摘要: 背景和目的：胰腺癌是一种恶性进展极快、预后差、诊断和治疗困难的消化道肿瘤，其发病率和死亡率逐年攀升。目前，以特异性基因的表达为导向的靶向治疗是胰腺癌疾病领域的研究热点。但由于肿瘤分化的差异性，目前仍没有一种单一的靶向治疗方案被证明... 展开 背景和目的：胰腺癌是一种恶性进展极快、预后差、诊断和治疗困难的消化道肿瘤，其发病率和死亡率逐年攀升。目前，以特异性基因的表达为导向的靶向治疗是胰腺癌疾病领域的研究热点。但由于肿瘤分化的差异性，目前仍没有一种单一的靶向治疗方案被证明是非常有效的。但相关生物标记物研究的不断进展给更多胰腺癌患者的疾病治疗带来了曙光。虽然胰腺癌的靶向治疗仍然存在许多障碍，但令人振奋的是，很多研究在破译胰腺癌的异质性方面取得了不错的进步。所以，将常规治疗和靶向治疗相结合将是有效治疗这种致命疾病的关键。近年来的研究还发现环状RNA(circular RNA,circRNA)在胰腺癌细胞中起重要的调节作用，胰腺癌细胞（pancreatic cancer cells,PCCs)中circRNA的异常表达可以促进胰腺癌的发生和发展。然而，circRNA在癌症相关胰腺星状细胞(cancer-related pancreatic stellate cells,CaPSCs)的作用尚不清楚。因此，本研究旨在探究CaPSCs细胞通过circRNA/微小RNA(MicroRNA,miRNA)/靶蛋白轴促进胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭，为胰腺癌的治疗提供新的策略。 方法：在本研究中，我们采用组织块外植法和改良的酶消化密度梯度离心法从5例胰腺癌患者的癌组织中分离、纯化出CaPSCs细胞，从5例良性胰腺疾病患者的正常胰腺组织中分离、纯化出正常胰腺相关胰腺星状细胞(Normal pancreas-associated pancreatic stellate cells,NaPSCs）。将上述胰腺星状细胞（Pancreatic stellate cells,PSCs）与胰腺癌细胞Panc-1采用Transwell体系共培养后，使用CCK-8实验检测与不同的PSCs细胞共培养后的Panc-1细胞的增殖能力，筛选出对Panc-1细胞增殖能力促进作用最强的CaPSCs1细胞和对Panc-1细胞增殖能力促进作用最弱的NaPSCs1细胞。然后通过RNA高通量测序比较CaPSCs1细胞和NaPSCs1细胞之间的circRNA,miRNA和mRNA的表达谱。通过生物信息学分析选择候选circRNA/miRNA/靶蛋白mRNA调控轴。接着在CaPSCs1细胞中沉默目的circRNA和过表达目的miRNA，分别通过RT-qPCR和Western blot检测circRNA,miRNA,靶蛋白mRNA及靶蛋白的表达。最后同时采用CCK-8实验、划痕实验和Transwell迁移/侵袭实验检测不同共培养组中Panc-1细胞的增殖、迁移和侵袭能力。 结果：生物信息学分析中前3位差异表达最大的circRNA为chr7:154954255-154998784+,chr10:12081472-12120267+和chr10:76909966-77019099+，其中差异表达最大的circRNA通过RT-qPCR再次验证，这3个circRNA的表达趋势与测序结果一致，但chr7：154954255-154998784+在CaPSCs1细胞中表达上调最为显著。之后利用生物信息学分析从候选靶点中筛选出chr7:154954255-154998784+/miRNA4459/KIAA0513轴。沉默chr7:154954255-154998784+后，CaPSCs1细胞中miRNA4459表达上调，KIAA0513表达下调。此外，与chr7:154954255-154998784+沉默的CaPSCs1细胞共培养后，Panc-1细胞的CCK-8实验、划痕实验和Transwell迁移/侵袭实验表明其增殖、迁移和侵袭能力下降。当miRNA4459在CaPSCs1细胞中过表达时，chr7:154954255-154998784+和KIAA0513的表达下调。此外，与过表达miRNA4459的CaPSCs1细胞共培养后，Panc-1细胞的CCK-8实验、划痕实验和Transwell迁移/侵袭实验表明其增殖、迁移和侵袭能力下降。 结论：Chr7:154954255-154998784+可能通过CaPSCs细胞中的miRNA4459/KIAA0513轴促进胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭，这可能成为未来胰腺癌患者重要的治疗靶点。 收起