摘要: 由于深海来源真菌生存环境的特殊性，与陆地来源真菌相比，它们产生结构特异次级代谢产物的可能性更高。而天然产物的结构与其生物活性有着密切的关联，结构新颖的天然产物为寻找增强药物的特异性和有效性、减少毒副作用和防止耐药性作用的先导化合物... 展开 由于深海来源真菌生存环境的特殊性，与陆地来源真菌相比，它们产生结构特异次级代谢产物的可能性更高。而天然产物的结构与其生物活性有着密切的关联，结构新颖的天然产物为寻找增强药物的特异性和有效性、减少毒副作用和防止耐药性作用的先导化合物提供了更多的机会，对研究药物作用新靶点、新机理等也具有重要指导意义。因此，从深海真菌次级代谢产物中寻找结构新颖的单体化合物，成为发现药物的先导化合物的重要手段。 为了寻找深海真菌来源结构新颖且活性良好的药物先导化合物，本论文以33株深海来源真菌作为筛选对象，实验内容包括：目标菌株筛选，目标菌株的分离纯化，次级代谢产物的结构鉴定，单体化合物抗肿瘤生物活性评价。首先，将33株深海真菌进行4种培养基的小规模发酵培养，得到粗提物后，利用薄层色谱，LC-MS，1H-NMR等化学方法，筛选出次级代谢产物丰富的菌株。同时，对粗提物进行抗肿瘤生物活性评价，综合次级代谢产物丰富度较好以及抗肿瘤活性评价表现良好的菌株。最终，确定产黄青霉（Penicillium chrysogenum MCCC3A00292）为目标菌株。然后，对该目标菌株进行大米培养基的大规模发酵培养。以薄层色谱和1H-NMR为指导，综合运用正相硅胶、ODS、Sephadex LH-20、半制备HPLC等分离方法，对大规模发酵得到的提取物进行系统的分离、纯化。最终，经NMR、ECD、CD等技术手段鉴定出16个单体化合物，包括5个新化合物和11个已知化合物。其中三个新化合物为peniciversiols A-C（1～3），另外两个新化合物是penicilactone A（6）和penicilactone B（7），均为内酯衍生物。新化合物的平面结构通过综合分析HRESIMS和NMR的数据鉴定，而它们的绝对构型是根据实验ECD谱图和计算ECD数据对比鉴定。其中，化合物1是第二个以2,3-二氢吡喃-4-单环为特征的化合物。而化合物6和7是首次分离出的γ-内酯衍生物，由一个1,3-二羟基-5-甲基苯单元，和α-甲基-γ-羟基-γ-乙酸α,β-不饱和-γ-内酯，以及α-羟基-γ-甲基-γ-乙酸α,β-不饱和-γ-内酯单元酯化而形成的。另外11个已知化合物分别为：decumbenone A（4），decumbenone B（5），3,3′-dihydroxy-5,5′-dimethyldiphenyl ether（8），Aspermutarubrol（9），3-hydroxy-5-(3-hydroxy-5-methylphenoxy)benzoic acid（10），3,4-dihydroxy-5-(3-hydroxy-5-methylphenoxy)benzoic acid（11），violaceol-Ⅱ（12），3,8-dihydroxy-4-(2,3-dihydroxy-1-hydroxymethylpropyl)-1-methoxyxanthone（13），Asperdemin（14），Cyclopenol（15），radiclonic acid（16）。 对所有鉴定出的单体化合物进行五种人体癌细胞（BIU-87，ECA109，BEL-7402，PANC-1和Hela-S3）的细胞毒活性评价，化合物1对BIU-87细胞系具有选择性抑制作用（IC50=10.21μM），而化合物4，5，8和12～16对ECA109，BIU-87和BEL-7402细胞系表现出抑制活性，且IC50值在7.70μM到20μM之间。 收起