摘要: 目的：观察锌对体外培养的人肝癌细胞HepG2的影响，探讨锌对HepG2细胞的生长变化特征及其机制，为进一步研究肝癌的防治提供实验依据。 方法：体外常规培养人肝癌细胞取对数增长期细胞进行实验。分正常对照组、加锌组（终浓度分别为50、100、150、... 展开 目的：观察锌对体外培养的人肝癌细胞HepG2的影响，探讨锌对HepG2细胞的生长变化特征及其机制，为进一步研究肝癌的防治提供实验依据。 方法：体外常规培养人肝癌细胞取对数增长期细胞进行实验。分正常对照组、加锌组（终浓度分别为50、100、150、200、250μmol/L），其细胞分别培养24h。MTT比色法检测细胞活力，倒置显微镜和AO/EB染色观察细胞形态学的改变，以此判定不同浓度锌对人肝癌细胞HepG2形态特征的改变；流式细胞术分析细胞周期和凋亡率，免疫组化法分析Bax、Bcl-2蛋白表达变化，Western blot分析Bax、Bcl-2和wt-P53蛋白表达的变化，采用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法分别检测不同浓度锌对细胞培养上清液中SOD活性和MDA含量，探讨锌对肝癌HepG2细胞的作用机制。实验结果用SPSS13.0软件进行处理，用sigma plot 10.0软件作图。 结果： 1.高锌对体外培养的人肝癌细胞HepG2的生长活性有抑制作用。MTT比色法结果显示，随着Zn2+浓度的递增，HepG2细胞的存活率有下降的趋势，Zn2+浓度为250μmol/L时，细胞存活率为69％，明显低于对照组（p＜0.01），以此作为后续主要实验浓度。 2.倒置显微镜和AO/EB染色结果发现，250μmol/L锌作用HepG2细胞24小时可见HepG2细胞数量和形态学变化：细胞数量较对照组明显减少，细胞变细长、体积缩少、细胞皱缩和分裂相减少等改变，凋亡细胞增多。 3.250μmol/L锌作用HepG2细胞24小时后，可出现典型的凋亡征象：流式细胞术测得细胞凋亡率为9.8％，细胞周期无明显改变。 4.免疫组织化学法和Western blot结果显示：250μmol/L锌作用HepG2细胞24小时后Bax蛋白表达升高、Bcl-2蛋白的表达下降， wt-P53蛋白表达降低（p＜0.05）。 5.250μmol/L锌作用HepG2细胞24小时后，细胞SOD活性增加，MDA含量降低，与对照组比较其差异有统计学意义（p＜0.05）。 结论： ⒈ 锌（Zn2+）的浓度为250μmol/L时，体外作用人肝癌HepG2细胞24小时可以影响其生存活力。 ⒉ Zn2+的浓度为250μmol/L时，体外作用人肝癌HepG2细胞24小时，通过诱导凋亡抑制其增殖能力。 ⒊ Zn2+可增加人肝癌HepG2细胞Bax蛋白表达，降低Bcl-2蛋白表达，使Bax/Bcl-2的比值增加，介导人肝癌HepG2细胞凋亡。 ⒋ Zn2+可抑制人肝癌HepG2细胞wt-P53蛋白的表达，增加SOD活力，降低MDA含量，增强机体的抗氧化能力。表明Zn2+可能是通过非wt-P53途径介导人肝癌细胞凋亡。 收起