中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

[学位论文] 于大猛南京中医药大学 2012年博士导师: 瞿融共314页

摘要 : “十八反”是中药配伍禁忌的核心内容，对中医临床安全用药起着重要的指导作用。历代均有一定数量含反药配伍的方剂，临床亦有反药配伍治病的事实。“半蒌贝蔹及攻乌”是中药“十八反”的重要组成部分，本论文通过对“半蒌贝蔹及攻乌”同方配伍方剂的... 展开 “十八反”是中药配伍禁忌的核心内容，对中医临床安全用药起着重要的指导作用。历代均有一定数量含反药配伍的方剂，临床亦有反药配伍治病的事实。“半蒌贝蔹及攻乌”是中药“十八反”的重要组成部分，本论文通过对“半蒌贝蔹及攻乌”同方配伍方剂的配伍特征和主治病症特点的探讨，为“半蒌贝蔹及攻乌”同方配伍方剂能否在临床安全、合理应用提供参考。论文主要分两部分，第一部分是关于历代“半蒌贝蔹及攻乌”同方配伍规律的研究。收集整理了中国中医药数据库中从汉代至建国初期的方剂，共84464首，对其中“半蒌贝蔹及攻乌”同方配伍的1297首方剂，运用数据挖掘方法进行处理分析，探讨了“半蒌贝蔹及攻乌”同方配伍方剂的配伍特征和主治病症特点。结果表明： 1．“半蒌贝蔹及攻乌”是“十八反”配伍方剂中数量最多的一组。附子的使用频率远多于川乌、草乌。附子半夏是“半蒌贝蔹及攻乌”中最常见的配伍。 2．在乌头类药物与半夏同方配伍的方剂中，附子半夏同用方剂配伍的药物类别主要有补虚药、温里药、化痰药，常用药物有生姜、肉桂、人参、甘草、茯苓、白术等。主治病症性质为阳虚寒盛，兼有痰、湿或气滞，多用于脾胃病、肺系病，还涉及到心肝肾以及气血津液及肢体经络病症。常见食欲不振、畏寒、腹冷、疲乏、胸闷等症状。关联关系中较密切的有甘草-生姜、甘草-人参、腹冷-畏寒、人参-食欲不振。川乌半夏同用方剂配伍的药物类别主要有祛风湿药、活血化瘀药、补虚药、解表药。常用药物有天南星、川乌、白芷、当归、防风、细辛等。主治病症的性质为风寒痰瘀阻滞经络。多用于治疗肢体经络病及气血津液病，症状方面，前者以头痛、口眼歪斜、关节疼痛常见，后者以腹中痞块、瘰疬、痰核流注常见。关联关系中较密切的有没药-乳香、独活-羌活、草乌-无名肿毒、草乌-跌打损伤。草乌半夏配伍方剂与除外附子的乌头类药物半夏配伍方剂，在配伍特征和主治病症特点两方面与川乌半夏配伍方剂相近。在乌头类与瓜蒌类药物同方配伍的方剂中，以附子天花粉配伍者居多。附子天花粉同用方剂配伍的药物类别主要有补虚药、温里药、清热药，常用药物有白术、人参、防风、茯苓、肉桂、甘草等。主治病症的性质为阳气虚弱，津液上呈不足，郁热生毒。多用于治疗气血津液病和外科病。常见症状有疮、瘰疬、痈、疽、肩背痈肿等。关联关系较密切的有防风-细辛、肉桂-细辛、肉桂-畏寒。草乌天花粉同用方剂配伍的药物类别主要有清热药、解表药、祛风湿药，常用药物有白芷、防风、黄柏、当归、羌活、乳香、大黄等。主治病症的性质为毒瘀郁结，多用于外科病，常见症状有疮、无名肿毒、痈、疽、跌打损伤、肩背痈肿等。关联关系较密切的有没药-乳香、当归-防风、蓖麻子-无名肿毒、蓖麻子-疮。川乌天花粉同用方剂与草乌天花粉同用方剂的配伍规律相近。附子瓜蒌同用方剂配伍的药物类别主要有清热药、解表药、祛风湿药、活血化瘀药等。常用的药物有白芷、防风、当归、羌活、草乌等。主治病症的性质为毒瘀郁结，多用于外科病，常见症状有疮、无名肿毒、痈、跌打损伤、腹中痞块等。关联关系较密切的有天花粉-草乌、当归-防风、木鳖子-疮、蓖麻子-疮。除外附子的乌头类药物与瓜蒌类药物同用方剂配伍的药物类别主要有清热药、祛风湿药、补虚药、解表药等，常用药物有防风、细辛、肉桂、白芷、当归等。主治病症的性质为毒瘀郁结。多用于外科病及肢体经络病，前者以疮、无名肿毒、痈常见，后者以关节疼痛、头痛常见。关联关系较密切的有没药-乳香、大黄-黄柏、疽-痈、没药-痈、黄连-痈。在乌头类与贝母类药物同方配伍的方剂中，以川乌浙贝母配伍者居多，川乌浙贝母同用方剂配伍的药物类别主要有解表药、祛风湿药、化痰药、补虚药，常用药物有没药、大黄、当归、穿山甲、乳香等。主治病症的性质为痰瘀互结。多用于气血津液病和外科病，前者以腹中痞块、癥瘕常见，后者以痈、疽常见。关联关系较密切的有穿山甲-大黄、穿山甲-当归、腹痛-寒热往来、苍术-腹痛、青皮-腹痛。除外附子的乌头类药物与贝母类药物同用方剂配伍的药物类别主要有清热药、解表药、活血化瘀药、祛风湿药等，常用药物有当归、白芷、大黄、肉桂、甘草等。主治病症的性质为风寒痰瘀阻滞经络，多用于外科病及气血津液病，前者以无名肿毒、疮、痈常见，后者以腹中痞块、癥瘕常见。关联关系较密切的有独活-羌活、没药-乳香、赤芍-无名肿毒、柳枝-无名肿毒。在乌头类与白蔹同方配伍的方剂中，以附子白蔹同方配伍方剂居多。附子白蔹同用方剂配伍的药物类别主要有补虚药、温里药、清热药、活血化瘀药，常用药物有肉桂、当归、川芎、防风、甘草、细辛、白芷等。主治病症的性质为阳气虚弱，毒瘀郁结。多用于外科病及肢体经络病，前者以疮、跌打损伤、痈、疽常见，后者以关节疼痛、四肢麻木常见。关联关系较密切的有白芷-木香、川芎-当归、当归-跌打损伤、川芎-跌打损伤。川乌白蔹同用方剂配伍的药物类别主要有清热药、祛风湿药、活血化瘀药，常用的药物有当归、白芷、白及、肉桂、没药等。主治病症的性质为风寒湿毒瘀郁结。多用于外科病及肢体经络病，前者以疮、跌打损伤、无名肿毒常见，后者以关节疼痛、四肢拘急常见。关联关系较密切的有没药-乳香、草乌-大黄、疮-无名肿毒、牛膝-关节疼痛、大黄-疮。草乌白蔹同用方剂与除外附子的乌头类药物白蔹同用方剂，二者配伍特征和主治病症特点与川乌白蔹同用方剂相近。在乌头类药物与白及同方配伍的方剂中，以附子白及同方配伍方剂居多。附子白及同用方剂配伍的药物类别主要有温里药、活血化瘀药、清热药、补虚药，常用药物有当归、肉桂、白芷、白蔹、川芎等。主治病症的性质为阳虚寒凝，毒瘀郁结。多用外科病，常见症状有疮、跌打损伤、疽、痈、肩背痈肿等。关联关系较密切的有当归-肉桂、白芷-当归、黄芪-痈、防风-疮。川乌白及同用方剂配伍的药物类别主要有祛风湿药、清热药、活血化瘀药、解表药，常用药物有草乌、当归、、白蔹、白芷、大黄、没药等。主治病症的性质为风寒湿毒瘀郁结，多用于外科病，常见症状有无名肿毒、跌打损伤、痈、疽等。关联关系较密切的有乳香-没药、防风-疮、穿山甲-疮。草乌白及同用方剂与除外附子的乌头类药物白及同用方剂，二者配伍特征和主治病症特点与川乌白及同用方剂相近。第二部分为中药“十八反”基层医院应用现状调查及分析。方法是实地收集处方，并结合走访、座谈等。收集了河北省围场县中医院及9所乡镇卫生院近3年处方共78238首，其中含“十八反”的处方共255首，含“半蒌贝蔹及攻乌”处方198首。对处方配伍特征和主治病症特点的研究分析方法同第一部分。结果表明： 1．“半蒌贝蔹及攻乌”是“十八反”配伍处方中数量最多的一组。附子的应用频率远多于川乌、草乌。附子半夏是“半蒌贝蔹及攻乌”中最常见的配伍。反药配伍处方临床多用于常见病、多发病。医生开具反药处方的数量随着年龄和从业年限的增长而增加。 2．附子半夏配伍处方的药物类别以补气药为主，常用药物有茯苓、甘草、白术、丹参、黄芪、陈皮等。主治病症的性质为阳虚寒盛。多用于心系病、肺系病、脾胃病、肾系病，常见症状有畏寒、心悸、呕吐、心下痞、水肿等。关联关系较密切的有白术-茯苓、丹参-黄芪、山茱萸-腰痰、熟地黄-腰痠。川乌草乌半夏配伍处方的药物类别以祛风湿药为主，常用药物有甘草、地龙、黄芪、川芎、天麻等。主治病症的性质为外感风寒湿邪。多用于肢体经络病，常见症状有关节疼痛、头痛、肩痛等。关联关系较密切的有甘草-黄芪杜仲-关节疼痛。附子瓜蒌配伍处方的药物类别以补气药为主，常用药物有丹参、黄芪、桂枝、甘草、川芎、茯苓等。主治病症的性质为为阳虚寒凝，痰浊阻滞。多用于心系病、脾胃病，常见症状有心悸、胸痛、胸闷、呃逆、心下痞等。关联关系较密切的有川芎-郁金、丹参-酸枣仁、丹参-心悸、川芎-心悸。附子川贝母配伍处方的药物类别以化痰药为主，常用药物有茯苓、黄芪、白术、白芍、甘草等。主治病症的性质为心肾阳虚，水饮凌心射肺。多用于肺系病、心系病，常见症状有咳嗽、心悸、水肿等。关联关系较密切的有白芍-茯苓、丹参-茯苓、鳖甲-腹中痞块、山慈茹-腹中痞块。附子浙贝母同用处方配伍药物的类别以补气药为主，常用药物有白芍、延胡索、甘草、白术、炮姜等。主治病症的性质为脾肾阳虚。多用于脾胃病、肺系病，常见症状有胃脘痛、呃逆、心下痞、咳嗽等。关联关系较密切的有白芍-甘草、白芍-延胡索、旋覆花-呃逆、代赭石-呃逆。川乌浙贝母同用处方配伍药物的类别以祛风湿药为主，常用药物有牛膝、草乌、乳香、没药等。主治病症的性质为风寒湿痰瘀邪痹阻经络。多用于肢体经络病为主，常见症状有关节疼痛、腰痛等。关联关系较密切的有没药-乳香、没-牛膝、狗脊-腰痛、熟地黄-腰痛。草乌浙贝母同用处方与川乌浙贝母同用处方的配伍特征和主治病症特点，无明显差别。附子白及同用处方配伍药物的类别以理气药为主，常用药物有陈皮、川楝子、姜黄、砂仁、白术、甘草等。主治病症的性质为脾肾阳虚，多用于脾胃病，常见症状有畏寒、腹满、腹痛、心下痞等。关联关系较密切的有陈皮-姜黄、陈皮-川楝子、荔枝核-腹痛、莱菔子-腹满。海藻甘草同用处方配伍药物的类别主要有补虚药、化痰药、清热药，常用药物有浙贝母、柴胡、牡蛎、昆布、玄参等。主治病症的性质为痰瘀互结，气机郁滞，多用于气血津液病，常见症状有积聚、经前乳胀、瘰疬、胁痛、腹中痞块等。关联关系较密切的有牡蛎-浙贝母、浙贝母-柴胡、玄参-经前乳胀、玄参-积聚。收起

关键词 : 安全用药同方配伍规律半蒌贝蔹及攻乌病症特点药物类别

2. “易层”贴敷疗法治疗伤筋、骨痹的技术操作规范化研究

[学位论文] 李宇卫南京中医药大学 2013年博士导师: 黄桂成共311页

摘要 : 目的:(1)中医外治法因具有“简、便、验、廉”的优点，已广泛应用于骨科临床，其经局部皮肤给药，使药物直达病所，避免了胃肠吸收过程，减少了对胃肠的刺激及对肝肾的损害，是一种治疗伤筋（踝关节扭伤）及骨痹(膝OA)较为理想的中医治疗技术。本研究... 展开目的:(1)中医外治法因具有“简、便、验、廉”的优点，已广泛应用于骨科临床，其经局部皮肤给药，使药物直达病所，避免了胃肠吸收过程，减少了对胃肠的刺激及对肝肾的损害，是一种治疗伤筋（踝关节扭伤）及骨痹(膝OA)较为理想的中医治疗技术。本研究拟通过文献检索，探讨伤筋及骨痹的病因病机及治疗原则。(2)探讨“易层”贴敷疗法治疗伤筋的优化方案，并通过对伤筋与骨痹临床疗效的客观评估及统计分析，评价“易层”贴敷疗法的技术参数优化方案的有效性和安全性。方法:以国家“十一五”科技支撑计划课题《“易层”贴敷疗法临床应用的规范化研究》的前期工作为基础，分成两个阶段进行研究。第一阶段:根据贴敷药物湿度，药物分层两个技术参数，设定不同水平进行评价，优化“易层”贴敷疗法技术操作规程。第二阶段:通过对伤筋与骨痹临床疗效的客观评估及统计分析，对方案的安全性与有效性作出整体评价，以形成基于临床疗效的技术操作规范。使用非盲法研究，采用盲态评价。委托第三方对研究结果进行评估，客观评价“易层”贴敷疗法对踝关节扭伤及膝OA治疗的临床疗效，探讨“易层”贴敷疗法的组方研究及作用机理，为“易层”贴敷技术的创新及治疗踝关节扭伤及膝OA寻找新的途径。结果:(1)“易层”贴敷疗法技术参数的优化研究:共入组200例（其中22例无疗后疗效数据和安全性数据，治疗期间共脱落1例）。完成试验177例。A组（每天换药+三色敷药层+三黄油膏层）45例;B组（每天换药+单用三黄油膏层）47例;C组（3天换药+三色敷药层+三黄油膏层）42例;D组（3天换药+单用三黄油膏层）43例。A组在疼痛、肿胀、功能障碍方面的疗效明显优于其他各组，B组次之，C组再之，D组最差。 (2)“易层”贴敷疗法治疗伤筋、骨痹的技术参数优化方案的疗效评价研究（伤筋）:共入组160例（其中9例无疗后疗效数据和安全性数据，2例治疗期间出现药物过敏）。A组（经过技术参数优化方的“易层”贴敷疗法治疗）79例，B组（按奇正消痛贴膏说明书，清洁患部皮肤，开封后将药贴的塑料薄膜揭除，将小袋内的润湿剂均匀的涂在中间药垫表面，敷于患处，每贴24小时一换）81例，完成试验149例（A组74例、B组75例）。证候疗效有效率分别为:A组，98.7％，B组94.7％，构成比差异无统计学意义(P＞0.05)，提示两组疗效相当。A组，临床痊愈4/74(5.4％)，显效38/74(51.4％)，有效31/74(41.9％)，无效1/74(1.4％);B组，临床痊愈1/75(1.3％)，显效23/75(30.7％)，有效48/75(64.0％)，无效3/75(4.0％)。构成比差异有统计学意义(P＜0.05)，提示A组疗效优于B组。 (3)“易层”贴敷疗法治疗伤筋、骨痹的技术参数优化方案的疗效评价研究（骨痹）:共入组240例（其中17例无疗后疗效数据和安全性数据，治疗期间共3例因药物皮肤过敏中止）。完成试验220例。A组（经过技术参数优化方的“易层”贴敷疗法治疗）111例、B组（按复方南星止痛膏使用说明书，清洁患部皮肤，开封后将药贴的药面对准患处贴敷，贴24小时，隔日1次）109例。A组，临床痊愈3/111(2.7％)，显效44/111(39.6％)，有效62/111(55.9％)，无效2/111(1.8％);B组，临床痊愈0/112(0.0％)，显效31/112(27.7％)，有效63/112(56.2％)，无效18/112(16.1％)。两组比较，A组疗效优于B组，差异有统计学意义。结论:(1)“易层”贴敷疗法技术参数的优化研究:A组（每天换药+三色敷药层+三黄油膏层）治疗组是四个组中疗效最佳的方案。 (2)“易层”贴敷疗法治疗伤筋、骨痹的技术参数优化方案的疗效评价研究（伤筋）:易层贴敷疗法在治疗伤筋时是安全的，并且在改善疼痛、肿胀、功能、中医症候方面均有效果，并且比奇正消痛贴组具有更好的疗效。 (3)“易层”贴敷疗法治疗伤筋、骨痹的技术参数优化方案的疗效评价研究（骨痹）:易层贴敷疗法在治疗伤筋时是安全的,并且在改善疼痛、肿胀、功能、中医症候方面均有效果,并且比关节止痛膏组具有更好的疗效，安全性更高。收起

关键词 : 易层贴敷疗法膝关节骨关节炎急性踝关节扭伤中医古籍临床应用

3. 热毒宁注射液药效物质基础研究

[学位论文] 李海波南京中医药大学 2013年博士导师: 萧伟;姚新生共262页

摘要 : “热毒宁注射液”是由青蒿、金银花和栀子三味常用中药组成的复方中药注射液，具有清热、疏风、解毒之功效，临床上常用于治疗外感风热所致感冒、咳嗽，症见高热、微恶风寒、头痛、身痛、咳嗽痰黄;上呼吸道感染、急性支气管炎见上述证候。本文采... 展开 “热毒宁注射液”是由青蒿、金银花和栀子三味常用中药组成的复方中药注射液，具有清热、疏风、解毒之功效，临床上常用于治疗外感风热所致感冒、咳嗽，症见高热、微恶风寒、头痛、身痛、咳嗽痰黄;上呼吸道感染、急性支气管炎见上述证候。本文采用流感病毒致应激负荷小鼠模型，以对甲型H1N1流感病毒FM1株感染应激负荷小鼠的开始发病时间、生存质量和生存时间为考察指标，对“热毒宁注射液”成品及其经HP-20大孔吸附树脂柱分离得到的子馏分(RDN-1/RDN-2/RDN-3)进行活性评价，确定馏分RDN-3(95％乙醇洗脱部位)为“热毒宁注射液”的抗病毒活性部位。综合运用硅胶柱色谱、ODS柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、Toyopearl HW-40柱色谱以及反相MPLC、HPLC等多种色谱学分离手段，从活性部位(RDN-3)中共分离得到了63个化合物，通过理化性质和现代波谱学手段鉴定了其中56个化合物的结构，包括12个环烯醚萜类化合物，12个木脂素类化合物，3个香豆素类化合物，5个倍半萜类化合物，7个黄酮类化合物，4个咖啡酰奎宁酸类化合物，11个酚酸类化合物以及2个其他类型成分。其中japonicaside A（化合物6），jasmigeniposide B（化合物7），7，8，11-trihydroxy-1-hydroperoxy-4-guaien-3-one(化合物13)，7，8，11-trihydroxy-1-hydroperoxy-4-guaien-3-one(化合物14)，2-carboxy-4-methyl-α-methylene-3-(3-oxobutyl)-cyclohexaneacetic acid（化合物15），1,3,4,5-tetrahydro-7-hydroxy-5-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-8-methoxy-1,4-Methano-2-benzoxepin-10-methanol(化合物27)为新化合物。本论文还建立了“热毒宁注射液”成品的HPLC特征图谱，并对图谱中的主要色谱峰进行了化学分离和指认，完成了27个化合物的分离和结构鉴定，从中发现了3个新的环烯醚萜苷类成分，它们分别是6"-O-trans-feruloylgenipin gentiobioside(化合物B18)，2'-O-trans-caffeoylgardoside(化合物B23)和jasmigeniposide A(化合物B20);化学指认工作完成了色谱峰总峰面积78.8％色谱峰的指认。采用体外抗RSV（呼吸道合胞病毒）、EV-71（肠道病毒71型）、H3N2(甲型流感病毒H3N2)及H1N1（甲型流感病毒H1N1）对分离得到的36个化合物进行了体外抗病毒活性评价，活性结果显示:异绿原酸C及其甲酯、异绿原酸B、木犀草素、槲皮素和京尼平，对流感病毒(H1N1)表现出一定的抑制效果，其中木犀草素和异绿原酸C甲酯的EC50值小于50μ M，SI值大于10，可以关注，有待进一步研究;此外，槲皮素、木犀草素、异绿原酸B甲酯、异绿原酸C及其甲酯、异绿原酸A及其甲酯还表现出一定的体外抑制流感病毒(H3N2)的活性，木犀草素的EC50值小于50μM，SI值大于10，且在显微镜下可观察到明显的细胞保护作用，值得关注，有待进行深入研究;而体外抗EV-71病毒的活性结果显示，异鼠李素和木犀草素有一定的抑制活性，但其细胞毒性较大，选择指数(SI)较小，其体外抑制EV-71病毒的活性可能是其细胞毒性造成的;咖啡酰奎宁酸类化合物（新绿原酸及其甲酯、隐绿原酸及其甲酯、异绿原酸A、B、C及它们的甲酯化产物）均对RSV表现出高效低毒的抗病毒效果，其中4个单取代的咖啡酰奎宁酸及其甲酯化产物的EC50在10uM到30uM之间，SI（选择指数）大于30;6个二咖啡酰奎宁酸类化合物的EC50小于10uM，SI（选择指数）大于100，提示该类成分具有较好的体外抗RSV病毒活性。本研究的创新之处还在于对“热毒宁注射液”进行活性成分追踪分离时，发现复方中产生新的化学成分（即人工产物），我们选取其中含量较大，结构较有代表性的化合物6为例，对其结构、来源及稳定性进行了研究。本文采用高效液相-高分辨质谱及多级质谱碎裂和丰度等信息对标准品（分离得到的化合物6）和十二个不同批次的“热毒宁注射液”成品进行质谱分析，通过对比保留时间及二级碎裂行为的一致性，我们确定每个批次的热毒宁注射液中均含有该化合物。并通过UV、IR、NMR以及高分辨质谱分析最后确定了该化合物的结构和来源，直接证明了中药复方“热毒宁注射液”在制剂生产过程中产生了新的化学成分。这从一个方面说明了中药复方并不是单味药的简单加和，为研究中药复方配伍应用的合理性、科学性提供了一个实例，另一方面也说明用现代科学方法研究中药复方药效物质基础的重要性，为揭示中药复方配伍应用的科学内涵和制定科学的质量检测标准提供科学依据。这也是首次在“热毒宁注射液”制剂生产过程中发现的，并在成品中鉴定的稳定存在的新人工产物，该发现对“热毒宁注射液”质量标准的提升具有潜在的研究价值和意义。上述工作部分揭示了“热毒宁注射液”抗病毒的药效物质基础，为制定科学合理的质量控制方法提供了依据，同时也为复方药效物质基础的研究提供了一种可能的思路与方法。收起

关键词 : 热毒宁注射液动物实验抗病毒活性化学成分指纹图谱高效液相-质谱

4. 高维质谱成像数据的创新方法研究及在中药分析中的应用

[学位论文] 吴文湧南京中医药大学 2023年博士导师: 吴婉莹共259页

摘要 : 质谱成像(Mass Spectrometry Imaging,MSI)技术通过质谱直接扫描生物样品，可同时提供数百种分子的空间分布信息和分子结构信息，具有无标记、高内涵和异质性分析三大特点。作为新型分子影像技术之一，其在生物组织的空间异质性(Spatial heterogeneit... 展开质谱成像(Mass Spectrometry Imaging,MSI)技术通过质谱直接扫描生物样品，可同时提供数百种分子的空间分布信息和分子结构信息，具有无标记、高内涵和异质性分析三大特点。作为新型分子影像技术之一，其在生物组织的空间异质性(Spatial heterogeneity)研究方面显示出巨大的发展前景。通常而言,质谱成像数据具有高维度、高信息量、低信噪比和缺乏基准数据集等特点，这些都为成像数据的解析带来了极大的挑战。目前高维质谱成像数据分析流程可以分为:信号处理(Signal processing)、可视化(Visualization)、统计分析(Statistical analysis)、分子注释(Molecular identification)、分子验证和解释(Molecular validation and interpretation)这五个方面，本文主要针对其在可视化方面的研究瓶颈进行创新。高维质谱成像数据的可视化通常是通过降维生成的高光谱可视化图像(Hyperspectral images,HSIs)以及空间分割(Spatial segmentation)来进行研究。但目前对于高维质谱成像的高光谱可视化分析缺乏客观的评价指标;空间分割聚类算法类别数目的确定也仍不明确。针对以上两点高维质谱成像数据可视化分析中存在的问题，本文主要从以下三个方面来进行研究: 首先，建立基于信息熵的高维质谱成像数据降维及高光谱可视化评价方法。本文依据前期研究中建立的解析电喷雾电离质谱成像(Desorption electrospray ionization mass spectrometry imaging,DESI MSI)的实验方法，分别采集了 3 个人类前列腺癌活体组织和2个雄性小鼠大脑组织共计5个高维MSI数据用于进行高光谱可视化相关分析。针对上述采集得到每个高维MSI数据，分别基于5种降维算法:1)主成分分析Principal component analysis,PCA);2)t-分布随机近邻嵌入(t-distributed stochastic neighborhood embedding,t-SNE);3)主成分分析结合t-分布随机近邻嵌入(PCA-t-SNE);4)统一流形逼近和投影(Uniform manifold approximation and projection,UMAP);5)基于 Siamese Networks的大规模数据集结构保持降维算法(Siamese neural network trained on triplets,ivis),选取不同超参数(Hyperparameter)的水平，经过正交实验设计生成100张HSIs,共计500张HSIs用于后续的分析。本研究进一步选取和定义了 41个图像质量评价指标(Image Quality Assessment,IQA)以构建HSIs质量评价体系。研究发现表征图像清晰度(Image definition,IMGD)的指标对比度(Contrast,C)和表征图像信息量(Image information content,IMGIC)的指标信息熵(Image entropy,H)相关系数较小，呈现弱相关，有很好的互补性。因此，本课题拟采用其中的信息熵和对比度两个互补的指标评价HSIs的质量。为了论证其合理性，依次探讨了信息熵和对比度评价HSIs的贡献度，结果表明信息熵的优先级高于对比度，PCA-t-SNE通常能得到很好的可视化效果，同时选用PCA-t-SNE算法将算法进一步扩大算法超参数组合，论证了正交试验设计生成HSIs的代表性。此外，基于超像素分割得到的感兴趣区域(Region of interest,ROI)的平均质谱图和平均质谱图的差谱图分析，以及与苏木精/伊红染色(Hematoxylin-eosin staining,H&E)结果相比较，再次说明了优选得到的HSI的合理性。在与已知明确异质性区域划分的小鼠脑组织相比较，优选出来的最佳HSI分割出来了 22个组织微区，表明HSI相较于H&E能够提供更为丰富的异质性信息。最终，本课题确定基于信息熵排序，选择信息熵值前五中对比度最大的HSI作为最佳的高光谱可视化结果。其次，本文将上述建立的基于信息熵和对比度优选HSI的分析策略用于中药组织切片的空间异质性研究，系统对比了不同的空间分割算法及分割类别数目对于ROI区域分割的影响。选取鲜地黄(Rehmannia glutinosa Libosch.)、白术(Atractylodes macrocephala Koid.)、生附子(Aconiti Lateralis Radix.)、鲜天麻(Gastrodia elata Bl.)样本进行了相关研究。通过9种空间分割算法包括8种聚类算法和1种阈值分割算法对高光谱可视化分析优选得到的最佳HSI进行空间分割，并基于投票法(Majority voting)对 KMeans、GMM 和 Agglomerative Clustering三种空间分割的聚类结果进行了集成，从一定程度上对空间分割的结果进行了纠偏。9种空间分割算法包括:1)K均值聚类(K-means Clustering,KMeans);2)高斯混合模型聚类(Gaussian Mixture Model,GMM);3)基于密度的聚类(Density-Based Spatial Clustering Algorithm with Noise,DBSCAN);4)基于层次密度的噪声应用空间聚类(Hierarchical Density-Based Spatial Clustering of Applications with Noise,HDBSCAN);5)层次聚类(Agglomerative Clustering,AggC);6)均值漂移算法(Mean Shift algorithm,MSA);7)谱聚类(Spectral Clustering,SCA);8)基于简单线性迭代聚类超像素分割算法(Simple Linear Iterative Clustering,SLIC);9)图像多阈值自适应分割算法(Multi-Otsu Thresholding Image Segmentation,Multi-Otsu)。研究结果表明，KMeans、GMM和Agglomerative Clustering只要指定的聚类数目合适，通常能得到较好的结果，其中GMM算法聚类的结果偏向于更加异质的划分。DBSCAN算法通常也能得到较好的结果，但其分割的类别数目不定，不易和其他聚类算法的结果进行集成。HDBSCAN算法可能不适用于HSI的空间分割，其算法原理设置也更适合处理高维度的数据。Mean Shift受HSI数据和算法超参数的影响，通常情况下能识别得到主要的异质性ROI区域。此外，四种中药材的空间异质性排序为:鲜地黄＞生附子＞白术＞鲜天麻。因而，本文以鲜地黄的数据为例对其空间分割的结果进行详细的注释，注释了有明显异质性分布的129个离子中的45个离子，通过所建立的DESI MSI可视化方法，实现了鲜地黄组织切片中寡糖类、脂肪酸类、氨基酸类等多类代谢物分子的可视化分析。进一步对鲜地黄组织中精氨酸（ROI_5（皮层））、蔗糖（ROI_0（木质部））、水苏糖（ROI_3（形成层））和脂质（PS（33∶0）ROI_4（分泌细胞））四个代谢物的离子进行了图像融合（Image fusion）,增进了对鲜地黄组织切片空间异质性的理解，此方法也可以应用于其他中药组织切片的空间异质性分析。最后，本文通过钩藤生物碱（Uncaria rhynchophylla alkaloids）干预5XFAD小鼠对 3D 质谱成像（Three-dimensional mass spectrometry imaging,3D MSI）可视化进行了探索，初步揭示了 3D MSI技术在可视化生物组织3D空间异质性的潜力。总之，本课题首次提出并建立了基于熵值和对比度来优选HSIs的分析策略,以充分挖掘和可视化出生物组织高维MSI数据中蕴藏的异质性信息，以更好地促进对生物组织空间异质性的理解。此外，本课题也首次系统对比了不同的空间分割算法及分割类别数目对于ROI区域分割的影响，并将其成功应用于中药组织的高光谱可视化分析及ROI区域分割分析。高光谱可视化结合ROI区域分割可以很好地揭示中药组织的空间异质性。质谱成像分析技术及其数据分析策略的发展也一定能在中药研究中发挥更多更好的作用。收起

关键词 : 中药分析质谱成像空间异质性高光谱可视化信息熵对比度空间分割

5. 基于“银翘”药对的中药制剂生物有效性综合评价体系的构建与应用

[学位论文] 周伟南京中医药大学 2014年博士导师: 狄留庆共250页

摘要 : 中药复方制剂由于多组分产生的多靶点生物效应特点使其生物有效性难以评价，剂型设计与技术应用更难以进行，建立与中药制剂效应相关的可量化的生物有效性综合评价体系及合适的制剂学技术应用不仅是中药制剂基本科学问题，更是中药现代化研究的关键。... 展开中药复方制剂由于多组分产生的多靶点生物效应特点使其生物有效性难以评价，剂型设计与技术应用更难以进行，建立与中药制剂效应相关的可量化的生物有效性综合评价体系及合适的制剂学技术应用不仅是中药制剂基本科学问题，更是中药现代化研究的关键。中药制剂生物有效性综合评价体系的建立及制剂学应用存在以下技术瓶颈:①以网络效应形式表达的中药制剂功效所对应的多组分活性成分及其构效与量效关系的复杂性使得与中药制剂生物有效性表达相关的活性成分群难以辨识;②中药制剂多组分体内过程及其相互影响规律难以阐明，综合体系难以构建;③中药活性成分群及伴生物质群理化性质的复杂性使得中药制剂剂型设计、技术选择陷入困窘。如何运用合适的手段快速、正确的辨识活性成分群，打破中药制剂过程质量控制标准不完善的技术瓶颈？如何表征中药制剂生物药剂学的综合评价体系，打破中药制剂剂型改革与技术应用量化标准不完善的技术瓶颈？针对活性成分群整合药代动力学-Integrated AUC低，如何选择适合的药剂学技术提高Integrated AUC?等等关键问题均有待进一步研究。因此，本课题以生物药剂学与药代动力学为基础，选择临床配伍最小单位“药对”—“银翘”为研究对象。作者针对活性成分群难以辨识，创新性地提出“Drug-drug interaction结合PK-PD相关性辨识‘银翘’药对主要活性成分”及“‘生物效应放大’佐证‘银翘’药对中金银花、连翘主要活性成分”等思路来辨识、佐证“银翘”药对主要活性成分，通过“‘抗病毒效价-IC50’分析研究‘银翘’药对整合药代动力学-Integrated AUC”的思路来评价“银翘”药对生物有效性，针对中药制剂剂型设计、技术选择等瓶颈，作者选择简单的药剂学手段—吸收促进剂技术，并通过“‘Integrated AUC’研究调控市售‘银翘’制剂抗病毒生物活性”的思路成功应用于市售四种制剂（双黄连口服液、银翘解毒片、复方芩兰口服液、清热解毒口服液），显著提高了制剂的抗病毒疗效。 UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS结合UPLC-ESI-MS/MS定性、定量“银翘”药对体内外化学成分的研究结果表明，利用UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS，共检测体外化合物35种，包括了酚酸类7种（新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、3，5-二咖啡酰奎宁酸、3，4-二咖啡酰奎宁酸、奎宁酸、咖啡酸），苯乙醇苷5种（异连翘酯苷、连翘酯苷A、连翘酯苷B、连翘酯苷D、连翘酯苷E），黄酮类7种（芦丁、异槲皮苷、金丝桃苷、紫云英苷、木犀草苷、槲皮素、木犀草素），异黄酮类2种（染料木苷、染料木素），木脂素类9种（牛蒡子苷、连翘苷、松脂素-β-D-glucoside、牛蒡子苷元、松脂素、连翘脂素、表松脂酚、表松脂酚-β-D-glucoside、松脂素单甲基醚），皂苷类2种（灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙），环烯醚萜类3种(马钱苷、当药苷、Centauroside)。纵观国内外文献及现有对照品信息，创新性的开发了一种UPLC-ESI-MS/MS同时快速定量“银翘”药对26种指标性成分的方法。并利用UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS分析了“银翘”药对血中“移行成分”，结合体外分析结果，共检测体内化学成分32种，其中包括29种原形化合物，分别为酚酸类7种（新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、3，5-二咖啡酰奎宁酸、3，4-二咖啡酰奎宁酸、奎宁酸、咖啡酸），苯乙醇苷5种（异连翘酯苷、连翘酯苷A、连翘酯苷B、连翘酯苷D、连翘酯苷E），黄酮类7种（芦丁、异槲皮苷、金丝桃苷、紫云英苷、木犀草苷、槲皮素、木犀草素），异黄酮类2种（染料木苷、染料木素），木脂素类7种（连翘苷、松脂素-β-D-glucoside、牛蒡子苷元、松脂素、连翘脂素、表松脂酚、表松脂酚-β-D-glucoside），环烯醚萜类1种（马钱苷）。且通过MetWorks软件及文献的比对，发现3种代谢产物，根据其质谱裂解规律，分别为A1#(松脂酚-o-glucuronide)，A2#（表松脂酚-o-glucuronide），A3#（连翘脂素-o-glucuronide）。基于“入血物质才可能为活性成分”，以上29种化合物可作为体内研究对象，并作为指标性成分来代表“银翘”药对，但限于现有对照品缘故，且①松脂素、连翘脂素、表松脂酚在“银翘”提取液中含量甚低;②表松脂酚-β-D-glucoside、松脂素-β-D-glucoside虽为同分异构体，质谱显示其具有相同的裂解规律（相同的母离子、子离子），但UPLC-ESI-MS/MS分析“银翘”药对药代动力学时，发现血中只检测到松脂素-β-D-glucoside，并未见表松脂酚-β-D-glucoside;③具有类似母核的化合物具有相同的吸收机制，如:苯乙醇苷类，通过研究异连翘酯苷、连翘酯苷A、连翘酯苷B来推测连翘酯苷D、连翘酯苷E具有一定的科学性。因此，基于以上分析，我们选择29种指标性成分中23种，即:酚酸类7种（新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、3，5-二咖啡酰奎宁酸、3，4-二咖啡酰奎宁酸、奎宁酸、咖啡酸），苯乙醇苷3种（异连翘酯苷、连翘酯苷A、连翘酯苷B），黄酮类7种（芦丁、异槲皮苷、金丝桃苷、紫云英苷、木犀草苷、槲皮素、木犀草素），异黄酮类2种（染料木苷、染料木素），木脂素类3种（连翘苷、松脂素-β-D-glucoside、牛蒡子苷元），环烯醚萜类1种（马钱苷）作为“银翘”药对体内研究对象。 Drug-drug interaction(DDI)结合∑PK-PD相关性辨识“银翘”药对主要活性成分的研究结果表明，利用体外化学成分DD、肠吸收屏障DDI结合体内生物活性成分DDI三种模型共同辨识了“银翘”药对配伍前后变化，并通过HCA结合PCA手段确定了异连翘酯苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸、新绿原酸、3，4-二咖啡酰奎宁酸、连翘酯苷A为影响“银翘”药对配伍的活性成分群(Chemical markers)，且通过PLS分析了标志性成分的PK(∑PK)与抗病毒PD的相关性进一步确定了咖啡酰衍生物:3，4-二咖啡酰奎宁酸、3，5-二咖啡酰奎宁酸、隐绿原酸、绿原酸、新绿原酸、异连翘酯苷、连翘酯苷B、连翘酯苷A为抗病毒主要的Chemical markers。 “生物效应放大”佐证“银翘”药对中金银花、连翘主要活性成分的研究结果表明，咖啡酰衍生物肠吸收机制均为被动转运，且主要受细胞旁路影响。新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、3，5-二咖啡酰奎宁酸、3，4-二咖啡酰奎宁酸可能为P-gp、MRP2及BCRP的共同底物，而异连翘酯苷、连翘酯苷A、连翘酯苷B可能为P-gp和MRP2的共同底物。通过比较金银花、连翘提取液与咖啡酰衍生物单体吸收特征，发现金银花提取液中酚酸类外排小于单体，但连翘提取液中苯乙醇苷类外排大于单体。但由于吸收均较差，且外排率（Efflux ration）小于1，判别其吸收屏障与单体类似亦为紧密连接。采用壳寡糖技术提高了金银花、连翘提取液中咖啡酰衍生物生物利用度，发现其抗病毒效果大大提高，则从侧面佐证了金银花、连翘提取液中Chemical markers，即通过提高所为Chemical markers体内暴露，是否可提高疗效？反证Chemical markers选择的合理性。 “抗病毒效价-IC50”分析研究“银翘”药对咖啡酰衍生物整合药代动力学-IntegratedAUC的研究结果表明，咖啡酰衍生物体外抗病毒活性顺序为:连翘酯苷A＞连翘酯苷B＞3，4-二咖啡酰奎宁酸≈异连翘酯苷＞3，5-二咖啡酰奎宁酸＞新绿原酸＞绿原酸＞隐绿原酸。然而，异连翘酯苷、连翘酯苷A、连翘酯苷B体内暴露水平却远远低于绿原酸。作者通过连翘酯苷A“敲入”“银翘”药对后进行整合药代动力学研究表明，尽管抗病毒效价AUE显著提高了，但“曲线下面积(AUC0-W)”设置权重系数的Integrated AUC却无显著性影响，而“抗病毒效价-IC50”设置权重系数的Integrated AUC显著增加。通过“效价-IC50”设置权重系数得咖啡酰衍生物整合药代动力学曲线，DAS2.1.1分析药代动力学参数，发现T1/2、AUC、Cmax、 MRT充分兼顾了各个咖啡酰衍生物的药代动力学特征，且整合药代动力学曲线与抗病毒效应具有良好的关联性，表明了在某种条件下，“曲线下面积(AUC0-W)”设置权重系数只具备数学意义，忽略了成分之间效应的贡献，而“抗病毒效价-IC50”设置权重系数更具科学性。 “Integrated AUC”研究调控市售“银翘”制剂抗病毒生物活性的研究结果表明，“银翘”药对肠吸收屏障位于紧密连接。并通过以下三点标准筛选“银翘”药对制剂，即:①具有相同组成的“银翘”化学成分;②“银翘”药对在制剂中作为主要药物组成;③具有与“银翘”药对类似的肠吸收屏障。结果发现四种市售制剂（双黄连口服液、清热解毒口服液、复方芩兰口服液、银翘解毒片）符合标准。通过研究壳寡糖对市售“银翘”制剂Integrated AUC及抗病毒活性的影响，发现壳寡糖自身不具备抗病毒活性，且不能促进“敲除”“银翘”药对的“银翘”制剂抗病毒活性，但可提高“银翘”药对制剂的病毒抑制率，说明了壳寡糖提高“银翘”制剂抗病毒活性的确是提高了“银翘”药对体内暴露水平，且发现“银翘”药对中各咖啡酰衍生物生物利用度及IntegratedAUC亦不同程度的提高，从侧面证明了咖啡酰衍生物确实为“银翘”药对Chemical markers，控制着“银翘”药对的抗病毒疗效，亦证明了“‘抗病毒效价-IC50’分析研究‘银翘’药对咖啡酰衍生物整合药代动力学-Integrated AUC”思路的合理性，并成功利用吸收促进剂-壳寡糖对“银翘”药对制剂进行了二次开发。本文采用UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS结合UPLC-ESI-MS/MS定性、定量“银翘”药对体内外化学成分，通过Drug-drug interaction结合∑PK-PD相关性辨识“银翘”药对主要活性成分，进而应用“生物效应放大”佐证“银翘”药对中金银花、连翘主要活性成分，并根据“抗病毒效价-IC50”分析研究“银翘”药对咖啡酰衍生物整合药代动力学-IntegratedAUC”，以“Integrated AUC”研究调控市售“银翘”制剂抗病毒生物活性。研究思路与方法对中药制剂生物药剂学开展具有一定指导意义。收起

关键词 : 中药生物药剂学生物有效性评价体系药代动力学银翘药对肠吸收屏障

6. 基于清热解毒板蓝根蛋白及相关成分研究

[学位论文] 肖平南京中医药大学 2015年博士导师: 李祥共245页

摘要 : 本论文对板蓝根蛋白及相关活性成分进行了研究。对板蓝根蛋白进行了提取分离、鉴定及活性评价研究，从中获得一个活性蛋白;运用Shotgun技术对板蓝根进行了蛋白质组学研究，发现其参与巨噬细胞的吞噬作用;运用Label free技术对板蓝根蛋白进行了抗H22肿... 展开

关键词 : 板蓝根蛋白成分提取工艺药理活性

7. 姜科药用植物益智Alpinia oxyphylla资源化学研究

[学位论文] 张俊清南京中医药大学 2013年博士导师: 段金廒共244页

摘要 : 本论文研究工作为“十二五”国家科技支撑计划区域基地项目子课题《益智规范化种植基地及其SOP建立》和海南省中药现代化专项资金项目《海南益智规范化种植基地药材及其饮片质量标准的建立》的部分研究内容。本论文的研究工作以益智的文献为起点... 展开本论文研究工作为“十二五”国家科技支撑计划区域基地项目子课题《益智规范化种植基地及其SOP建立》和海南省中药现代化专项资金项目《海南益智规范化种植基地药材及其饮片质量标准的建立》的部分研究内容。本论文的研究工作以益智的文献为起点，综合了益智的资源化学研究、资源化学评价研究和传统功效的诠释研究，基本阐述了益智的资源内涵及其功效基础。以此为基础进行了益智的质量标准研究和产业化开发研究，为益智资源的合理高效利用奠定科学基础。一、文献研究文献是科学研究的起点，为了全面准确的提挈益智的资源现状，本文系统综述了姜科植物药用概况、姜科山姜属植物研究进展、益智历史应用沿革及其现代化学药理研究基础，并藉此凝练出本论文的研究思路和整体实验方案。二、益智的资源化学研究（一）益智各部位的资源性成分研究 1.益智果实资源性成分研究为了全面阐述益智果实的资源化学分布，阐明其基于传统功效的药效物质基础，促进益智资源的合理使用，本文采用硅胶柱层析、制备薄层层析、凝胶柱色谱及反相柱色谱等色谱技术对益智果实所含资源性成分进行分离、纯化和结构鉴定。从益智果实中共分离得到了11个化合物，分别鉴定为9-羟基表圆柚醇(1)、乔松素(2)、圆柚酮(3)、杨芽黄素(4)、β-谷甾醇(5)、益智酮甲(6)、伊砂黄素(7)、β-胡萝卜苷(8)、β-谷甾醇棕榈酸酯(9)、(S)-2-戊醇-2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(10)、原儿茶酸(11)。其中化合物1和化合物10为新天然产物，化合物2为首次从益智中分离得到。以上研究为益智的进一步深入研究奠定了基础。 2.益智根茎资源性成分研究为了探索益智根茎废弃资源的可利用价值，本文采用硅胶柱层析及聚酰胺柱层析等色谱技术对益智根茎所含资源性成分进行分离、纯化，根据所分离化学成分的理化性质及波谱数据鉴定其结构。结果从益智根茎乙醇提取物中共分离鉴定13个化合物，分别鉴定为三十二烷醇(1)、伊砂黄素(2)、杨芽黄素(3)、山奈酚-7，4’-O-二甲醚(4)、β-谷甾醇(5)、对羟基桂皮酸(6)、双氢山奈素(7)、益智酮甲(8)、白杨素(9)、乔松素(10)、山奈酚-4’-O-甲醚(11)、肉豆蔻酸(12)、球松素(13)，所有化合物均为首次从益智根茎中分离得到。以上研究为今后益智根茎的资源利用奠定科学基础。 3.益智茎叶资源性成分研究基于发现与挖掘益智茎叶可利用的物质基础，本文采用硅胶柱层析及聚酰胺柱层析等色谱技术对益智茎叶所含资源性成分进行分离、纯化，根据其理化性质及波谱数据鉴定其结构。结果从益智茎叶乙醇提取物中共分离鉴定了11个化合物，分别鉴定为伊砂黄素(1)、杨芽黄素(2)、芹菜素-4'，7-O-二甲醚(3)、山奈素-4'-O-甲醚(4)、反式对羟基桂皮酸(5)、白杨素(6)、乔松素(7)、刺槐素(8)、棕榈酸(9)、球松素(10)、5，7，4'-三甲氧基黄酮(11)，所有化合物均为首次从益智根茎中分离得到。以上研究为今后益智茎叶的资源利用奠定科学基础。（二）益智资源化学评价 1.益智果实挥发性成分分析通过对来自我国云南省、广西省、广东省及海南省（包括来自白沙县、琼中县、万宁市及屯昌县）等共21份益智果实挥发油中资源性成分进行比较研究。研究证实:各产地益智挥发油所含成分种类及含量差异较大，其中β-panasinsene和humulene两种成分含量较高。采用系统聚类分析方法对该21批益智果实进行聚类分析，结果表明:海南省白沙县、琼中县和屯昌县三个县的益智挥发油中所含成分相似，说明这些地区的区域环境相似;广东阳江、广西和云南三个省份的益智挥发油中所含成分接近，但是与上述三个县的益智药材有所差别。 2.不同生长期益智果实、根茎及茎叶中资源性成分动态累积研究本研究对不同生长期益智不同部位中圆柚酮、益智酮甲、益智酮乙、益智醇、杨芽黄素、伊砂黄素、白杨素、山奈素和芹菜素二甲醚9种资源性成分进行了LC-MS/MS定量分析。益智不同部位的资源性成分含量分布情况不同，研究证实，在果实整个生长周期，萜类、二苯基庚烷类资源性成分主要富集在益智果实中，而黄酮类资源性成分基本均匀分布在益智果实、茎叶和根茎中。益智在结果45天时果实中各种资源性成分含量处于最高峰，果实最佳采收时间定在结果45天基本合理，结果45天后，圆柚酮、益智酮甲和杨芽黄素三种功效成分的蓄积量均有所提高，一般益智3月上旬开始结果，益智果实最佳采收时间定在4月底至5月初，传统应用中益智采收期定在5-6月基本合理;益智根茎和茎叶在益智结果后亦有一定量以上成分蓄积，证实了益智根茎和茎叶潜在的药用价值待挖掘。益智果实最佳采收期及益智果实、根茎和茎叶之间资源性成分的转运规律有待进一步研究确定。 3.益智果实中核苷与碱基类资源性成分评价对于不同产地益智果实中核苷及其碱基含量测定结果表明:各产地药材所含主要核苷及其碱基的种类基本相同，但是各类核苷和碱基含量差异较大，这可能是由于地理环境、气候、温度、采收期等因素所造成的。对于不同采收期益智果实中核苷及其碱基含量测定结果表明:14批益智果实中几乎都富含待测十种核苷和碱基，但含量有极大的差别。2’-脱氧胸苷含量最多，在益智果实整个生长周期内变化明显(36.79-310.58μg/g);次黄嘌呤含量最低，在果实形成后期甚至未检测到。此外，随着益智果实成熟度增加，单个核苷和碱基以及它们的总量都随之减少，表明核苷及其碱基的合成与果实的生长发育密切相关。 4.益智果实、根茎及茎叶中无机元素分布及动态累积研究研究结果表明，益智果实中锌、铁、锰、钙及镁五种营养元素含量相对于根茎、茎叶更丰富，除重金属镉元素益智果实含量高于根茎、茎叶，果实中另外四种重金属砷、汞、铅和铜含量均相对较低。据国家商务部2001年颁发的《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》有关药材重金属元素含量限量标准，我国云南省、广西省、广东省及海南省的20个益智果实样品的砷、汞、铅、镉含量均符合绿色行业标准;海南省琼中长兴、琼中毛阳、屯昌乌坡和屯昌南吕四产地的益智果实铜含量符合绿色行业标准，但采自云南西双版纳、广西南宁、广东2产地及海南省其它12个市县益智果实的铜含量超标。需要今后进一步深入研究，同时，需要考察这些产区大气、土壤及灌溉用水的重金属含量情况。 20个产地益智果实重金属和营养元素含量的检测结果显示，海南产的益智安全性最好，突出表现为以下四个产地海南琼中长兴村、琼中毛阳镇、屯昌乌坡镇和屯昌南昌镇;广西南宁产的益智果实营养元素的含量最丰富。从益智不同生长期果实、根茎和茎叶重金属元素和营养元素的含量分布情况看，益智果实、根茎中重金属含量与茎叶相比较低，而营养元素含量相对较高;益智果实如在结果45天时采收，除镉元素，其它四种重金属元素含量均相对较低，锌、铁、锰、钙和镁五种营养元素含量均较高，即在益智结果45天时采收益智果实营养元素含量较高，而重金属含量相对较低。三、益智温脾止泻和补肾缩尿功效的活性评价研究（一）益智不同提取分离部位的制备为了明确益智符合其传统功效的有效作用部位，本文制备了益智挥发油部位、非挥发油部位95％乙醇提取物、大孔树脂50％乙醇洗脱物和大孔树脂90％乙醇洗脱物四个部位，并采用HPLC进行了初步定性。（二）益智不同提取分离部位温脾止泻功效的活性评价研究为了研究益智传统温脾止泻功效的活性部位，选择番泻叶致小鼠急性腹泻和大黄引起小鼠脾虚泻下两种模型，对从益智中分离获得的4个提取部位进行止泻活性评价。研究结果表明:益智非挥发油部位95％乙醇提取物和益智大孔树脂90％乙醇洗脱物能够延长番泻叶致急性腹泻小鼠的腹泻潜伏期和降低稀便比重，具有良好的止泻活性，大孔树脂50％乙醇洗脱物对小鼠急性腹泻无影响，益智果实挥发油能够显著的延长小鼠腹泻潜伏期，但是对稀便个数及稀便比重均无影响;通过上述活性的筛选结果，进一步对益智非挥发油部位95％乙醇提取物、大孔树脂90％乙醇洗脱物及大孔树脂50％乙醇洗脱物进行化学分析，结果显示脂溶性大的成分可能是益智止泻的活性部位。进一步研究表明益智非挥发油部位95％乙醇提取物和益智大孔树脂90％乙醇洗脱物能够显著地影响脾虚小鼠的胃残留率和小肠推进率，对胃肠运动影响显著，且能够一定程度改善脾虚小鼠的脾虚状态。研究结果亦证实益智大孔树脂90％乙醇洗脱物改善脾虚状态与升高血浆中LDH水平相关，同时其抑制胃肠运动主要与升高血浆中NO和降低胃肠激素MOT和SS有关;该部位通过升高血浆中LDH水平，同时降低血浆中SDH水平改善脾虚泻下小鼠的脾虚状态，其影响小鼠的胃肠运动能力主要与升高NO有关，同时与降低血浆中胃肠激素MOT和SS的水平密切相关。（三）益智不同提取与分离部位缩尿功效的活性评价研究为了明确益智的缩尿作用活性，本节对不同益智提取部位及单体化合物进行缩尿作用药效学筛选，确定益智挥发油部位、非挥发油部位乙醇提取物、大孔树脂50％乙醇洗脱物和大孔树脂90％乙醇洗脱物四个部位对卡巴胆碱诱导的离体膀胱逼尿肌收缩均有一定的抑制作用;筛选了伊砂黄素、山柰素、益智醇、益智酮乙、诺卡酮、杨芽黄素、白杨素等7个益智中分离出来的单体化合物，发现伊砂黄素抑制卡巴胆碱EC50=3.50±0.05μmol/L。四、中药益智的质量标准研究为了完善现有中药益智的质量标准，本文采用薄层色谱法及高效液相色谱法等先进技术对于中药益智进行了质量标准研究。即建立了薄层鉴别、显微鉴别项;建立了圆柚酮、杨芽黄素、益智酮甲三种功效成分同时测定含量检测项;完善了水分、灰分及酸不溶性灰分等项的建立。为今后益智原料药材、饮片及其产品开发质量标准的建立奠定科学基础。五、益智资源开发与产业化益智属药食同源品种，常间种于槟榔、橡胶的树下，海南省目前益智的种植面积达2万亩。益智广泛的药理作用和其药食同源的特性决定了更适合于研制平时就可以食用的普通食品。在海南省中药现代化专项基金的支助下，项目组研发了益智椰子粉、益智木瓜粉固体饮料，以上产品可丰富现有旅游产品的种类，提升我省旅游产品的层次，带动相关益智种植业及我省旅游业的发展。收起

关键词 : 姜科植物中药益智化学成分饮片质量标准产业化开发

8. 明党参炮制化学及药效学研究

[学位论文] 李祥南京中医药大学 1999年博士导师: 叶定江共241页

摘要 : 该研究首次从单体成分的水平,揭示了明党参的炮制机理所在,阐明明党参炮制前致敏性的化学物质基础及诱导超敏反应的反应机理,找出了明党参炮制合理性的理论依据,并对明党参炮制前、炮制过程的各个环节及炮制后的化学成分及顶空气体成分进行了分析鉴定... 展开

关键词 : 明党参炮制机理明党参醇提物防治脑血管疾病新药

9. 基于“十八反”的中药配伍禁忌理论基础研究——芫花-甘草配伍毒效表征与物质基础研究

[学位论文] 陈艳琰南京中医药大学 2014年博士导师: 段金廒共234页

摘要 : 本论文研究工作为国家重点基础研究发展计划（973计划）项目:基于“十八反”的中药配伍禁忌理论基础研究——“藻戟遂芫俱战草”配伍关系与毒效表征的基础研究中部分研究内容。论文共分四个章节讨论，各章节的主要内容和研究结果如下: 一、文献研... 展开本论文研究工作为国家重点基础研究发展计划（973计划）项目:基于“十八反”的中药配伍禁忌理论基础研究——“藻戟遂芫俱战草”配伍关系与毒效表征的基础研究中部分研究内容。论文共分四个章节讨论，各章节的主要内容和研究结果如下: 一、文献研究本部分对古今相关文献进行梳理归纳，系统综述了芫花与甘草配伍禁忌的形成源流以及配伍的物质基础、生物效应、临床应用等现代研究进展，在此基础上设计了本论文的研究思路与实验方案。二、芫花-甘草配伍毒效表征及配伍禁忌机制研究（一）芫花与甘草反药组合的毒性评价 1芫花、甘草各单味药急性毒性评价观察小鼠单次灌服给予芫花或甘草产生的急性毒性反应，评价其安全性，为比较芫花与甘草配伍前后的毒效实验提供剂量设计依据。结果显示，芫花水提物LD50为52.2 g·kg-1，95％的置信限为41.7-66.7 g·kg-1，其LD50约为临床等效量的87倍。芫花总提物LD50为18.7g·kg-1，95％的置信限为14.9-23.5 g·kg-1。甘草水提物的最大耐受量MTD为96.2 g·kg-1，约为临床等效量的48倍。表明芫花水提液与粉末均有毒性，甘草无明显毒性。 2芫花与甘草反药组合急性毒性评价观察小鼠灌服给予不同剂量配比的芫花-甘草合煎液或芫花总提物-甘草水提物合并液产生的毒性反应及死亡情况，比较不同配伍组合的毒性差异。结果显示，小鼠单次灌服给予芫花-甘草合煎液后，小鼠出现明显的中毒症状，死亡时间多在给药2h后，死亡率大小顺序为芫花-甘草1∶1合煎组＞芫花-甘草2∶1合煎组＞芫花-甘草1∶2合煎组＞芫花-甘草1∶3合煎组＞芫花-甘草3∶1合煎组，芫花单药和甘草单药对照组无动物死亡。灌服给予芫花总提物-甘草水提物合并液后，小鼠也出现明显的中毒症状，但死亡时间多在给药2h内，死亡率大小顺序为芫花-甘草1∶2合并液＞芫花-甘草3∶1合并液＞芫花-甘草1∶1合并液＞芫花-甘草1∶3合并液＞芫花单药对照组。表明芫花与甘草合用毒性大于芫花单用。 3芫花与甘草反药组合长期毒性评价观察大鼠多次灌服给予不同剂量芫花-甘草合煎液产生的毒性反应，考察不同配伍组合的毒性差异，明确其毒性靶器官。芫花-甘草反药组合大鼠长期毒性主要表现在以下方面:(1)芫花-甘草配比为1∶3.3时，在药典临床用量范围内可能产生对消化系统、生殖系统的毒性反应，表现为大便秘结，睾丸附睾系数下降，前列腺病理异常、精子数减少。(2)芫花-甘草配比为1∶0.21，且甘草在药典临床用量范围内，芫花在超过药典临床用量高限4倍时，即可见对泌尿系统的毒性，表现为肾系数升高，肾病理异常。(3)芫花-甘量配比为1∶53，且芫花在药典临床用量范围内，甘草在超过药典临床用量高限4倍时，即可见对糖脂代谢的影响，血糖、甘油三酯升高，并且肝系数升高，大剂量组大鼠出现消瘦现象。（二）芫花与甘草反药组合的效应评价 1芫花与甘草反药组合对正常小鼠利尿及泻下效应的影响基于中医药性与配伍理论，提出甘草的甘缓之性是否平抑了芫花“泻水逐饮”药势的发挥和功效的实现？实验设计比较了药典范围内芫花与甘草合用前后对正常小鼠的利尿及泻下作用。结果显示，醋芫花粉末具有较强的利尿作用且起效较迅速，甘草水煎液可明显抑制芫花的利尿作用。研究结果表明甘草甘缓守中之药性可减缓芫花“泻水逐饮”的取效特点，可能是芫花与甘草配伍禁忌的机制之一。 2芫花与甘草反药组合对正常大鼠水盐代谢的影响基于芫花具有“泻水逐饮”之药势，而甘草的糖、盐皮质激素样作用产生“保钠排钾”，形成“水钠潴留”，提出两药合用是否加剧了芫花“泻水”作用导致的水盐代谢平衡失调？实验设计了芫花与甘草合用前后对正常大鼠水盐代谢影响的评价实验。结果显示，甘草可抑制芫花的利尿作用，且合用后尿Na+排泄减少，尿K+排泄增加，血K+含量降低，血中醛固酮、抗利尿激素水平增加。提示甘草具有的糖、盐皮质激素样作用加剧了芫花“泻水逐饮”功效导致的电解质平衡失调，是其相反的可能特征之一。 3芫花与甘草反药组合对癌性腹水模型小鼠生物效应的影响芫花具有“泻水逐饮”之功效，药力峻猛，适用于水气盛、病情急、肿势甚的实证水肿患者。本实验选用恶性腹水模型，在病理模型下考察芫花与甘草合用前后对癌性腹水小鼠生物效应（腹水量、电解质、醛固酮、抗利尿激素、心肝肾病理组织形态）的影响。结果显示，造模后小鼠腹水量明显增加，血浆Na+、K+、Cl-值降低，醛固酮、抗利尿激素水平升高，病理切片可见肝肾损伤。芫花单用腹水量有减少趋势，与甘草合用腹水量无变化;芫花或甘草单用对血浆Na+、K+、Cl-浓度和醛固酮、抗利尿激素影响并不显著，但合用使血浆K+升高，醛固酮和抗利尿激素浓度也显著升高。综上所述，癌性腹水小鼠可导致水及电解质的紊乱，芫花与甘草合用后可加重紊乱的趋势，是其相反的可能特征之一。（三）芫花与甘草反药组合的作用机制研究应用代谢组学方法，采用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱技术，对芫花单用和芫花-甘草合用的大鼠尿液、血液代谢谱进行分析，筛选毒性作用的潜在生物标志物，阐述芫花致毒和芫花-甘草反药组合致毒/增毒的作用机制，为揭示芫花-甘草配伍禁忌提供依据。结果表明，芫花-甘草合用的毒性反应大于芫花单用。芫花组和芫花-甘草合用组均影响甘油磷脂通路，但芫花单用还主要影响一级胆酸生物合成通路和鞘脂代谢通路;而芫花-甘草合用则主要影响苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成通路、酪氨酸代谢通路和甘油脂代谢通路。两者对不同代谢通路的调控可能是毒性差异的原因之一。三、芫花与甘草配伍禁忌的物质基础研究（一）芫花化学成分分离与结构鉴定为明确芫花的毒效物质基础，采用硅胶、大孔吸附树脂、Sephadex LH-20柱层析及制备液相等技术对芫花进行了系统的化学成分分离，根据理化性质及波谱数据鉴定其结构。共分离鉴定了44个化合物，包括脂肪类8个、神经酰胺类2个、甾体类4个、萜类10个、黄酮类12个、酚类7个、脱镁叶绿素1个，分别为:正二十四烷(1)、棕榈酸(2)、正二十六烷醇(3)、正二十八烷醇(4)、正二十九烷醇(5)、二十八烷酸十七烷醇酯(6)、棕榈酸-α-单甘油酯(7)、十八烷酸-α-单甘油酯(8)，(2S，3S，4R，8E)-2-[(2'R)-2'-羟基二十二烷酸酰胺]-十八烷-1,3，4-三醇(9)、(2S，3S，4R，8E)-2-[(2'R)-2'-羟基二十四烷酸酰胺]-十八烷-1,3，4-三醇(10)、木栓酮(11)、δ-香树酯酮(12)、β-谷甾醇(13)、5α，8α-epidioxyergosta-6，22-dien-3β-ol(14)、7α-羟基谷甾醇(15)、胡萝卜苷(16)、芫花酯甲(17)、芫花酯乙(18)、芫花酯丙(19)、芫花酯丁(20)、芫花酯戊(21)、genkwanine F(22)、genkwanine N(23)、Wikstroemia factorM1(24)、芫花素(25)、芹菜素(26)、洋芹素-7，4'-二甲醚(27)、金合欢素(28)、3，7-二甲氧基-5，4'-二羟基黄酮(29)、3'-羟基芫花素(30)、椴苷(31)、伞形花内酯(32)、西瑞香素(33)、浙贝素(34)、丁香树脂醇(35)、对羟基苯甲酸(36)、瑞香醇酮(37)、瑞香烯酮(38)、芫花素-5-O-β-D-葡萄糖苷(39)、7-甲氧基-木犀草素-5-O-β-D-葡萄糖苷(40)、木犀草素-5-O-β-D-葡萄糖苷(41)、芫花素-5-O-β-D-茜黄樱草糖苷(42)、芫花素-4'-O-β-D-芦丁糖苷(43)、173-脱镁叶绿素乙酯(44)。化合物3-6、9-12、14-15、24、34、37-38、40、43-44为首次从芫花中分离得到，并首次从该植物中分离得到神经酰胺类、三萜类和叶绿素类化合物。研究结果为芫花与甘草反药组合的毒效评价提供了基础。（二）芫花的毒性物质基础研究为明确芫花的毒性物质基础，对芫花的总脂肪酸、总二萜及总黄酮部位进行急性毒性评价，结果表明总二萜部位为芫花的毒性部位。对毒性部位中的5个代表性二萜芫花酯甲、芫花酯乙、芫花酯丙、芫花酯丁、芫花酯戊进行整体动物和细胞毒性评价，结果显示这5个二萜均具有明显毒性，主要表现为肝脏毒性、胃肠道毒性和引起动物死亡;对大鼠小肠隐窝上皮细胞具有细胞毒性，表现为抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡。采用代谢组学技术研究代表性毒性成分芫花酯戊引起大鼠的代谢产物谱改变，结果表明芫花酯戊诱导的肝毒性和肠道毒性主要是由于干扰了生物体的正常氨基酸代谢和脂质代谢，并可能导致肠道菌群失调而加重毒性反应。明确了毒性物质基础及毒性靶器官，揭示了可能的毒性作用机制，为芫花的安全用药及芫花-甘草配伍禁忌的研究提供依据。（三）芫花与甘草合用前后的体外化学成分变化研究芫花中含有的二萜类成分是其主要毒性成分，甘草中的皂苷类成分具有表面活性作用，对脂溶性成分有一定的助溶、增溶作用，两药合煎甘草所含丰富的皂苷类物质，是否促进了芫花中脂溶性的二萜类毒性物质的溶出释放，导致毒性增加？实验采用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱与超高效液相色谱串联三重四级杆质谱两种液-质联用技术相结合的手段，探讨芫花/醋芫花与甘草在不同配比组合水煎过程物质相互作用导致化学成分组成的变化及其特点。结果显示，在药典规定的配比范围内随甘草比例升高，芫花不论醋炙与否，其中的二萜类成分相对溶出率均呈上升趋势;而芫花对甘草中的皂苷类成分和黄酮类成分相对溶出率影响较小。本研究结果证实，甘草能促进芫花中二萜类毒性成分溶出率提高，导致两药合煎毒性显著增加，从药物相互作用的角度揭示了芫花与甘草配伍禁忌的可能机制。（四）芫花与甘草合用前后体内过程及相互作用研究 1芫花中二萜类成分的药代动力学研究二萜类成分是芫花中的主要毒性成分，通过给予不同剂量的总二萜部位，评价二萜毒性与血药浓度间的关系。本实验建立的超高效液相色谱串联质谱技术可同时测定大鼠血浆中8个二萜类成分:芫花酯甲、芫花酯乙、芫花酯丙、芫花酯丁、芫花酯戊、genkwanine F、genkwanine N、Wikstroemia factor M1。结果显示，除最低剂量大鼠未出现死亡，其余低、中、高剂量给药后大鼠死亡率均为100％，且总二萜部位的毒性与剂量线性相关，随剂量的升高死亡时间缩短，毒性增加。二萜结构不同，其体内吸收特征差异较大。芫花酯丙、芫花酯戊在二萜部位中含量很低，但血药浓度较高，且大鼠在其血药浓度超过一定值后死亡;与之相反，genkwanine F及Wikstroemia factor M1含量最高，但血药浓度反而最低。推测芫花酯丙、芫花酯戊很可能是芫花的毒性成分。为从体内过程角度研究芫花与甘草配伍禁忌提供了一定的基础。 2芫花中黄酮类成分的药代动力学研究黄酮类成分是芫花中的活性成分，且含量较高。本实验通过建立的超高效液相色谱串联质谱技术同时测定大鼠血浆中8个黄酮类成分:芫花素-5-O-β-D-葡萄糖苷，3'-羟基芫花素-5-O-β-D-葡萄糖苷，木犀草素-5-O-β-D-葡萄糖苷，芫花素-5-O-β-D-茜黄樱草糖苷，芫花素，芹菜素，3'-羟基芫花素和3，7-二甲氧基-5，4'-二羟基黄酮。黄酮苷类成分在约1h达到最高血药浓度，而黄酮苷元均出现了双峰现象，即在1h达到最高血药浓度后在7h左右又出现一个吸收的高峰，很可能是由于黄酮苷在体内被代谢为苷元后又重新吸收。本实验从药代动力学角度研究了芫花中主要活性成分黄酮的吸收过程，为从体内过程角度研究芫花与甘草配伍禁忌提供了一定的基础。 3芫花与甘草反药组合毒性成分体内过程研究选择芫花酯戊作为芫花的代表性毒性成分，采用液质联用技术探讨其与甘草合用前后的体内过收起

关键词 : 中药配伍禁忌反药组合芫花甘草毒效表征

10. 荆芥腺鳞发生关键基因挖掘及其调控品质机制研究

[学位论文] 周佩娜南京中医药大学 2023年博士导师: 吴啟南共226页

摘要 : 中药荆芥为一年生草本植物荆芥SchizonepetatenuifoliaBriq.的干燥地上部分，具有解表散风、透疹、消疮的功能，临床上常用用于治疗感冒、麻疹不透、风疹瘙痒等症。荆芥的挥发油及黄酮被认为是其主要的活性成分，其中挥发油被广泛用于多个领域，薄荷烷... 展开中药荆芥为一年生草本植物荆芥SchizonepetatenuifoliaBriq.的干燥地上部分，具有解表散风、透疹、消疮的功能，临床上常用用于治疗感冒、麻疹不透、风疹瘙痒等症。荆芥的挥发油及黄酮被认为是其主要的活性成分，其中挥发油被广泛用于多个领域，薄荷烷类单萜类成分占药用植物荆芥挥发油成分90％以上，主要储存在其腺鳞中，挥发油含量与腺鳞的个数密切相关，腺鳞被认为是荆芥药用的品质载体。目前，应用的荆芥挥发油主要来自荆芥植株，含量相对较低，此外关于荆芥腺鳞发生机制的相关分子基础十分匮乏，因此针对荆芥腺鳞解析其发生分子机制研究对于荆芥新药开发和培育高油含量的优质荆芥中药具有重要的作用。毛状体是陆生植物表皮特化的结构，被分为腺毛和非腺毛，其中腺毛具有强大的分泌和储存次生代谢产物的功能，被认为是植物界的“细胞代谢工厂”。药用植物的腺毛通常富含一些重要的次生代谢产物具有多种生物学活性，例如中药青蒿的青蒿素，紫苏、薄荷、藿香的挥发性成分，大麻的大麻素等具有重要的药用价值。荆芥中存在的多细胞腺毛-腺鳞在其起始和发育方面的调控机制研究依旧空白，因此本论文首先对目前多细胞腺毛生长发育的分子生物学研究和关键调控基因相关的中外文献进行了归纳整理，同时对解析植物细胞分化命运的新技术-10×Genomics单细胞测序技术在植物领域的应用进行了综述分析，另外对荆芥目前研究进展进行总结，具体研究内容与结果如下: 1.荆芥幼叶单细胞转录组分析与腺鳞细胞分化轨迹研究本部分基于文献报道的原生质体制备方法获得原生质体，利用10×Genomics单细胞测序技术对荆芥幼叶的原生质体测序，基于模式植物的标记基因和原位杂交实验对荆芥的细胞亚群进行鉴定，得到19个细胞亚群，分别为表皮细胞亚群（Cluster5、7、16和17）、保卫细胞亚群（Cluster13）、木质部细胞亚群（Cluster6和9）、韧皮部细胞亚群（Cluster12）、伴胞亚群（Cluster15）、增值细胞亚群（Cluster8和10）等。其中表皮细胞亚群被进一步分群得到13个细胞亚群（E0-E12）,亚群E12被鉴定为荆芥腺鳞细胞，亚群E9被鉴定为毛状体的混合细胞。在腺鳞中特异富集的薄荷烷类单萜成分生物合成的关键基因于E12特异高表达。拟时分析显示E10作为分化轨迹的根部，向E12与E9两个细胞亚群逐渐分化。在拟时序分析中产生的差异基因可能为荆芥腺鳞发生关键的候选基因。 2.不同生长时期荆芥转录组分析及腺鳞发生关键基因挖掘本部分利用高通量技术对荆芥不同发育时期10天、20天、35天的叶和35天的根进行转录组测序，首先针对荆芥主要次生代谢产物单萜和黄酮生物合成途径的相关基因进行表达趋势分析，相关合成路径的基因表达模式与化合物积累趋势一致。基于文献报道和全基因数据对可能调控荆芥腺鳞发生的HD-ZipⅣ和R2R3MYB第9亚家族基因进行筛选和生物信息学分析，得到HD-ZipⅣ亚家族14条，R2R3MYB第9亚家族基因32条序列。HD-ZipⅣ亚家族基因具有HD、（LZ）、START结构域;R2R3MYB第9亚家族基因具有PLN03091保守结构域。HD-ZipⅣ亚家族14条基因和R2R3MYB第9亚家族32条基因在不同生长时期荆芥转录组中的表达分析，发现HD-ZipⅣ亚家族基因主要在叶中表达,R2R3MYB第9亚家族基因62.5％在根中高表达，37.5％在地上部分高表达，其中在叶中高表达的基因推测可能与荆芥腺鳞发生相关。 3.荆芥腺鳞发生关键基因的鉴定及功能分析本部分结合文献调研结果，对第三章HD-ZipⅣ亚家族基因和R2R3MYB第9亚家族基因进一步筛选，并对基因StMIXTA1-1,StMYB1-3,StHD1-2,StHD8-2进行全长扩增和生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR技术（qRT-PCR）分析基因StMXTA1-1，StMYB1-3,StHD1-2,StHD8-2在荆芥不同部位和不同叶序中的时空表达模式，发现在不同叶序中四个基因倾向于幼叶表达，且随着叶子成熟与衰老呈现下降的趋势。在不同部位中，StMIXTA1-1、StMYB1-3在幼叶中高表达，StHD1-2在幼叶和花穗中高表达，StHD8-2在花穗中高表达;烟草的亚细胞定位分析发现四个基因均被定位于细胞核中。StMIXTA1-1,StMYB1-3,StHD1-2,StHD8-2在烟草中过表达后烟草腺毛密度和长度均有显著性增加。利用酵母双杂系统（Y2H）和双分子荧光互补实验（BiFC）探究以上基因编码蛋白的互作关系，发现StMIXTA1-1、StHD1-2与StHD8-2三者之间存在互作，StMYB1-3、StHD1-2与StHD8-2三者之间存在互作，StMIXTA1-1与StMYB1-3没有互作，推测互作的转录因子可能形成了蛋白复合物发挥相应的功能。 4.荆芥腺鳞发生关键基因病毒诱导基因沉默及药用品质变化分析本部分首次建立荆芥病毒诱导的基因沉默（VIGS）体系，以荆芥StPDS白化基因为媒介进行病毒诱导基因沉默体系的建立，反向插入靶基因片段，于20天左右基因沉默效率最高。StMIXTA1-1,StMYB1-3,StHD1-2,StHD8-2应用相同方式沉默表达，沉默效率分别为63.92％,30.96％,40.68％,31.17％。沉默植株腺鳞形态和直径未发生显著性变化，腺鳞密度被显著性下调，其中以StMIXTA1-1基因沉默组变化最大。荆芥沉默植株的挥发性成分柠檬烯和胡薄荷酮相对含量显著性降低。薄荷烷类单萜生物合成路径上的关键基因StLS,StL3OH,StIPD,StIPR,StPR表达显著性下调，推测四个腺鳞发生关键基因可能通过降低腺鳞密度或者调控单萜生物合成路径基因的表达导致单萜合成减少。本部分研究基于四个基因沉默对腺鳞密度影响的结果，选择StMIXTA1-1基因沉默植株进行转录组和代谢组研究，探究该基因沉默导致腺鳞密度的减少对荆芥药用品质的影响。化学成分中萜类、黄酮类和脂类变化最大，结合代谢组和转录组分析，发现StMXITA1-1沉默植株中大部分萜类和脂类化合物含量和相关基因表达均显著下调，黄酮类化合物含量变化不显著，但KEGG富集的黄酮生物合成的基因和化合物在沉默组中上调。说明StMIXTA1-1基因沉默不仅导致了荆芥腺鳞密度的减少，也影响了主要次生代谢产物的合成与积累，从而影响荆芥的药用品质。收起

关键词 : 荆芥腺鳞单细胞测序 R2R3MYB第9亚家族 HD-ZipⅣ亚家族