摘要: 研究背景 肾单位肾痨(Nephronophthisis，NPHP)是一种常染色体隐性遗传的囊肿性肾病，又称之为纤毛病，也是最常见的引起青少年终末期肾功能衰竭的遗传病之一，肾脏病理主要表现为皮髓交界处远曲小管扩张形成囊肿，肾间质纤维化以及炎症细胞浸润。... 展开 研究背景 肾单位肾痨(Nephronophthisis，NPHP)是一种常染色体隐性遗传的囊肿性肾病，又称之为纤毛病，也是最常见的引起青少年终末期肾功能衰竭的遗传病之一，肾脏病理主要表现为皮髓交界处远曲小管扩张形成囊肿，肾间质纤维化以及炎症细胞浸润。目前研究发现有二十多个相关基因与肾单位肾痨的发病相关，其中有30％是NPHP1的缺失，这也是最常见的基因突变类型，所导致的疾病是Ⅰ型肾单位肾痨。然而，关于肾单位肾痨囊肿形成和纤维化的发生的发病机制至今仍然不清楚，有研究发现Hippo信号途径与NPHP的发病有关。KIBRA是Hippo信号通路的上游影响因子，同时KIBRA自身也与细胞极性蛋白有相互作用，在课题组前期实验中，NPHP1敲除MDCK细胞系KIBRA的表达升高，我们推测Hippo信号通路可能通过KIBRA参与Ⅰ型肾单位肾痨的发病过程。本实验利用课题组前期构建的Ⅰ型肾单位肾痨小鼠模型，通过转染AAV9-kibra-RNAi病毒构建KIBRA敲低的小鼠模型从而探究Hippo信号途径在Ⅰ型肾单位肾痨发病机制中的作用，同时，探究人脐带间充质干细胞对Ⅰ型肾单位肾痨的治疗作用以及Hippo信号通路在其中的调控作用。 结果 本实验利用腺相关病毒(AAV9-KIBRA-RNAi)转染来构建KIBRA敲低的肾单位肾痨小鼠(NPHP1-/-)模型，在小鼠5周龄时通过尾静脉注射的方式转染病毒（n=6），小鼠12周龄时处死一半的小鼠并留取组织，剩下一半的小鼠在36周龄时取材。通过蛋白水平检测以及免疫荧光验证KIBRA敲低情况以及KIBRA在小鼠肾脏的表达情况，HE染色和PAS染色来观察小鼠肾脏表型的改善情况，结果显示，敲低KIBRA的NPHP1-/-小鼠肾脏囊肿减少，间质纤维化有所减轻，为了进一步探究敲低KIBRA改善NPHP1-/-小鼠肾脏的机制，通过免疫组化来观察Hippo信号通路相关因子在小鼠肾脏的表达情况。结果显示，敲低KIBRA能促进肾小管P-MST1的表达，促进YAP在胞质的滞留以及磷酸化，抑制YAP的核转位，抑制肾囊肿形成;减少小管细胞CTGF的表达，抑制肾间质细胞FSP1的表达。HUCMSCs治疗可抑制Ⅰ型肾单位肾痨的小鼠模型的肾脏囊肿形成;促进Ⅰ型肾单位肾痨的小鼠肾脏肾小管p-MST1的表达，同时促进YAP在肾小管细胞胞质的滞留以及YAP的磷酸化。 结论 Hippo信号通路可能通过KIBRA介导Ⅰ型肾单位肾痨的发病，敲低KIBRA可抑制NPHP的肾囊肿形成和肾纤维化，抑制疾病进展。HUCMSCs治疗可能通过非经典Hippo信号通路MST1/YAP抑制Ⅰ型肾单位肾痨的小鼠模型的肾脏囊肿形成和肾间质纤维化。 收起