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国家工程技术图书馆
2022年11月29日
摘要: 胃癌是发病率和死亡率均较高的常见肿瘤之一,由于胃癌的早期诊断困难,通常患者诊断明确时已处于进展期,治疗效果不佳。提高早期胃癌的诊断率,或者研究靶向治疗胃癌的新作用位点是我们科研工作努力的方向。miRNA是一类非编码RNA,通过结合mRNA导致... 展开 胃癌是发病率和死亡率均较高的常见肿瘤之一,由于胃癌的早期诊断困难,通常患者诊断明确时已处于进展期,治疗效果不佳。提高早期胃癌的诊断率,或者研究靶向治疗胃癌的新作用位点是我们科研工作努力的方向。miRNA是一类非编码RNA,通过结合mRNA导致后者的降解或者是表达的抑制。该过程涉及了发育、分化、凋亡等多种生理过程,同时其失调也参与人类疾病包括癌症的发生。本课题组前期研究发现胃癌组织中miR18b的表达水平明显的上调,提示其可能参与胃癌的发生以及病情的进展。此外前期研究还发现胃癌组织中miR195水平降低,且已验证其通过直接作用于靶点AKT3,抑制体外胃癌细胞的功能学特性。 目的:对miR18b在胃癌中的靶点进行筛选和验证;进一步研究miR-18b对体外胃癌细胞功能学的影响;补充研究miR195对于体内胃癌细胞功能的影响。 方法:利用生物信息学的软件和分子功能注释系统对miR18b的作用位点进行分析,然后通过进行双荧光素酶实验,对疑似靶点进行进一步的验证。通过MTS方法、划痕实验和侵袭实验观察miR18b表达的下调对体外功能实验包括胃癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。建立裸鼠的移植瘤模型,通过瘤体内局部多点注射miR-195agomir和NC的方式,探讨miR195对于体内胃癌细胞功能的影响。 结果:生物信息学软件和分子功能注释系统筛选出NEDD9作为miRNA18b的疑似靶点,双荧光素酶报告实验的验证结果显示转染miR-18b的野生型基因载体和NC组比,荧光素酶活性明显降低,然而转染miR-18b和NC的突变型基因载体的荧光索酶活性差别不大,这表明NEDD9的3'URT是miRNA18b的直接结合位点。细胞功能学实验结果显示诱导miR18b表达下调可以抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。miR-195的体内功能学实验结果显示miR-195agomir可以抑制裸鼠皮下移植瘤的生长。 结论:NEDD9是miR18b在胃癌细胞中的直接靶点;miR18b促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭;miR195和靶点AKT3的结合抑制了肿瘤的生长。 收起
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