摘要: 目的 1.建立双胸蚓DNA酶分离纯化的技术体系;2.对该酶的理化性质及其酶学性质进行研究.方法 1.双胸蚓组织中DNA酶的发现 用不同浓度的双胸蚓组织提取液与RNA、环状DNA及线状DNA在37℃反应1小时后用1%的琼脂糖凝胶电泳对其反应产物进行观察;双胸蚓组织... 展开 目的 1.建立双胸蚓DNA酶分离纯化的技术体系;2.对该酶的理化性质及其酶学性质进行研究.方法 1.双胸蚓组织中DNA酶的发现 用不同浓度的双胸蚓组织提取液与RNA、环状DNA及线状DNA在37℃反应1小时后用1%的琼脂糖凝胶电泳对其反应产物进行观察;双胸蚓组织粗提取液、双胸蚓组织蛋白粗提取液及双胸蚓组织去蛋白提取液分别与pBV220-γ-INF质粒37℃反应1小时后用1%的琼脂糖凝胶电泳对其反应产物进行观察.2.双胸蚓组织中DNA酶的分离纯化 采用蔗糖溶解双胸蚓,并选择性酸变性制备双胸蚓组织粗提取液,再经选择性热变性、硫酸铵分段盐析、DEAE-纤维素（DE52）柱层析及超滤膜分级分离对双胸蚓组织中DNA酶进行分离纯化.3.双胸蚓组织中DNA酶的酶学性质研究 将纯化的DNA酶分别与环状pBV220-γ-INF37℃反应1小时后,用1%的琼脂糖凝胶电泳对其反应产物进行观察.将该酶在不同温度下与小牛胸腺DNA反应后测定酶的活力单位.将该酶在不同pH条件下与小牛胸腺DNA反应后测定酶的活力单位.将该酶在不同温度下保温3小时后与小牛胸腺DNA进行反应,并测定活力单位.将该酶置于不同pH条件下24小时后与小牛胸腺DNA进行反应,并测定活力单位.在DNA酶的酶促反应体系中加入终浓度相同的二价金属阳离子41℃下、pH5.4准确反应15分钟后测定酶的活力单位.在不同的NaCl浓度下41℃、pH5.4下准确反应15分钟后测定酶的活力单位.利用SDS-PAGE及Sephacryl S-200凝胶过滤测定分子量.结论 双胸蚓组织中存在一种DNA内切酶,对RNA无作用,其本质为蛋白质,分子量为28.8KD;该酶极度耐酸、耐热,以小牛胸腺DNA为底物时,最适pH为5.4,最适温度为41℃,可被Mg<'2+>、Ba<'2+>、Mn<'2+>明显的激活;低浓度的Na<'+>可提高该酶的活性. 收起