摘要: 目的：1.探讨兔真皮干细胞(Dermis stem cells，DSCs)的体外分离培养和鉴定方法，初步对其生长特性进行研究，并为生物组织工程提供一种新的种子细胞及成熟的分离鉴定方法。2.将分离培养的第2代真皮干细胞与表面低温去合金化处理后NiTi记忆合金共培养... 展开 目的：1.探讨兔真皮干细胞(Dermis stem cells，DSCs)的体外分离培养和鉴定方法，初步对其生长特性进行研究，并为生物组织工程提供一种新的种子细胞及成熟的分离鉴定方法。2.将分离培养的第2代真皮干细胞与表面低温去合金化处理后NiTi记忆合金共培养，为NiTi记忆合金表面低温去合金化处理后材料的医学生物相容性进行初步评价。 方法：1.以新生新西兰大白兔为研究对象，机械法直接分离得到真皮组织，采用酶消化法获取细胞，利用干细胞贴壁粘附生长的特性获取高克隆细胞群，并进行传代筛选。应用流式细胞技术检测细胞周期，免疫细胞化学法检测细胞表面分子的表达。2.以表面低温去合金化处理后NiTi记忆合金作为研究对象，模拟体内环境，进行生理盐水和PBS接触角测定，溶血率、动态凝血时间，血小板粘附试验。将真皮干细胞和表面低温去合金化处理后NiTi记忆合金共培养，绘制真皮干细胞生长曲线，原子吸收光度计培养液镍离子浓度测定，羟脯氨酸测定。 结果：原代培养的兔真皮细胞经过连续传代培养至第3代，细胞形态均一。流式细胞仪细胞周期分析显示，在体外培养第3天％G1=55.8，％S=34.6。免疫细胞化学显示：细胞表面波形蛋白(vimentin)、CD34表达阳性，细胞角蛋白19(cytoKeratinl9)、Ⅷ因子和巢蛋白(nestin)表达阴性。PBS表面低温去合金化处理后接触角平均为57.6°，粘附血小板数量少，形态正常，羟脯氨酸测定显示细胞在NiTi形状记忆合金表面低温去合金化处理后生长正常，原子吸收光谱法培养液镍离子浓度测定显示在表面低温去合金化处理后镍离子释放明显减少。 结论：新生新西兰大白兔真皮组织中存在真皮干细胞，该细胞是间充质干细胞的又一重要来源，具有广阔的生物组织工程应用前景。NiTi形状记忆合金表面低温去合金化处理后其生物相容性良好，与传统NiTi形状记忆合金相比具有明显的优势，具有很好的医学应用前景。 收起