠体内OARSI评分，抑制了软骨降解，表现为部分恢复的collagenⅡ表达和弱化的MMP13表达。在原代软骨细胞中，TNF-α处理刺激了NLRP3、GSDMD-N末端（NT）蛋白、cleaved-caspase-1和成熟的IL-1β的升高，这些标志物指示了焦亡的发生。GCK处理以剂量依赖的方式抑制这些蛋白的升高。使用DMM小鼠膝关节组织切片的IHC染色证实，GCK减弱了DMM手术诱导的NLRP3和GSDMD-NT表达。 结论：本研究通过及体外小鼠原代膝软骨细胞实验及体内动物OA模型建立，运用免疫荧光，免疫印迹，ELISA,番红固绿染色和HE染色，免疫组化染色等技术手段，阐明了GCK在骨关节炎OA中起作用的机制。GCK可降低了TNF-α诱导的体外软骨细胞ECM稳态失衡，抑制骨关节炎相关的NLRP3炎症小体的激活和焦亡。GCK在手术诱导的骨关节炎模型中减少体内软骨降解，抑制骨关节炎相关的焦亡，降低了骨关节炎模型的损伤程度。因此GCK可能是一个潜在的骨关节炎保护剂，本研究的结果为以后评估GCK临床辅治疗骨关节炎提供了理论依据。 收起