摘要: 蚯蚓是一种常用的动物药材，其体内含有丰富的蛋白质和活性物质。蚯蚓与人类关系十分密切，除作为传统中药外，还可提取蚓激酶、多种氨基酸等活性成分。蚓激酶是从蚯蚓中提取的一类具有纤溶酶活性的蛋白质，具有溶解血栓的作用，是目前最具有开发前景... 展开 蚯蚓是一种常用的动物药材，其体内含有丰富的蛋白质和活性物质。蚯蚓与人类关系十分密切，除作为传统中药外，还可提取蚓激酶、多种氨基酸等活性成分。蚓激酶是从蚯蚓中提取的一类具有纤溶酶活性的蛋白质，具有溶解血栓的作用，是目前最具有开发前景的纤溶药物之一。蚯蚓体内含还有多种氨基酸，本文采用多种酶水解法对蚯蚓提取物中蛋白浆液水解，研究了蚯蚓中的复合氨基酸。本文主要综述了目前研究现状，对蚯蚓部分有效成分开展了基础研究。 本论文采用分级盐析法对赤子爱胜蚯蚓中蚓激酶的提取工艺进行研究，通过纤维蛋白溶解圈面积和蚯蚓蛋白质含量的比值来表征蚓激酶的比活力。并通过单因素实验设计研究了提取缓冲液pH、第一次盐析硫酸铵浓度、第二次盐析硫酸铵浓度对蚓激酶提取的影响，并用SDS-PAGE测定了酶的分子量，并探讨了金属离子对酶活力的影响。在复合氨基酸的制备中，对蚯蚓进行了脱脂、脱色、除臭试验进行了研究，选取提取温度、水解时间、pH、底物浓度对水解条件的影响。并采用正交实验设计考察最佳提取温度、最佳提取时间、最佳pH、最佳底物浓度，优化了提取工艺条件。 蚓激酶的提取工艺结果表明，蚓激酶的最佳提取条件为：缓冲液pH为7.5，第一次盐析时最佳饱和硫酸铵浓度为40％，第二次盐析硫酸铵浓度为80％，此条件下蚓激酶的比活力最高。提高酶活力的离子为K+、Na+、Mg2+、Ca2+、Fe3+，而Pb2+为抑制剂。通过电泳实验可知，蚯蚓中提取的蛋白质的分子量分布很广，从15kDa到90kDa都有分布，主要分布在15kDa、50kDa、70kDa和90kDa附近。 通过对蚯蚓的脱脂、脱色、除臭试验研究，得出以下结论：①就脱脂、除臭、脱色的方法而言，索式提取法优于浸提法。②就溶剂的脱脂、除臭、脱色的性能而言，研究所选溶剂以丙酮最佳。③当以丙酮为溶剂时，索式提取法、液固比为2:1的条件下，回流时间的延长对脱色、脱脂、脱臭无影响，均可获得白色、无臭的蚯蚓蛋白，脱脂率可达100％；而无水乙醇在相同条件下(索式提取法、液固比为2:1)，回流时间的延长对脱色无影响，对脱脂效果微有增长，但除臭效果甚差，不能根除腥味。本实验采用多种蛋白酶对蚯蚓浆液进行水解，由于不同蛋白酶的酶切位点不同，这样就可以使水解更为彻底。 中性蛋白酶水解20g蛋白浆液，在底物浓度为3％，调节pH为7.0左右，保持温度为40℃，水解2h后，测得氨基氮含量为33.62mg/100mL； 碱性蛋白酶水解20g蛋白浆液，在底物浓度为2％，调节pH为8.0左右，保持温度为50℃，水解2h后，测得氨基氮含量为41.32mg/100mL； 胰蛋白酶水解20g蛋白浆液，在底物浓度为3％，调节pH为8.0左右，保持温度为50℃，水解3h后，测得氨基氮含量为57.43mg/100mL。 收起