摘要: 肾单位肾痨(nephronophthisis，NPHP)是一种常染色体隐性遗传的囊性肾病，大多数患者进展为终末期肾病(end-stage kidney disease，ESRD)，占儿童终末期肾病(ESRD)的15％。早期干预肾单位肾痨可大大延缓肾脏疾病进展，但在临床工作中大多数就诊的患者... 展开 肾单位肾痨(nephronophthisis，NPHP)是一种常染色体隐性遗传的囊性肾病，大多数患者进展为终末期肾病(end-stage kidney disease，ESRD)，占儿童终末期肾病(ESRD)的15％。早期干预肾单位肾痨可大大延缓肾脏疾病进展，但在临床工作中大多数就诊的患者已处于疾病的晚期。目前发现25种不同类型编码NPH蛋白的基因突变引起的，其中NPHP1是最主要致病基因;NPHP1病理生理主要表现为显著弥漫性肾间质纤维化伴炎症细胞浸润及皮髓质交界处肾小管扩张伴囊肿形成。而间质纤维化与细胞接触密切相关;研究表明，Hippo信号通路可以通过细胞接触，细胞物质的转运等参与了细胞的纤维化及细胞凋亡等一系列的生物作用，然而，Hippo信号通路在Ⅰ型肾单位肾痨中所起的作用以及其机制都尚未清楚。因此，本实验旨在探讨Hippo在Ⅰ型肾单位肾痨中的作用及其潜在机制，以及干扰Hippo信号通路上游因子对该信号通路及Ⅰ型肾单位肾痨的表型改变。 研究目的： 本研究的目的是探索KIBRA调节HIPPO信号通路在Ⅰ型肾单位肾痨体外模型中肾纤维化的作用及潜在机制。 研究方法： 我们以犬肾小管上皮细胞(MDCK)为原始体外模型，在MDCK中使用shRNA-AAV-NPHP1建立Ⅰ型肾单位肾痨体外模型(NPHP1)，对MDCK及NPHP1进行转录组测序并分析KEGG及GO通路富集情况，通过Q-RTPCR、蛋白质免疫学印迹(Western Blot)和免疫荧光(IF)验证相关蛋白的表达;并以siRNA-Kibra以及shRN A-AAV-NPHP1双干扰建立模型，通过Q-RTPCR、蛋白质免疫学印迹(Western Blot)和免疫荧光(IF)及转录组数据观察信号通路在模型中的影响。 研究结果： shRNA-NPHP1敲低MDCK细胞NPHP1表达后，通过全转录组测序结果显示，敲低NPHP1后差异基因富集较大的通路包括:细胞连接、细胞增殖。KEGG通路富集显示:敲低NPHP1后差异基因富集前30的分子通路包含Hippo信号通路。验证实验与对照组比较，Hippo信号通路中上游激活因子:FRMD6，KIBRA和NF2的mRNA水平显著上调，KIBRA蛋白表达水平上调。信号传递关键因子Mst1，SAV1，MOB1A的mRNA水平均显著上调;LATS1和LATS2的mRNA水平轻微升高，蛋白表达水平无明显变化;p-MST1 和p-LAST1水平显著上调;CTGF表达上调，提示Hippo途径被激活。同时敲低MDCK细胞NPHP1与Kibra表达，与NPHP1-组比较，上游激活因子:KIBRA的mRNA及蛋白表达水平均显著下降。信号传递关键因子Mst1，SAV1，MOB1A的mRNA水平无明显变化;LATS1和LATS2的mRNA水平轻微下降，蛋白表达水平LATS1水平下调;p-MST1和p-LAST1显著下调，CTGF表达下调。激活的Hippo途径可在一定程度上被抑制，且纤维化可得到改善。 研究结论： 敲低Kibra可能通过调节Hippo-YAP/TAZ信号通路改善肾单位肾痨的纤维化。 收起