摘要: Sonichedgehog(Shh)是脊椎动物中果蝇体节极性基因Hedgehog(Hh)的同源基因之一，它所编码的分泌性糖蛋白是一类重要的信号传导分予，在胚胎发育和器官形成过程中发挥重要作用。Bonemorphogeneticproteins(Bmps)是TGF-β信号分子超家族的成员，在多种发... 展开 Sonichedgehog(Shh)是脊椎动物中果蝇体节极性基因Hedgehog(Hh)的同源基因之一，它所编码的分泌性糖蛋白是一类重要的信号传导分予，在胚胎发育和器官形成过程中发挥重要作用。Bonemorphogeneticproteins(Bmps)是TGF-β信号分子超家族的成员，在多种发育过程发挥调控功能。胸腺和法氏囊属于中枢免疫器官，而且法氏囊是鸟类所特有的，它们在机体的免疫防御方面发挥重要作用。 在多种组织和器官的发生过程中，Shh和Bmp2共同参与上皮细胞与间质细胞之间的相互作用，在器官发生过程中发挥调控功能。近年来对于Shh和Bmp2在胸腺中的研究集中于Shh和Bmp2对人和小鼠胸腺中T淋巴细胞分化的调控作用，而在鸡胚胸腺、法氏囊发育过程中Shh和Bmp2的研究尚未见报道。 本试验首先利用RT-PCR的方法获得了鸡的Shh摹因490bp片段，将其克隆入pGEM-Teasy载体。利用重组的含Shh的质粒和已有的含Bmp2基因片段的质粒，分别进行酶切制备成线性化DNA，体外转录制备DIG标己的正义和反义RNA探针。采用切片原位杂交方法，研究Shh和Bmp2在鸡胚胸腺和法氏囊发育过程的时空表达图式。结果表明，在鸡胚胸腺的发育过程中，孵化11天时，Shh主要在被膜下上皮细胞和血管周围的上皮细胞中表达，Bmp2在被膜下上皮细胞和间质中未分化、初分化的淋巴细胞中表达；孵化13天时，Shh在胸腺小叶间被膜下上皮细胞和间质中的网状细胞中表达，Bmp2在胸腺小叶间的上皮细胞、结缔组织的异嗜性粒细胞和胸腺小叶内淋巴细胞样细胞中表达；孵化15天时，Shh在胸腺小叶间网状上皮细胞和间质中的网状细胞中表达，Bmp2在胸腺小叶内中、小淋巴细胞和胸腺小叶间网状上皮细胞中表达；孵化17天时，Shh在胸腺小叶间星型网状上皮细胞和血管周围网状上皮细胞中表达，Bmp2在包绕血管的上皮细胞和皮质内中、小淋巴细胞以及髓质的淋巴细胞中都有表达；孵化20天时，Shh在围绕微血管的星型网状上皮细胞和结缔组织网状细胞中表达，Bmp2在淋巴细胞样细胞、淋巴细胞和胸腺小体周围的网状上皮细胞中表达，在淋巴细胞中的表达较强烈。从孵化11天到20天，Shh在胸腺淋巴细胞中几乎不表达。 在法氏囊发育过程中，孵化13天时，Shh在上皮芽内上皮细胞和结缔组织中的网状细胞中表达，Bmp2在上皮芽内上皮细胞和侵入上皮细胞间隙的生血干细胞以及散在分布、大小不等、圆形或椭圆形淋巴细胞样细胞中表达；孵化15天时，Shh在粘膜下上皮细胞、滤泡内扁平上皮细胞以及间质中的网状细胞中表达，Bmp2在滤泡内淋巴细胞，粘膜下上皮细胞和中、小淋巴细胞以及间质中的淋巴细胞样细胞、网状细胞中表达；孵化16天时，Shh在附着滤泡上皮(follicle-associatedepitheliumFAE)和滤泡间表面上皮细胞(interfollicularsurfaceepitheliumISE)以及滤泡内未分化的基质上皮细胞中均表达；孵化17天时，Shh在粘膜下扁平上皮细胞、滤泡内网状上皮细胞中表达，Bmp2在滤泡内间质细胞、淋巴样细胞，淋巴细胞和粘膜下上皮细胞中表达；孵化20天时，Shh在粘膜下扁平上皮细胞、滤泡内网状上皮细胞和间质网状细胞中表达，Bmp2在滤泡内的中、小淋巴细胞和滤泡间间质淋巴样细胞以及扁平上皮细胞中表达。 通过本试验，研究了Shh和Bmp2这两个基因在鸡胚胸腺和法氏囊发育过程的时空表达图式，提示Shh和Bmp2有可能参与了鸡胚胸腺和法氏囊微环境的形成。为进一步研究Shh和Bmp2在鸡胚胸腺和法氏囊发育以及T、B淋巴细胞分化中的调控作用奠定了基础，并为探讨上皮细胞与间质细胞之间相互作用这一发育生物学基本问题提供了定的实验依据。 收起