中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

1. 喉鳞癌中Hsa-miR-145-5p及靶基因FSCN1调控紊乱的新机制及临床意义

[学位论文] 高伟山西医科大学 2013年博士导师: 王斌全共211页

摘要 : 【研究目的】 1.获得喉鳞癌中差异性microRNA表达谱，从中挑选预研究的靶标分子； 2.结合喉鳞癌临床病理参数评价Hsa-miR-145-5p及其靶基因FSCN1的临床意义，探讨它们与喉鳞癌预后的关系； 3.验证Hsa-miR-145-5p及其靶基因FSCN1的调控... 展开【研究目的】 1.获得喉鳞癌中差异性microRNA表达谱，从中挑选预研究的靶标分子； 2.结合喉鳞癌临床病理参数评价Hsa-miR-145-5p及其靶基因FSCN1的临床意义，探讨它们与喉鳞癌预后的关系； 3.验证Hsa-miR-145-5p及其靶基因FSCN1的调控关系，并明确他们在喉鳞癌细胞系Hep-2及TU-177中的体外、体内生物学功能； 4.初步明确两者在喉鳞癌中调控紊乱的分子生物学机制。【研究方法】 1.利用基因芯片技术获得喉鳞癌中差异性microRNA的表达谱； 2.通过生物信息学预测并结合文献，定位与喉鳞癌侵袭转移相关的microRNA及其靶基因； 3.利用qRT-PCR、Westernblot及免疫组化技术回顾性研究它们与喉鳞癌患者临床病理参数及预后的关系； 4.利用双荧光报告载体验证他们之前的靶向调控关系； 5.利用基因转染技术，通过loss-of-function及gain-of-function体外观察他们对喉鳞癌细胞恶性表型的影响，通过裸鼠移植瘤模型观察抑制肿瘤效果； 6.通过荧光共聚焦技术、电镜技术观察他们对喉鳞癌细胞骨架形成及细胞生物学结构的影响； 7.利用生物信息学技术预测Hsa-miR-145-5p甲基化位点，结合甲基化测序进行定量验证； 8.体外校正Hsa-miR-145-5p-FSCN1轴后，检测EMT关键分子的变化水平；数据全部录入SPSS21.0。率的比较用卡方检验，计量资料用t检验或方差检验，强度用秩和检验，生存分析用KM法及Cox模型。P<0.05认为差异有统计学意义。【研究结果】 1.基因芯片筛查发现Hsa-miR-145-5p是喉鳞癌中显著下调的差异性microRNA之一； 2.经生物信息学预测，同时利用双荧光报告载体验证了FSCN1是Hsa-miR-145-5p的直接靶基因；Hsa-miR-145-5p发挥对FSCN1转录后的调控作用； 3.miR-145-5p（抑癌基因）在喉鳞癌组织中存在显著异常低表达，而其靶基因FSCN1（癌基因）则存在显著异常高表达；miR-145-5p与喉鳞癌患者T分期、颈淋巴结转移、临床分期、分化程度呈负相关，而FSCN1与喉鳞癌患者T分期、颈淋巴结转移、临床分期、分化程度呈正相关（P<0.05）； 4.miR-145-5p低表达及FSCN1蛋白高表达提示喉鳞癌患者预后不良。其中FSCN1是喉鳞癌患者预后不良的单独影响因素；特别是同时伴有miR-145-5p低表达且FSCN1蛋白高表达这一分子特征是患者预后不良的独立风险因子。 5.体外实验证实恢复miR-145-5p的表达或敲减FSCN1的表达，则可抑制喉鳞癌细胞增殖、平板克隆、迁移及侵袭的恶性表型，同时可将喉鳞癌细胞阻滞在G0/G1期，并促进其凋亡；化学修饰的miR-145-5p及si-FSCN1药物具有体内抑制肿瘤生长的效果； 6.miR-145-5p启动子高甲基化引发其转录障碍，导致靶基因FSCN1调控紊乱，并在肿瘤细胞恶性间质转化（EMT）中发挥重要生物学效应。【研究结论】 1.喉鳞癌中存在显著差异性microRNA表达谱。miR-145-5p在喉鳞癌中显著下调，扮演抑癌基因角色，而其靶基因FSCN1扮演癌基因角色。同时伴有miR-145-5p低表达且FSCN1高表达的个体预后不良，且这一分子特征是喉鳞癌患者预后的独立危险因素。 2.miR-145-5p启动子高甲基化导致其功能失调，促进喉鳞癌细胞增殖、侵袭转移、间质转化等恶性表型，这一生物学效应是通过其靶基因FSCN1异常上调所介导。 3.本研究以microRNA这一新视角，明确了miR-145-5p及靶基因FSCN1调控紊乱是喉癌中的重要分子事件。也为以microRNA为靶点对喉鳞癌行分子靶向治疗提供新思路及理论依据。收起

关键词 : 喉鳞癌 Hsa-miR-145-5p基因靶基因FSCN1 调控机制

2. 基于循证与叙事构建肠造口适应实践模式

[学位论文] 闫媛媛山西医科大学 2021年硕士导师: 王斌全共185页

摘要 : 背景：造口患者存在生理-心理-社会-文化等多方面适应问题，使造口护理呈现专科性和复杂性特点，造口适应对于全面提升患者生活质量具有重要意义，但造口适应过程复杂，有待探索一条有效途径全面解决造口患者身-心-社-灵综合需求。叙事循证医学... 展开背景：造口患者存在生理-心理-社会-文化等多方面适应问题，使造口护理呈现专科性和复杂性特点，造口适应对于全面提升患者生活质量具有重要意义，但造口适应过程复杂，有待探索一条有效途径全面解决造口患者身-心-社-灵综合需求。叙事循证医学模式提倡循证医学与叙事医学的联合，初步开发出理论与实践的可操作模型，可使客观数据与主观体验相互联合，具有实践的可操作性，在解决造口患者综合需求方面具有优势。目的：本研究基于叙事循证医学模式理论框架联合行动研究实施，探索造口患者适应需求，调查造口专科护理实践现状；探索肠造口患者适应因素影响机制；构建基于最佳证据的肠造口适应实践模式及标准化实践方案；检验肠造口适应实践模式的有效性，探索标准化实践方案联合叙事护理在实践过程中的应用，评估对患者健康结局的影响。方法：本研究采用行动研究法，以计划-行动-观察-反思循环过程作为研究实施基本框架，在每阶段实施过程联合不同方法：第一阶段，以质性研究描述性现象学调查造口患者适应需求与造口专科护理现状；第二阶段，通过整合综述法获取造口适应相关文献，分析造口适应因素影响机制；第三阶段，以循证方法检索、筛选、评价、汇总造口适应最佳证据，并对证据进行分级和级别推荐，包括造口护理临床实践指南、造口专科护士角色与实践职责相关文献、第二阶段获取的造口适应相关文献；第四阶段，通过改良德尔菲法构建基于最佳证据，且适宜本土特色的造口适应实践模式及标准化实践方案，确定模式的具体维度和标准实践方案的具体条目；第五阶段，以叙事探究结合个案研究形式，探索标准化实践方案联合叙事在临床实践中的应用途径及临床意义，完善造口适应实践模式。结果：（1）造口患者适应需求调查与造口专科护理现状：通过对11名造口患者及7名相关医务工作者半结构化访谈和现场观察得出四个主题类属：主题1：造口患者适应需求多元化，包含6个次级主题（生理性需求、支持性需求、信息需求、情感需求、社会文化适应需求、自我护理需求）；主题2：造口患者适应过程与时间具有相关性；主题3：造口适应与个人经历有关；主题4：造口专科护理存在发展机遇。（2）造口适应因素分析：获取符合评价标准的造口心理-社会-文化适应相关文献22篇，获取45条相关证据，持续比较分析法得出结果，造口适应与支持具有相关性，通过作用于多种适应因素，促进造口患者达到个人-行为-环境的适应状态，由此构建造口适应支持要素模式图，包含3个适应条件：家庭支持、医疗支持、社会支持；9个适应因素：时间、认知、生理、心理、自我护理、信息、经济、文化、同伴支持；3个适应要素：个人、行为、环境。（3）造口适应最佳证据获取：共获取经AGREEII质量评价工具A级和B级推荐的造口护理相关临床实践指南8篇，符合纳入排除标准的造口专科护士角色与实践职责相关文献6篇，结合前期获取的造口心理-社会-文化适应22篇相关文献，共提取实践者、评估、专项护理、自我护理、健康教育、生活重建、出院前指导、延续护理8个类属，获取最佳汇总证据30项。（4）造口适应实践模式及实践方案构建：通过一轮改良德尔菲法达成专家共识，问卷函询专家权威系数为0.86，最终确定造口适应实践模式6个维度：时间、实践者、实践内容、实践措施、实践工具、评价；时间维度：疾病诊断期、术后住院期、出院准备期、调整适应期4个分期；实践内容：评估、专项护理支持、信息支持、心理社会适应支持4项；实践措施：基于提取的30项最佳证据，以时间维度为纵轴，实践内容为横轴，确定每一阶段相应实践内容下具体执行措施，各执行措施以条目清单形式列出，可根据时间分期选择相应条目内容，共形成73条推荐建议；实践工具：提供经检验有效的相应工具；评价：各阶段过程性考核和综合评价。（5）叙事与循证联合可行性评估：以前期拟定的造口适应实践模式为指导依据，研究者运用叙事探究方式介入造口术后患者生活，与患者、家属及相关医务工作者形成三维叙事探究空间，选取其中3例造口术后参与者，以个案护理故事形式展示标准化护理方案执行联合叙事干预过程，患者负性情绪改善，未发生并发症，或已发生并发症患者在干预后得到缓解。结论：叙事循证医学模式可实现循证医学与叙事医学的联合，用于造口专科护理实践中，借助行动研究框架为最佳证据与人文关怀在同一情境下发挥共同作用提供理论基础；基于循证方法构建的造口适应实践模式及标准化实践方案在造口专科性护理实践中具有实践指导意义；叙事与循证联合可用于造口适应实践的应用，叙事可发挥评估收集资料、健康教育、心理干预、质性研究的联合作用，易于探索患者内心体验。收起

关键词 : 肠造口循证护理叙事循证医学模式

3. 基于人—组织文化匹配理论的护士长护理组织文化胜任力评价指标体系研究

[学位论文] 赵璐山西医科大学 2014年硕士导师: 王斌全共150页

摘要 : 研究目的： 1.初步构建基于人—组织文化匹配理论的具有较高信度和效度的护士长护理组织文化胜任力的评价指标体系，为医院培养、任用、考核优秀护士长提供科学有效的评价工具。 2.通过评价指标的实证研究，了解护士长护理组织文化胜任力现... 展开研究目的： 1.初步构建基于人—组织文化匹配理论的具有较高信度和效度的护士长护理组织文化胜任力的评价指标体系，为医院培养、任用、考核优秀护士长提供科学有效的评价工具。 2.通过评价指标的实证研究，了解护士长护理组织文化胜任力现状与影响因素，为护士长的选拔、培养提供建议。对象与方法： 1.采用德尔斐专家咨询法(Delphi method)构建基于人—组织文化匹配理论的护士长护理组织文化胜任力评价指标体系本研究选取了全国护理管理、护理教育及医院管理/文化领域的25名专家，遍及山西、河南、北京、天津、上海、山东、辽宁、四川、广东9个省/直辖市和澳门，涉及15所三级甲等医院和5所有代表性的开设护理专业的医科类大学。从事护理管理、护理教育、医院管理/文化20年或者以上;有副高或以上职称;本科或以上学历。 2.护士长护理组织文化胜任力评价指标的应用根据评价指标中三级指标制定护士长护理组织文化胜任力的自评、他评表，采取整群抽样方法抽取山西省4所三级甲等医院的护士长167名，按年资分层抽样方法抽取这4所医院护士280名，共447人，进行实证研究。 3.统计学方法采用spss13.0软件包进行统计处理:对咨询专家的组成结构以及护士长护理组织文化胜任力的现状进行统计描述;运用专家意见集中程度、协调程度、积极系数和权威系数等指标，对专家咨询的可靠性和代表性进行检验;运用层次分析法(AHP)确定指标权重;采用克朗巴赫系数检验问卷信度，因子分析检验问卷效度;采用方差分析(ANOVA)、多样本均数间多重比较LSD-t检验、多元线性回归分析对护士长护理组织文化胜任力的影响因素进行分析。结果： 1.构建了基于人—组织文化匹配理论的护士长护理组织文化胜任力评价指标，制订了护士长护理组织文化胜任力评价表（自评、他评）指标筛选以重要性赋值均数＞3.50，变异系数＜0.25，满分比＞0.20为标准，结合专家修改意见以及课题组讨论，采纳7条删除意见、7条修改意见，7条增加意见，最终筛选出一级指标6个（组织战略、组织价值观、组织伦理、组织制度、领导行为、个体人格特质），二级指标26个，三级指标64个的护士长护理组织文化胜任力指标体系。根据评价体系三级指标形由64个条目组成的护士长护理组织文化胜任力自（他）评问卷，预调查结果显示:自评问卷信度在0.85以上，各维度信度系数均在0.85-0.95之间，他评问卷信度在0.80以上，各维度信度系数均在0.79-0.90之间，说明本问卷具有良好的信度。此外，本课题研究确定的指标体系，经过2轮专家咨询，确定了护士长护理组织文化胜任力评价条目的准确性与完整性，并请5名资深的护理管理专家在调查前对自评问卷做出评价，进行了最终的确认，保证自（他）评问卷具有较好的内容效度。 2.护士长护理组织文化胜任力评价指标的应用—护士长护理组织文化胜任力现状及影响因素的调查研究和分析自评问卷，发放180份，回收有效问卷167份，有效回收率为92.8％。他评问卷，发放300份，回收有效问卷280份，有效回收率为93.3％。自、他评问卷采用likerts分级评分后将每个条目进行100分制转换，转换后取值在0-100之间，对护士长护理组织文化胜任力得分进行统计学分析:自评问卷:总的胜任力得分为83.23±11.04，各维度得分依次为:组织战略得分为22.85±4.51，组织价值观得分为19.25±3.33，组织制度得分为15.95±2.18，领导行为得分为12.17±1.46，个体人格特质得分为7.35±0.95，组织伦理得分为5.67±0.69。他评问卷:总的胜任力得分为维度85.32±12.18，各维度得分依次为:组织战略得分为25.27±3.84，组织价值观为19.18±3.45，组织制度为16.24±2.16，领导行为为11.96±1.97，个体人格特质为7.25±1.19，组织伦理为5.43±0.86。对自评问卷进行单因素分析，结果显示:不同任期的护士长在领导行为和组织价值观上差异有统计学意义(P＜0.05)，不同学历的护士长在组织价值观、个体人格特质差异有统计学意义(P＜0.05),不同职称的护士长在领导行为、组织价值观、个体人格特质差异有统计学意义(P＜0.05)。护士长不同任期间比较，在组织价值观这一维度上，1-5年组与11-15年组比较,6-10年组与11-15年组比较，11-15年组与15年以上组比较，差异有统计学意义(P＜0.05);领导行为维度上，1-5年组与11-15年组比较，1-5年组与15年以上组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。护士长不同学历间比较，在组织价值观、个体人格特质维度上，专科组与本科组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)，专科组与硕士组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。护士长不同职称间比较，在组织价值观这一维度，初级与高级职称比较，差异有统计学意义(P＜0.05);在领导行为这一维度，初级与高级比较，中级与高级比较，差异有统计学意义(P＜0.05);在个体人格特质这一维度，初级与高级比较，中级与高级比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。进行多因素分析，结果显示:职称、学历是影响护士长护理组织文化胜任力的重要因素。自评问卷与他评问卷评分结果对比:自评问卷与他评问卷现状调查一级指标得分除了在组织战略与组织伦理这两个维度差异有统计学意义(P＜0.05)外，其余均无统计学意义。结论： 1.确定了基于人—组织匹配的护士长护理组织文化胜任力评价指标运用德尔斐专家咨询法(Delphi method)构建护士长护理组织文化胜任力评价指标，结果可靠且具有代表性，具有一定的科学性和有效性。最终确定护士长护理组织文化胜任力包括:6个一级指标，26个二级指标，64个三级指标，其中一级指标权重从高到低依次为:组织战略(0.2940)、组织价值观(0.2320)、组织制度(0.1870)、领导行为(0.1390)、个体人格特质(0.0847)、组织伦理(0.0633)。 2.根据护士长护理组织文化胜任力现状与影响因素提出一定建议目前护士长护理伦理方面能力不足，建议加强护理组织伦理的教育;建议在选拔护士长时将其职称和学历作为重要标准。创新点: 1.将组织文化胜任力与岗位胜任力区分开并界定了护理组织文化胜任力内涵。 2.为评价护士长行为、特征与护理组织文化是否匹配提供参考依据。继续开展课题的设想: 1.继续完善评价指标要素本研究评价指标体系是在人—组织文化匹配的理论基础上建立起来的，这里的组织文化为护理组织文化，忽略了护士长胜任力需要在适应护理组织文化的同时结合不同医院的文化氛围，今后将根据不同医院文化类型完善评价指标。 2.建立恰当的评价流程对护士长护理组织文化胜任力的评价既需要有扎实的理论分析和科学的评估法也要求有恰当的评价流程。因此对护士长护理组织文化胜任力的评价要结合其他相关评价流程。 3.进一步编制问卷，开展实证研究本研究考虑到护士长自我评价主观性较强，因而将问卷设置为内容相同的自评和他评两部分，但是由于时间关系，未能将问卷条目根据科学的筛选方法分为不同的两部分，以减少不同人群对条目的熟悉程度不同所产生的偏倚，因此今后可进一步做编制问卷的研究。此外，本研究实证对象集中在三甲医院，有一定局限性，因此需要后续实证研究中，扩大样本量并选取不同等级的医院。收起

关键词 : 护士长护理组织文化文化胜任力评价指标人才培养

4. 住院患者心理体验量表的研制与初步应用

[学位论文] 孟艳君山西医科大学 2020年博士导师: 王斌全共148页

摘要 : 目的：本研究拟研制与初步应用住院患者心理体验量表-1(筛查焦虑、抑郁情绪和自杀风险)和住院患者心理体验量表-2(筛查偏执型、情绪不稳定型和表演型人格倾向)，以期为护理人员了解非精神科住院患者心理问题的发生情况并有针对性地为患者实施心... 展开目的：本研究拟研制与初步应用住院患者心理体验量表-1(筛查焦虑、抑郁情绪和自杀风险)和住院患者心理体验量表-2(筛查偏执型、情绪不稳定型和表演型人格倾向)，以期为护理人员了解非精神科住院患者心理问题的发生情况并有针对性地为患者实施心理护理服务提供参考依据，促进和谐护患关系的发展。方法： 1.住院患者心理体验量表-1和住院患者心理体验量表-2的研制首先是编制量表初稿，通过文献研究和专家咨询，依据《疾病和有关健康问题的国际统计分类》第十次修订本并参考相关量表建立量表条目池，形成40个和32个条目的量表初稿。其次是量表的定性评价，选取20位专家采用Delphi法分别进行2轮专家咨询评定条目，形成37个和30个条目的预调查量表。最后是量表的定量评价，分别选取160例、450例和600例综合医院住院患者进行预调查、正式调查和量表的考评。采用经典测量理论和项目反应理论筛选条目，采用克朗巴赫?系数、重测信度、标准关联效度、结构效度考评量表，形成各12个条目的终量表。 2.住院患者心理体验量表的初步应用采用分层随机抽样的方法，以住院患者心理体验量表-1和住院患者心理体验量表-2为调查工具，对综合医院非精神科住院患者1080例进行调查，分析患者情绪体验和人格倾向的检出情况。结果： 1.住院患者心理体验量表-1研制的结果住院患者心理体验量表-1(Inpatient Psychological Experience Questionnaire-1，IPEQ-1)终量表用于筛查情绪体验中的焦虑、抑郁情绪和自杀风险，共有12个条目，其中每方面含4个条目。采用Likert5级评分法，每项0分～4分(0代表“完全没有”、1代表“偶尔”、2代表“一部分时间”、3代表“大部分时间”、4代表“全部时间”)，总分0分～48分，总分越高，不良情绪的程度越重。总分的P25分值(12分)作为筛查的分界值。总分≤11分，表示无不良情绪；12分～16分，表示有轻度不良情绪；17分～21分，表示有中度不良情绪；总分≥22分，表示有重度不良情绪。总量表的克朗巴赫?系数为0.91，3个因子的克朗巴赫?系数分别为0.85、0.86、0.83，表明量表的内部一致性非常可信。总量表的重测信度系数为0.95，3个因子分别为0.94、0.91、0.86，表明量表有较好的稳定性。量表的各方面与效标之间在0.01水平(双侧)上显著相关，表明量表的标准关联效度比较理想。各条目的因子载荷均＞0.50(P＜0.05)，拟合优度统计量基本达到标准，表明量表的结构效度比较理想。量表的完成率为91.17％，平均完成时间为3.19±3.09分钟，具有可行性。 2.住院患者心理体验量表-2研制的结果住院患者心理体验量表-2(Inpatient Psychological Experience Questionnaire-2， IPEQ-2)终量表用于筛查人格倾向中的偏执型、情绪不稳定型和表演型人格倾向，共12个条目，其中每方面含4个条目。采用两分类评分法，每项1分、0分(1代表“是”，0代表“否”)，总分0分～12分，总分越高，越可能具有某种或某几种类型人格障碍倾向的特点；各类型人格倾向得分0分～4分，反映具有某一类型人格障碍倾向的可能性。依据《疾病和有关健康问题的国际统计分类》第十次修订本诊断要点，三种人格倾向分别以各得分≥3分作为筛查的分界值。总量表的克朗巴赫?系数为0.78，3个因子的克朗巴赫?系数分别为0.60、0.64、0.63，表明量表的内部一致性可信。总量表的重测信度系数为0.87，3个因子分别为0.81、0.79、0.82，表明量表有较好的稳定性。量表的各方面与效标之间在0.01水平(双侧)上显著相关，表明量表的标准关联效度比较理想。3个条目P01、H01和H04因子载荷没有达到但接近参照标准，其他条目的因子载荷均＞0.50；所估计的参数均P＜0.05；拟合优度统计量基本达到标准，表明量表的结构效度比较理想。量表的完成率为87.17％，平均完成时间为3.71±3.39分钟，具有可行性。 3.住院患者心理体验量表初步应用的结果 (1)住院患者心理体验量表-1评估检出情况 1)非精神科住院患者不良情绪总体检出率为23.81％，表明综合医院住院患者中合并不良情绪的患者较多。 2)不良情绪普遍存在于临床各科室住院患者中，检出率排在前5位的科室是：血液内科(44.12％)、肿瘤科(41.76％)、神经内科(38.24％)、呼吸内科(30.43％)、神经外科(30.38％)，提示内科系统慢性疾病患者不良情绪的发生率较外科系统急性疾病患者更高。 3)≥60岁患者不良情绪检出率(32.24％)、离异/分居/丧偶患者不良情绪检出率(55.10％)更高，组间比较差异有统计学意义(P＜0.05)。 (2)住院患者心理体验量表-2评估检出情况 1)非精神科住院患者具有一种或多种人格倾向的总体检出率为25.29％，其中偏执型人格倾向10.89％，情绪不稳定型人格倾向11.87％，表演型人格倾向9.05％。共病偏执型和情绪不稳定型人格倾向检出率为1.95％，共病偏执型和表演型人格倾向2.63％，共病情绪不稳定型和表演型人格倾向2.82％，共病偏执型、情绪不稳定型和表演型人格倾向0.88％。 2)偏执型人格倾向检出率排在前5位的科室是：肿瘤科(15.18％)、泌尿外科(12.50％)、神经外科(11.61％)、神经内科(8.93％)、呼吸内科(8.04％)。情绪不稳定型人格倾向检出率排在前5位的科室是：内分泌科(11.48％)、神经外科(9.84％)、神经内科(9.02％)、泌尿外科(9.02％)、心血管内科(8.20％)。表演型人格倾向检出率排在前5位的科室是：神经外科(17.20％)、肿瘤科(12.90％)、神经内科(10.75％)、心血管内科(9.68％)、内分泌科(8.60％)。结果提示，三种人格倾向检出率内科系统较多。 3)离异/分居/丧偶患者偏执型人格倾向检出率(24.49％)更高，组间比较差异有统计学意义(P＜0.05)。 (3)住院患者情绪体验与人格倾向的相关情况 1)住院患者不良情绪与偏执型、情绪不稳定型、表演型人格倾向共病的检出率分别为5.36％、5.56％、3.22％。 2)住院患者情绪体验得分与三种人格倾向得分、人格倾向总分之间均呈显著正相关(P＜0.01)。结论： 1.研制的住院患者心理体验量表-1和住院患者心理体验量表-2具有较好的信度与效度，其应用具有可行性，可以作为综合医院非精神科住院患者情绪体验和人格倾向的有效评估工具。 2.综合医院非精神科住院患者不良情绪检出率较高，应予以重视。内科、60岁及以上患者、离异/分居/丧偶患者更易出现不良情绪，应重点关注。 3.综合医院非精神科住院患者具有一种或多种人格倾向的总体检出率较高，存在一定程度的共病，需引起足够的关注。内科人格倾向检出率较高。离异/分居/丧偶患者更可能具有偏执型人格倾向，需重点关注。 4.综合医院非精神科住院患者不良情绪与偏执型、情绪不稳定型、表演型人格倾向存在共病；患者的情绪体验与三种人格倾向关系密切。护理人员可以此为参考制订患者个体化的心理护理服务方案。收起

关键词 : 住院患者非精神科综合医院心理体验量表

5. Hsa-miR-301a-3p靶向调节Smad4在喉鳞癌侵袭转移中的机制研究

[学位论文] 卢岩山西医科大学 2015年博士导师: 王斌全共144页

摘要 : 研究目的： 1.从喉鳞状细胞癌差异性microRNA表达谱中筛选相关的miRNA进行研究； 2.利用生物信息学方法预测hsa-miR-301a-3p靶基因并对靶向调控关系加以验证； 3.研究hsa-miR-301a-3p和靶基因Smad4在喉鳞癌/癌旁正常黏膜新鲜标本、石蜡... 展开研究目的： 1.从喉鳞状细胞癌差异性microRNA表达谱中筛选相关的miRNA进行研究； 2.利用生物信息学方法预测hsa-miR-301a-3p靶基因并对靶向调控关系加以验证； 3.研究hsa-miR-301a-3p和靶基因Smad4在喉鳞癌/癌旁正常黏膜新鲜标本、石蜡标本和细胞株中的表达情况及相关性，结合临床病理参数评价它们的临床意义及与预后的关系； 4.研究hsa-miR-301a-3p和Smad4对喉鳞癌细胞增殖、克隆、迁移、侵袭、凋亡和细胞周期的影响，明确它们的生物学功能； 5.研究hsa-miR-301a-3p和Smad4参与喉鳞癌上皮间质转化的分子生物学机制。研究方法： 1.结合文献资料，从课题组已获得的喉鳞癌差异性microRNA表达谱中获取相关的miRNA； 2.结合生物信息学方法预测miRNA的靶基因，利用双荧光素酶报告基因检测的方法验证它们的靶向调控关系； 3.利用qRT-PCR和免疫组织化学方法在喉鳞癌/癌旁正常黏膜新鲜标本、石蜡标本和细胞株中的观察hsa-miR-301a-3p和靶基因Smad4表达情况； 4.将hsa-miR-301a-3p和Smad4表达情况与临床病理参数、术后随访资料相结合，评价它们的临床意义及与预后的关系； 5.采用功能获得和功能缺失的实验方法将构建Smad4过表达载体和商品化的hsa-miR-301a-3p抑制物转染至喉鳞癌细胞，通过MTS法、EdU法、平板克隆形成实验、Transwell法、流式细胞术等技术手段，观察它们对喉鳞癌细胞生物学功能的影响； 6.采用western blot方法观察hsa-miR-301a-3p和Smad4对上皮间质转化过程中关键分子的作用； 7.采用SPSS20.0软件进行数据整理，运用多种统计学方法对实验结果进行分析。研究结果： 1.从microRNA表达谱中筛选出上调表达的hsa-miR-301a-3p作为研究对象； 2.利用生物信息学方法预测出 Smad4为 hsa-miR-301a-3p的靶基因，成功构建Smad4的野生型和突变型3’-UTR，双荧光素酶报告基因检测结果证实它们确实存在靶向调控关系； 3.在喉鳞癌/癌旁正常黏膜新鲜标本、石蜡标本和细胞株中，hsa-miR-301a-3p表达量增高，Smad4表达量降低； 4.Hsa-miR-301a-3p表达与喉鳞癌患者的T分期相关，Smad4表达与喉鳞癌患者的分化程度、颈淋巴结转移相关； 5.Hsa-miR-301a-3p与Smad4两者之间呈负相关性； 6.Hsa-miR-301a-3p低表达或Smad4高表达的喉鳞癌患者预后较好，Smad4低表达伴hsa-miR-301a-3p高表达的喉鳞癌患者预后不良； 7.抑制hsa-miR-301a-3p表达或恢复Smad4表达可显著抑制喉鳞癌细胞的增殖、克隆、迁移和侵袭能力，促进细胞凋亡，阻滞细胞于G0/G1期； 8.Hsa-miR-301a-3p和Smad4的表达失调可引起上皮间质转化过程中重要分子变化。研究结论： 1.喉鳞状细胞癌中存在差异性microRNA表达谱； 2.Smad4是hsa-miR-301a-3p的靶基因，hsa-miR-301a-3p对Smad4存在靶向调控作用； 3.Hsa-miR-301a-3p在喉鳞癌中表达上调，起到癌基因作用，对于喉鳞癌细胞增殖、克隆、迁移和侵袭有促进作用，对细胞凋亡有抑制作用，转染其抑制剂后可将细胞周期阻滞于G0/G1期； 4.Smad4在喉鳞癌中表达下调，起到抑癌基因作用，对于喉鳞癌细胞增殖、克隆、迁移和侵袭有抑制作用，对细胞凋亡有促进作用，可将细胞周期阻滞于G0/G1期； 5.Hsa-miR-301a-3p高表达同时伴有Smad4低表达的患者预后不良； 6.Hsa-miR-301a-3p—Smad4参与了喉鳞癌上皮间质转化过程； 7.Hsa-miR-301a-3p通过调控其靶基因Smad4参与了喉鳞癌的发生发展和侵袭转移，为今后喉鳞癌的早期诊断、早期治疗和预后评估提供了新的分子标志物。收起

关键词 : 喉鳞状细胞癌靶向调节 Smad4基因侵袭转移临床诊疗

6. 区域癌化与喉鳞癌外科手术切缘的研究

[学位论文] 李亮山西医科大学 2014年博士导师: 王斌全共134页

摘要 : 背景和目的:喉鳞癌组织学上以鳞状细胞癌最为常见。喉鳞癌目前的治疗手段仍以外科手术为主。现代喉外科学提倡:喉鳞癌治疗应在保证生存率的前提下，尽量保留喉的功能。但是如何既保证生存率，又最大限度地保留喉功能是目前提高喉鳞癌手术疗效的瓶颈。... 展开背景和目的:喉鳞癌组织学上以鳞状细胞癌最为常见。喉鳞癌目前的治疗手段仍以外科手术为主。现代喉外科学提倡:喉鳞癌治疗应在保证生存率的前提下，尽量保留喉的功能。但是如何既保证生存率，又最大限度地保留喉功能是目前提高喉鳞癌手术疗效的瓶颈。外科切缘不仅是保证患者术后生存率与生存质量的核心因素，同时也是实施喉功能保留手术时临床医师较难把握的手术关键之一。切缘过大则喉正常组织被过多地切除，术后喉功能受损，严重影响患者术后的生存质量;切缘过小则容易导致肿瘤细胞残留，引起患者术后的复发，降低了生存率，因此对于外科切缘量和性的把握是临床医师诊疗过程中面临的棘手问题。常规喉外科切缘是否安全，常以形态学及组织病理学为基础，但常规病理学检查为阴性时仍有一定局部复发率，这反映出病理学检查在手术切缘安全判断的局限性。“区域癌化”(field cancerization)是指在外界致癌因素影响下，特定器官的一个或一组细胞积累遗传学改变，转化为癌前细胞，在致癌因素的持续作用下，癌前细胞进一步累积基因改变而转变为具有恶性的肿瘤细胞，而那些发生了基因改变的癌前细胞可以存在于切缘组织病理正常的黏膜中。杂合性缺失(loss of heterozygosity，LOH)反映的是肿瘤发生中特征性的基因改变，是研究肿瘤区域癌化的一种常用技术手段，目前针对喉鳞癌“区域癌化”的研究尚少。本研究拟通过LOH分析，验证喉鳞癌患者癌化区域的存在，通过分析比较基因改变情况，探寻在喉鳞癌发生发展过程中可能涉及的位点，并对目前的外科切缘的安全性进行探讨。方法:调取35例喉鳞癌患者手术切除后石蜡包埋组织标本，其中5例为术后复发并行二次手术患者。依据第7版UICC标准及WHO标准对患者进行TNM分期及病理分级。石蜡包埋组织行7μm连续切片、HE染色，在显微镜下区分肿瘤、癌旁及切缘等不同细胞分区并对各分区进行筛查，挑选符合标准的标本;使用激光捕获显微切割技术(Laser Capture microdissection，LCM)分别在肿瘤中心(T)，癌旁（F1-F4:癌旁距离＜5mm; F5:癌旁距离＞5mm），以及切缘(Ma-Md)位置进行显微切割，提取细胞;分别检测各区域细胞的LOH情况;结合病案资料分析对比各分区的LOH情况。为了检验喉鳞癌中是否存在区域癌化，本研究中使用位于9p、3p、17p、18q以及8p染色体上的9个微卫星位点(microsatellite)。这些位点选取是来自于潜在或者已知的抑癌基因的连锁位点，同时根据文献报道，选择在头颈肿瘤中研究较多的位点。对于在肿瘤中检测到LOH的患者，根据LOH的模式差异判断复发喉癌的克隆来源，并使用微卫星位点分析癌旁黏膜及手术切缘的差异。结果: 1.喉鳞癌患者中有25例在癌细胞中心位置(T)检出一个或多个位点的LOH，检出率83.3％(25/30); 2.9个微卫星位点在肿瘤中心的检出率分别为:D3S1284(31.6％)、D3S1300(44.4％)、D3S1234(55％)、D3S1568(47.1％)、D9S171(44.4％)、D9S1870(42.1％)、TP53(58.8％)、D18S1110(33.3％)以及D8S518(35.3％)。 3.在5名复发患者中，复发肿瘤LOH的模式与原发肿瘤的LOH一致; 4.抑癌基因TP53在肿瘤中心位置LOH检出与喉鳞癌患者的年龄、肿瘤发生的部位、淋巴转移、T分期均无关(P＞0.05)，与病理分级相关(P=0.021＜0.05)。其余各指标在肿瘤中心位置LOH检出与喉鳞癌患者的年龄、肿瘤发生的部位、淋巴转移、病理分级、T分期均无关(P＞0.05); 5.微卫星位点在癌旁黏膜（F1-F4，F5）有不同程度检出，各微卫星位点检出率分别是:D3S1284(83.3％)、D3S1300(75％)、D3S1234(72.7％)、D3S1568(75％)、D9S171(87.5％)、D9S1870(75％)、TP53(80％)、D8S518(33.3％)以及D18S1110(33.3％); 6.微卫星位点在切缘(Ma-Md)有不同程度LOH检出，各微卫星位点检出率分别是:D3S1284(83.3％)、D3S1300(37.5％)、D3S1234(54.5％)、D3S1568(50％)、D9S171(62.5％)、D9S1870(62.5％)、TP53(70％)、D8S518(16.7％)以及D18S1110(16.7％); 7.18名患者（60％)癌旁黏膜存在至少一个微卫星位点的LOH，其中10名患者（编号:1、4、6、9、10、12、14、23、26、27）不同区域的癌旁黏膜表现为相同的基因改变，6名患者（编号:11、17、19、20、22、25）癌旁黏膜表现为不同的基因位点的丢失。此外还有2名患者只有一个区域发生LOH(编号:3、8); 8.D8S518位点LOH在17、23患者癌旁黏膜检出，尤其是17号患者，该位点的改变扩展到了手术的切缘。D18S1110在3、20号患者的癌旁黏膜中检出，其中20号患者在手术后8个月发生了喉癌的复发（编号33）;; 9.15名患者(50％)切缘检测到至少1个位点的LOH，其中6名患者(编号:4、8、9、10、12、22)不同区域的切缘黏膜表现为相同的基因改变，1名患者（编号:3）切缘黏膜表现为不同的基因位点的丢失，其余8名患者(编号:6、11、14、17、19、23、26、27)只有一个区域的切缘检测到了LOH; 10.8名患者（编号:1、6、10、11、14、19、26、27）肿瘤中心(T)与癌旁区域表现为相同的基因改变，10名患者的肿瘤中心(T)较癌旁黏膜有额外的基因改变（编号:3、4、8、9、11、12、17、20、23、25）。此外，有6名患者(编号:3、6、10、11、14、19)肿瘤中心(T)与切缘表现为相同的基因改变，还有10名患者（编号:3、4、8、9、12、17、22、23、26、27）切缘黏膜表现不同于肿瘤中心(T)的基因改变; 11.12名患者（编号:3、4、6、8、9、10、11、12、14、17、19、26）同一标本中手术切缘与癌旁黏膜具有LOH的一致性，这两个区域具有共同的基因改变过程。而3号患者切缘(Mb)、22(Mb、Md)、27号患者切缘(Ma)表现出与癌旁黏膜的LOH模式的差异; 12.5名复发肿瘤患者的癌旁黏膜都检测到了微卫星的LOH，3名患者(编号:31、32、34)癌旁黏膜与肿瘤LOH模式一致，33和35号患者肿瘤中心(T)较癌旁黏膜有额外的基因改变。4名复发患者(编号:32、33、34、35)在切缘检测到LOH，发生LOH的位点较肿瘤中心(T)减少。与原发肿瘤相比复发肿瘤的切缘和癌旁黏膜的LOH模式存在差异，31号患者未在切缘检测到LOH，32、33、34、35号患者癌旁黏膜的LOH模式不同于相对应的原发肿瘤癌旁黏膜，32、33、34、35号患者切缘检出的LOH模式也与原发肿瘤存在差异; 13.癌旁黏膜(F1-F4，F5) LOH检出与喉鳞癌患者的年龄、肿瘤发生的部位、T分期、病理分级均无关(P＞0.05)，与淋巴转移相关（P=0.008＜0.05）; 14.切缘(Ma-Md) LOH检出与喉鳞癌患者的年龄、肿瘤发生的部位、T分期、病理分级均无关（P＞0.05），与淋巴转移相关（P=0.003＜0.05）; 15.TP53在癌旁黏膜(F1-F4，F5)检出与喉鳞癌患者的年龄、肿瘤发生的部位、病理分级、T分期均无关（P＞0.05），与淋巴转移相关(P=0.049＜0.05)。其余指标在癌旁黏膜(F1-F4，F5)检出与喉鳞癌患者的年龄、肿瘤发生的部位、淋巴转移、病理分级、T分期均无关（P＞0.05）。所有分指标在切缘(Ma-Md)检出与喉鳞癌患者的年龄、肿瘤发生的部位、淋巴转移、病理分级、T分期均无关(P＞0.05)。结论: 1.微卫星位点D3S1300、D3S1234、D3S1568、D9S171、D9S1870、TP53在肿瘤中检测超过40％，说明在喉鳞癌中这6个位点易发生改变，可考虑作为检测喉鳞癌LOH的位点; 2.复发的喉鳞癌与原发肿瘤存在克隆相关性，是属于喉鳞癌的局部原位复发，说明组织学阴性的切缘作为手术切除范围的判定存在一定风险; 3.研究中只有TP53的LOH与病理分级相关(p＜0.05)，但该结果仍需进一步深入研究。其他指标与年龄、性别、肿瘤部位、T分期以及淋巴结转移均无相关性; 4.喉鳞癌是多因素、多阶段、多步骤参与的渐进的病变过程; 5.本研究中大多数的喉鳞癌患者癌旁黏膜存在区域癌化，而且癌化区域的范围随患者不同而发生变化，有相当大的一部分的患者区域癌化扩展到手术的切缘; 6.D8S518和D18S1110位点在癌前区域向喉鳞癌发展的过程中可能起关键作用，目前还需进一步的研究; 7.癌旁黏膜的TP53的LOH可以考虑用来评估喉鳞癌是否发生淋巴结转移。收起

关键词 : 喉鳞癌区域癌化手术切缘杂合性缺失激光捕获显微切割疗效分析

7. 计算机辅助认知行为治疗对鼻咽喉手术患者心身症状干预研究

[学位论文] 杨洋山西医科大学 2021年博士导师: 王斌全共133页

摘要 : 目的：本研究拟研发基于计算机辅助认知行为治疗(cCBT)的围术期心身调节干预系统，并评估该系统在缓解鼻咽喉手术患者围术期间手术相关不良情绪、失眠、疼痛等心身症状的干预效果。方法： 1.现况调査。通过住院患者心理体验量表对耳... 展开目的：本研究拟研发基于计算机辅助认知行为治疗(cCBT)的围术期心身调节干预系统，并评估该系统在缓解鼻咽喉手术患者围术期间手术相关不良情绪、失眠、疼痛等心身症状的干预效果。方法： 1.现况调査。通过住院患者心理体验量表对耳鼻喉科住院患者的情绪和人格倾向进行间卷调査，分析不良情绪的相关因素。 2.釆用德尔菲法制定围术期心身调节干预方案。选取20位临床护理专家和10位心理学专家分别进行3轮专家咨询形成最终方案。在软件研发人员的帮助下，提供素材和需求，研发围术期心身调节干预系统。 3.围术期心身调节干预系统在喉肿瘤切除术和功能性鼻内镜手术(FESS)患者中的干预研究。釆用便利抽样对耳鼻喉科住院患者中进行喉肿瘤切除术和功能性鼻内镜手术的患者分别随机分组，分为干预组和对照组，干预组在常规护理的基础上使用计算机辅助的围术期心身调节干预系统进行干预，对照组在常规护理的基础上进行健康宣教。喉癌手术患者（干预组n=40，对照组n=40)在基线（T1)、术前1小时(T2)、术后2天（T3)、4天（T4)、6天（T5)分别釆集指标（如状态焦虑、抑郁、失眠、生存质量等）。FESS患者（干预组n=60，对照组n=60)在基线（T1)、术前1小时（T2)、术后2天（T3)、4天（T4)分别釆集主观指标（如状态焦虑、抑郁、失眠、疼痛等），客观指标（血压、心率、血清皮质醇、促肾上腺皮质激素、近红外光谱等），出院前完成一顶护理服务满意度调査间卷，比较两组在主观感受和客观指标的差异。 4.对FESS患者釆集了千预前、干预完成后患者前额叶及颞叶皮层的近红外光谱(fMRS)，比较干预组和对照组在激活及激活程度上的差异。结果： 1.对耳鼻喉科入院患者的现况调査发现：在2019年S月?2020年11月之间入院患者参与调査的2294人中存在不良情绪的患者206人，占总调査人数的8.89%，其中轻度不良情绪93人(4.05%)，中度不良情绪27人（1.18%)，重度不良倩绪86人（3.75%)，有自杀风险的患者55人（2.40%)。存在高风险人格倾向的患者252人（10.99%)。鼻咽喉手术患者中出现不良情绪的人数占比较大。相关分析发现：不良情绪与年龄、性别、是否手术显著相关，比起其他患者，中青年的女性患者在手术期间面临更高的焦虑情绪。 2.cCBT在喉肿瘤切除术患者中的应用，童复铡量方差分析结果显示：两组患者时间*组别的交互作用及时间效应显著（均Plt;0.01)，且干预组的状态焦虑（SAI)得分在T2?T5各时间点均低于对照组（均Plt;0.05)；患者健康抑郁间卷（PHQ-9)和雅典失眠量表（AIS)得分在T3?T5各时间点均低于对照组（均Plt;0.05)。干预组癌症治疗功能评价系统专用头颈量表（FACT-Hamp;N)得分在T2?T5各时间点均高于对照组（均尸lt;0.01)。 3.cCBT在FESS手术患者中的应用，分析结果显示：两组患者在SAI得分、AIS得分、VAS得分中时间*组别的交互作用及时间效应显著（均Plt;0.01)，干预组的SAI得分在T2?T4时间点均低于对照组（均Plt;0.01)；AIS得分在T3、T4时间点均低于对照组（均Plt;0_01)；(视觉模拟疼痛量表）VAS在T3时间点低于对照组(Plt;0.01)。PHQ-9得分时间*组别交互效应无统计学意义（P=0.06)。状态焦虑阳性率比较，干预组在T3时间点均低于对照组（Plt;0.01)，失眠阳性率比较，干预组在T3和T4时间点均低于对照组（P=0.03和0.048)。状态焦虑和失眠缓解率（T1~T2,/T3增分率lt;40%)比较，干预组显著高于对照组（P=0.001和P=0.02)。收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、心率（HR)指标中，干预组均在T2时间点显著低于对照组，干预组的血流动力学较对照组稳定。在术前1小时，对照组的皮质醇含量显著高于基线水平（Plt;0.01)和干预组（P=0.02)。干预完成后，干预组患者的满意度除疾病护理顶目外（P=0.12)，其他均显著高于对照组。 4.功能性鼻内镜患者近红外光谱（fMRS)分析显示： (1)两组患者治疗前后氧和血红蛋白（Oxy-Hb)52个通道(CH)激活程度的比较发现，两组干预后的通道数量和效应量均低于干预前，干预组激活通道数量和效应量均大于对照组，但无统计学差异。 (2)治疗后激活程度（Aoxy-Hb)组间比较有统计学差异的是CH14、CH18、CH25、CH46、CH47、CH48、CH49。 (3)基线水平各通道与症状量表的相关分析显示：与特质焦虑（TAI)相关的通道有CH14、CH25；与状态焦虑（SAI)相关的通道有CH18、CH26、CH38、CH39、CH46、CH47、CH48、CH49；与失眠（AIS)相关的通道有CH25、CH26、CH27、CH36、CH37。CCBT干预组中，与SAI减分差(T2-T4)相关的通道有CH46、CH47、CH48、CH49,与AIS减分差（Tm)相关的通道有CH25、CH480 (4)线性回归分析发现：cCBT干预后T2至T4的SAI减分差可以解释治疗前后CH49(眶额皮质）相对激活变化37%的差异；治疗后T3至T4的AIS减分差可以解释治疗前后CH25(背外侧皮质）相对激活变化40%的差异。结论： 1.耳鼻喉科住院患者中有一定比例的患者存在不良情绪和自杀风险，以及高风险人格障碍倾向，其中青壮年中手术的女性患者应给予重点关注，老年人的人格障碍倾向比例较高，应注意沟通方式，避免医患冲突。 2.喉肿瘤切除术的患者在术后容易受到焦虑、抑郁、失眠等困扰，生活质量较差，cCBT可以在术后缓解手术患者焦虑、抑郁、失眠、改善生活质量。 3.FESS患者术前焦虑和术后失眠问題显著，cCBT不仅能改善患者在术前等待间的焦虑情绪以及缓解术后失眼、疼痛，也可以降低术前等待区血清皮质醇的含量以及稳定术前血流动力学水平，提高对护理服务的满意度。 4.cCBT可以影响大脑前额叶皮层的眶额皮质和背外侧皮质的局部脑血流，焦虑和失眠的改善与眶额皮质和背外侧皮质的激活程度有显著相关。但是临床症状的改善是由局部皮质激活引起还是由于临床症状的改善导致局部皮质脑血流的增加，需要进一步研究。收起

关键词 : 围手术期计算机辅助认知行为治疗情绪困扰失眼心身调节

8. 肿瘤微环境在喉鳞状细胞癌侵袭转移过程中的作用和临床意义

[学位论文] 周丽媛山西医科大学 2019年博士导师: 王斌全共128页

摘要 : 肿瘤微环境在肿瘤细胞的增殖、侵袭以及转移过程中起着重要的作用。肿瘤微环境是一个复杂的微环境，头颈鳞状细胞癌通过对肿瘤微环境的影响来逃避宿主免疫系统的识别和攻击，同时也促进肿瘤的生长，血管生成和转移。本研究主要通过观察喉鳞状细胞癌(L... 展开肿瘤微环境在肿瘤细胞的增殖、侵袭以及转移过程中起着重要的作用。肿瘤微环境是一个复杂的微环境，头颈鳞状细胞癌通过对肿瘤微环境的影响来逃避宿主免疫系统的识别和攻击，同时也促进肿瘤的生长，血管生成和转移。本研究主要通过观察喉鳞状细胞癌(LSCC)微环境中的T淋巴细胞和巨噬细胞的浸润特点以及相关的免疫检查点分子的表达来研究它们与LSCC进展以及预后的关系。目的： 1.观察CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞在LSCC肿瘤周围和肿瘤中心的浸润特点，并分析T淋巴细胞浸润和LSCC的临床病理特征以及预后的关系。 2.观察CD68+和CD163+巨噬细胞在LSCC肿瘤周围和肿瘤中心的浸润特点，并分析巨噬细胞浸润和LSCC的临床病理特征以及预后的关系。 3.观察免疫检查点受体TIM-3蛋白和mRNA在LSCC中的表达及其临床意义。 4.观察PD-1和TIM-3在LSCCT淋巴细胞中的共表达情况，并分析其临床意义。 5.观察PD-L1在LSCC中巨噬细胞上的表达情况，并分析其临床意义。方法： 1.运用免疫组化法观察CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞和CD68+、CD163+巨噬细胞的浸润情况。 2.运用免疫组化法观察TIM-3蛋白的表达 3.运用RNAscope来观察TIM-3mRNA的表达。 4.运用多标记免疫荧光染色及多光谱成像技术来观察PD-1和TIM-3在肿瘤不同部位CD4+和CD8+T淋巴细胞上的共表达。 5.运用多标记免疫荧光染色及多光谱成像技术来观察PD-L1在肿瘤不同部位CD68+和CD163+巨噬细胞上的表达。结果： 1.T淋巴细胞和巨噬细胞在LSCC中存在大量的浸润，在肿瘤周围的浸润明显强于肿瘤中心。在肿瘤周围，CD4+T淋巴细胞浸润明显强于CD8+T细胞，CD68+巨噬细胞浸润明显强于CD163+细胞。在肿瘤内部CD4+和CD8+T细胞之间以及CD68+和CD163+巨噬细胞之间的浸润无差别。 2.在LSCC的T分期早期，无淋巴结转移以及无复发的患者中的T淋巴细胞浸润水平高于T分期晚期，淋巴结转移以及复发的患者，并且高水平浸润的CD3+和CD8+T淋巴细胞具有更长的生存期。相反，CD68+和CD163+巨噬细胞在T分期晚期及复发的患者中浸润水平明显高于T分期早期和无复发的患者，与巨噬细胞低水平浸润组相比，高水平浸润的患者具有更低的总生存期。多因素分析显示肿瘤周围CD8+T淋巴细胞以及CD163+巨噬细胞是LSCC预后的独立影响因素。 3.TIM-3在喉癌浸润的免疫细胞上以及喉癌细胞上均有表达。TIM-3蛋白和mRNA的高表达与LSCC的低分化，复发和淋巴结转移相关，TIM-3蛋白高表达的患者具有更差的总生存期。 4.LSCC中发现无论肿瘤周围还是肿瘤内部，PD-1和TIM-3和CD4+/CD8+T淋巴细胞存在共表达，LSCC的T晚期，复发以及低分化的患者具有更高的共表达比例，而且CD8+T细胞共表达比例更高的患者具有更差的总生存期。 5.LSCC中发现无论肿瘤周围还是肿瘤内部，PD-L1和CD68+/CD163+存在共表达，LSCC的T晚期，复发以及低分化的患者具有更高的共表达比例，而且CD163+T细胞共表达比例高的患者具有更差的总生存期。结论： 1.LSCC中存在着大量的T淋巴细胞和巨噬细胞的浸润，其浸润水平在不同的肿瘤部位、以及不同细胞类型和不同的肿瘤分期中浸润水平各不相同。 2.T淋巴细胞的高度浸润与LSCC进展的早期以及良好的预后相关。相反，肿瘤相关巨噬细胞(TAM)的高度浸润与LSCC的进展转移以及较差的预后相关。 3.TIM-3在LSCC的高度表达，并且其高表达与LSCC的进展以及较差的预后相关。 4.LSCC中PD-1和TIM-3在T淋巴细胞上共表达和PD-L1在巨噬细胞表达预示着更差的肿瘤进展和预后。T淋巴细胞以及TAM可能通过共表达不同的免疫检查点受体而发挥免疫逃逸作用来其促进肿瘤浸润转移。 5.在肿瘤免疫微环境中，结合不同的LSCC部位、肿瘤浸润免疫细胞类型以及肿瘤的进展阶段有助于更好的预测LSCC的预后以及肿瘤对免疫治疗的疗效。收起

关键词 : 肿瘤微环境喉鳞状细胞癌 T淋巴细胞巨噬细胞侵袭转移

9. 辅助沟通系统在运动神经元病患者居家护理中的应用研究

[学位论文] 唐珊护理学院 2021年博士导师: 王斌全共120页

摘要 : 目的：本研究基于运动神经元病患者及家庭主要照顾者的居家护理需求为基础，结合运动神经元病的疾病进展特点，设计研发应用于运动神经元病患者居家护理中的辅助沟通系统，帮助运动神经元病患者及时表达自己的需求，建立患者与照顾者之间良好的... 展开目的：本研究基于运动神经元病患者及家庭主要照顾者的居家护理需求为基础，结合运动神经元病的疾病进展特点，设计研发应用于运动神经元病患者居家护理中的辅助沟通系统，帮助运动神经元病患者及时表达自己的需求，建立患者与照顾者之间良好的双向沟通，提高患者的生存质量，减轻照顾者照护负担，改善其心理健康状况，提高生活质量。方法：本研究包括三部分的内容。第一部分为居家肌萎缩侧索硬化(amyotrophiclateralsclerosis，ALS)患者主要照顾者照顾负担现况调查及其影响因素分析。采用便利抽样方法，选取2019年1月-2020年5月在山西省太原市某三级甲等综合医院神经内科住院和门诊随诊符合纳入标准的124对ALS患者及其主要照顾者作为研究对象。采用面对面问卷调查的方式，使用自行设计的患者和照顾者的一般资料调查表、修订版ALS功能评定量表、照顾者负担量表、生活质量量表、焦虑自评量表、抑郁自评量表对照顾者照顾负担情况进行全面的评估。使用SPSS21.0软件对数据进行整理与分析，计数资料采用频数（构成比）描述，组间差异采用卡方检验进行检验。用多元线性回归分析照顾者自我感受负担各维度及总分的影响因素；采用有序logistic回归分析自我感受负担分级的影响因素。第二部分为运动神经元病患者居家照护需求的质性研究。采用目的抽样方法，选取了2019年6月-2020年1月在山西省太原市某三级甲等综合医院神经内科住院的运动神经元病患者的11名家庭主要照顾者作为研究对象。运用前瞻性研究设计、半结构式、面对面深度访谈的形式收集资料，应用Nancy现象学7步分析法对资料进行分析。第三部分为基于人工智能的运动神经元病患者眼动辅助沟通系统的研制与验证。基于普通摄像头和人工智能方法研制了一款运动神经元病患者眼动辅助沟通系统。首先，摄像头采集患者完成特定眨眼动作（比如：连续眨眼两次、连续眨眼三次、连续眨眼四次等）的视频流信号；其次，分别利用两步法（Viola-Jones算法+传统机器学习方法）和一步法（卷积神经网络）对视频流中每帧图像的睁眼/闭眼状态进行识别；最后，统计分析睁眼/闭眼二进制时间序列中包含的“0”的个数，即闭眼的次数，并在此基础上判定患者意欲表达的意图。比如：1s序列内包含两个“0”对应连续眨眼两次，表示有吸痰需求；1.5s序列内包含三个“0”对应连续眨眼三次，表示有兴趣爱好需求（譬如：看电视、听音乐等）；2s序列内包含四个“0”对应连续眨眼四次，表示有大便处理需求。结果：第一部分调查研究的结果：ALS患者及其照顾者均完整填写问卷视为1份有效问卷，共发放124份问卷，收回有效问卷120份，有效率为96.77%。ALS患者照顾者照顾负担总分为（63.63±16.36）分，处于中度到重度负担水平。①个人负担有7个指标，健康状况、患者疾病的了解程度、焦虑分级、焦虑标准总分、精力（照顾者）、功能水平分级、疾病严重程度得分有统计学意义（Plt;0.05）；②责任负担有11个指标，照顾者性别、健康状况、有无护工或保姆、焦虑分级、功能水平分级、焦虑标准总分、精力（照顾者）、情感职能（照顾者）、精神健康（照顾者）、心理健康总评（照顾者）、疾病严重程度得分有统计学意义（Plt;0.05）；③负担总分有11个指标，健康状况、有无护工或保姆、患者疾病的了解程度、焦虑分级、功能水平分级、焦虑标准总分、精力（照顾者）、情感职能（照顾者）、精神健康（照顾者）、心理健康总评（照顾者）、疾病严重程度总分有统计学意义（Plt;0.05）。④焦虑标准总分是个人负担（R2=0.518）、责任负担（R2=0.605）及负担总分（R2=0.755）的影响因素。⑤患者疾病的了解程度、焦虑标准总分、精力（照顾者）和疾病严重程度在负担分级中差别有统计学意义（Plt;0.05）。⑥焦虑标准总分和患者疾病的了解程度为ALS负担分级的影响因素（P＜0.05），焦虑标准总分越高，照顾负担越大（OR=1.351，95%CI：1.038,1.759）；不了解患者疾病的照顾者负担是很了解者的0.305（0.107,0.593）倍。第二部分质性研究的结果：从与照顾者居家照护体验的访谈内容中提炼出四个主题：①患者基本的生理需求是首先要满足的，即患者随着疾病的进展，逐步丧失语言沟通能力、日常生活自理能力，但又不能通过正常的语言沟通，及时寻求帮助，因而会导致患者的情绪沮丧、低落。同时，繁重的日常生活照料导致照顾者照顾负担较重。②对患者疾病的预后充满无望和怜惜，即照顾者对患者疾病的预后、疾病发展的状况、生存状态等比较了解，体现出疲惫、无奈、伤感等多种情绪交织，但更多的是对患者的怜惜，期望与患者建立良好的沟通，帮助减少彼此间的不良情绪。③感恩家庭的支持，即较重的照顾负担会与照顾者的角色发生冲突，也会受到家庭环境、经济收入等客观因素的影响。照顾者中，尤其是配偶关系的人员，对拖累子女多产生出愧疚感，同时还是会感恩家庭成员的支持。④最希望获得的帮助，即绝大多数照顾者希望得到医护人员的帮助，渴望得到更多关于疾病的最新治疗方案和进展，获取更便捷、更有力的医疗资源，期望得到更专业的护理方式，愿意去尝试任何觉得有帮助的治疗手段，对能促进彼此间沟通的新科技产品比较感兴趣，但是会受到价格、使用效果等多因素的影响。第三部分辅助沟通系统研制与验证结果：两步法中，Viola-Jones算法的人脸/眼睛检测成功率为90%左右，当患者不是正脸朝向摄像头或面部佩戴口罩等遮挡物时，Viola-Jones算法会出现漏检现象。分别利用BP人工神经网络、支持向量机和随机森林方法建立睁眼/闭眼状态识别模型，随机森林模型的识别准确率更高，可达96.20%左右，且模型鲁棒性更优，更稳定。一步法中，卷积神经网络模型直接将原始图像作为输入，无需Viola-Jones算法，因此不会发生漏检问题，睁眼/闭眼状态识别模型的准确率为94.25%。运动神经元病患者辅助沟通系统的实际应用反馈，能充分表明该系统的设计能满足患者基本的照护需求，在易学性和易用性方面的满意度是良好的，对于减轻照顾者的照顾负担，提高生活质量是有一定帮助的。结论：运动神经元病患者照顾者在居家护理中的照顾负担处于中度到重度负担水平。日常照顾负担主要体现在需要不断满足病人基本的生理需求，然而彼此间的沟通障碍增加了护理的困难、情感交流的缺失。基于照护病人的基本需求，充分结合运动神经元病的疾病进展特点和照顾者的理解力、执行力、依从性进行研发设计的辅助沟通系统，可以有效地捕捉运动神经元病患者的眨眼动作并识别其意图，帮助病人与照顾者建立了良好的双向沟通，改善身心体验，减轻照顾负担，提高生活质量。收起

关键词 : 运动神经元病肌萎缩侧索硬化症辅助沟通系统照顾负担照护需求

10. 喉鳞癌血清外泌体差异miRNAs筛选及miR-941功能研究

[学位论文] 赵沁丽山西医科大学 2020年博士导师: 王斌全共120页

摘要 : 背景：喉鳞状细胞癌(喉鳞癌)是头颈部最常见的恶性肿瘤之一，在包括山西省在内的中国北方地区高发。经过几十年的努力，喉鳞癌的治疗方式有了长足进展，但5年生存率却无明显提升。喉部解剖位置隐匿，喉鳞癌早期症状不典型，早期诊断不及时，极大... 展开背景：喉鳞状细胞癌(喉鳞癌)是头颈部最常见的恶性肿瘤之一，在包括山西省在内的中国北方地区高发。经过几十年的努力，喉鳞癌的治疗方式有了长足进展，但5年生存率却无明显提升。喉部解剖位置隐匿，喉鳞癌早期症状不典型，早期诊断不及时，极大地影响了患者的治疗效果和预后。目前，喉鳞癌的诊断主要依靠内窥镜下组织病理学检查，而侵入性的检测方式影响了该项检查的普及及动态评估。因此，在临床上亟待开发一种快速、微创、高灵敏度的诊断方法及有效可靠的生物学标志物。外泌体是活细胞主动分泌的直径为30-150nm的膜性囊泡，含有亲本细胞来源的蛋白质、脂质和核酸，可被释放到外周循环血液中。血液是临床上常用的、微创且易于重复获取的样本。MicroRNAs(miRNAs)是真核生物体内广泛存在的非编码小RNA，通常在肿瘤中异常表达，作为肿瘤抑制因子或癌基因在肿瘤的发生发展过程中发挥重要调控作用。循环血液中外泌体miRNAs已经在多数肿瘤中被报道可作为潜在的肿瘤标志物，用于肿瘤筛检、病程监测、疗效观察及预后评估等各环节。外周血外泌体miRNAs因外部有膜的包被，可逃避血液中核酸酶的消化，更为稳定，同时不易受到细胞外环境的影响，研究结果更为可靠；而且，外泌体内miRNAs的成分和丰度与总体血液中相比是有差异的，依赖于母体细胞，更能反映母体细胞的功能状态；另外，外泌体内有些miRNAs是富集的，有利于低丰度miRNAs的检出。在喉癌领域，相关的研究很少，我们尚未检索到喉鳞癌外周血外泌体miRNA表达谱的有关报道。本研究拟在高通量测序基础上，建立喉鳞癌血清外泌体miRNA表达谱，鉴定出有意义的血清外泌体miRNA，评估其在喉鳞癌诊断中的应用价值，并探究其在喉鳞癌恶性进程中的生物学功能，为喉鳞癌诊断标志物及治疗新靶点的发现提供参考依据。目的：建立喉鳞癌血清外泌体miRNA表达谱，筛选差异表达的miRNAs，评估血清外泌体miRNAs对喉鳞癌诊断的监测价值，探究关键miRNA在喉鳞癌恶性进展中的生物学功能。方法： 1、血清外泌体提取方法评估收集3例喉鳞癌患者血清，分别采用超高速离心法(UC)、ExoQuick试剂法(EQ)、8%PEG单次沉淀(PEG1)及8%PEG+5%PEG两次沉淀法(PEG2)提取这3例患者的血清外泌体。从提取到的外泌体的形态、粒径、浓度、标志蛋白表达及miRNA表达谱这几个方面来评估这四种方法的优劣。 (1)运用透射电镜(TEM)观察外泌体形态与大小；纳米颗粒跟踪仪(NTA)检测粒径及浓度；WesternBlot(WB)检测外泌体标志蛋白表达情况。 (2)提取外泌体RNA，通过高通量RNA测序获得这四种方法提取到的血清外泌体miRNA表达谱，进行彼此间相关性分析。 2、喉鳞癌患者血清外泌体差异miRNAs筛选用ExoQuick试剂提取6例喉鳞癌患者和6例健康对照者血清外泌体。 (1)等体积血清提取外泌体后，采用蛋白阵列印迹法分析外泌体相关蛋白表达情况，并用TEM和NTA检测比较两组样本间血清外泌体分泌水平。 (2)提取这12例实验对象血清外泌体RNA，进行高通量RNA测序，筛选两组间差异表达的miRNAs，采用miRanda、PITA和RNAhybrid软件预测它们的靶基因，对这些靶基因进行GO和KEGG富集分析。 3、喉鳞癌患者和健康对照者血清外泌体内参基因筛选 (1)从我们的测序数据和文献报道中选择候选参考基因。从测序数据中选择表达稳定、变异系数小、表达水平适中的miRNAs作为候选参考miRNAs。筛选标准：首先，排除在两组间表达水平有显著差异(P＜0.05)的miRNAs，或者TPM值＜1的miRNAs；其次，计算每个miRNA在两组中的平均TPM值，排除两组间平均TPM值之比值＜0.75或＞1.3的miRNAs；最后，计算每个miRNA在所有样本中总的变异系数，将变异系数按从小到大进行排序，选择平均TPM值＞50的miRNAs作为候选内参基因。此外，查阅文献后，U6和miR-16-5p也纳入到候选内参基因中。 (2)候选内参基因在另一组独立样本中进行qRT-PCR检测，用GeNorm、BestKeeper、NormFinder、DeltaCt和RefFinder等5种算法对候选基因的表达稳定性进行评估。 4、差异miRNAs人群验证及受试者工作特征(ROC)曲线分析 (1)从测序数据中选择在喉鳞癌患者血清外泌体中上调表达且表达量高(TPM值≥50)的9个miRNAs，在另外50名喉鳞癌患者及25名健康对照者中进行qRT-PCR验证。 (2)ROC曲线分析miR-941和miR-27a-5p的诊断效能。 (3)分析喉鳞癌组织测序数据中miR-941的表达状况。 (4)分析血清外泌体miR-941与喉鳞癌患者病理参数的相关性。 (5)分析YM500v3数据库中头颈部鳞状细胞癌及其他多种肿瘤中miR-941的表达状况。 5、miR-941对喉鳞癌细胞系功能影响 (1)qRT-PCR法检测人喉鳞癌细胞系FD-LSC-1、Tu686及正常口腔角质细胞系HOK的细胞内和细胞外miR-941表达水平。 (2)使用脂质体Lipofectamine3000分别将miR-941模拟物(mimics)和miR-941拮抗物(inhibitor)转染至喉鳞癌细胞FD-LSC-1和Tu686中，同时设立mimicsNC组和inhibitorNC组作为对照组，采用qRT-PCR检测转染效率。 (3)通过CCK8细胞增殖实验和Transwell侵袭实验分析转染miR-941mimics和inhibitor后FD-LSC-1和Tu686喉鳞癌细胞的增殖和侵袭能力的变化。结果： 1、血清外泌体提取方法评估 (1)TEM示四种方法提取到的外泌体都具有典型的杯口状或凹面圆盘状结构；NTA示EQ法获得的最富集囊泡粒径小于150nm，其他三种方法所获得的囊泡峰值粒径大于150nm，其中UC和PEG2法提取的囊泡显示出多个粒径峰，还分离到很多直径大于300nm的颗粒；NTA示EQ法所获得的外泌体浓度最高，其后依次为PEG1、PEG2和UC；WB显示四种方法富集到的外泌体都阳性表达蛋白CD63、CD81和TSG101，但是相同的蛋白上样量，EQ、PEG1法提取的外泌体中这三种蛋白表达量较UC、PEG2法高。 (2)高通量RNA测序显示UC、EQ、PEG1、PEG2四法提取到的血清外泌体中检出的miRNAs各有571、1094、1079、896种，对这些miRNAs的表达量进行Pearson相关性分析，彼此间相关系数在0.90以上，相关性很强。 2、喉鳞癌患者血清外泌体差异miRNAs筛选 (1)蛋白阵列印迹法显示喉鳞癌患者和健康对照者的血清外泌体表达CD81、CD63、Alix、FLOT1、ICAM1、EpCAM、ANXA5和TSG101等外泌体相关蛋白，但不表达细胞污染标志蛋白GM130；TEM下，同等大小视野中喉鳞癌患者血清外泌体数量多；NTA示喉鳞癌患者血清中的外泌体浓度较健康对照者显著增高(P＜0.05)。 (2)Agilent2100及微量电泳芯片显示两组样本RNA是以小RNA种类为主，无细胞RNA那样的18SrRNA和28SrRNA片段分布峰。 (3)高通量RNA测序后，两组共获得1608个成熟体miRNAs，其中1496个是已知的miRNAs，112个是软件预测的新miRNAs。以|log2foldchange|≥0.5且P＜0.05作为差异筛选标准，75个miRNAs的表达水平在两组间是有显著差异的，其中，在喉鳞癌患者中34个miRNAs表达上调，41个miRNAs下调表达。对这些差异miRNAs的靶基因进行GO和KEGG富集分析，GO分析显示这些靶基因主要参与了单有机体进程、定位、细胞成分组织或生物发生、分子功能、结合等生物学途径或功能，KEGG分析显示这些靶基因主要参与MAPK、Ras和FAK等肿瘤相关信号通路。 3、喉鳞癌患者和健康对照者血清外泌体内参基因筛选测序数据中共有8个miRNAs入选为候选内参miRNAs，分别是miR-30a-5p、miR-532-5p、miR-181a-5p、miR-425-5p、miR-363-3p、miR-424-3p、miR-181b-5p和miR-181a-2-3p，结合U6和miR-16-5p，这10个候选内参基因经过qRT-PCR验证后，五种算法对它们的表达稳定性进行评估排名，最终miR-30a-5p、miR-532-5p和U6被选用于最佳内参基因组合。 4、差异miRNAs人群验证及ROC分析 (1)喉鳞癌患者组与健康对照者组间表达水平差异有统计学意义的血清外泌体miRNAs是miR-941(P＜0.001)和miR-27a-5p(P＜0.01)，这两者表达趋势与测序数据一致，在喉鳞癌患者中是高表达的。剩余7个miRNA在两组间差异无统计学意义。 (2)血清外泌体miR-941预测喉鳞癌的的ROC曲线下面积(AUC)是0.797(P＜0.001)，95%可信区间为0.676-0.918；miR-27a-5p的AUC值是0.672，诊断效能低，未予以进一步研究。以血清外泌体miR-941的表达水平ΔCt值取5.139为诊断点，对喉鳞癌预测的灵敏度和特异度分别为82%和72%，约登指数最大，为0.54；当取ΔCt界值为5.381时，诊断灵敏度和特异度分别为92%和60%，约登指数为0.52。 (3)课题组前期对57例喉鳞癌患者的术后癌组织及其配对癌旁组织进行了转录组测序，miR-941在喉鳞癌肿瘤组织中的表达水平是癌旁组织的2.1倍，差异有统计学意义(P＜0.001)。 (4)检索公共数据库Ym500v3，在456例头颈鳞癌肿瘤组织和43例正常样本组织中，miR-941在肿瘤组织中的表达是正常组织中的2.38倍(P=0.0014)；同时，miR-941在肺鳞状细胞癌、食管癌、宫颈鳞状细胞癌、皮肤黑色素瘤、肝癌和乳腺癌等多数肿瘤的癌组织中表达水平比正常组织中高。 (5)血清外泌体miR-941表达水平在喉鳞癌患者中的声门上型者高于声门型者，T3+T4期者高于T1+T2期者，颈淋巴结转移者高于无转移者，Ⅲ+Ⅳ期者高于Ⅰ+Ⅱ期者，病理中、低分化者高于高分化者(P＞0.05)。尽管差异无统计学意义，但仍可发现miR-941表达与喉鳞癌的疾病进展和恶性程度是有一定关联的。公共数据库Kaplan-Meierplotter中头颈鳞癌测序数据的生存分析结果表明，miR-941的高表达与头颈鳞癌患者的不良预后显著相关(P=0.0016)。 5、miR-941对喉鳞癌细胞系功能影响 (1)FD-LSC-1和Tu686细胞中miR-941的表达量分别是HOK细胞中的5.51(P＜0.01)倍和2.11倍(P＜0.01)，FD-LSC-1和Tu686细胞上清外泌体中miR-941的表达量分别是HOK细胞外泌体中的2.20倍(P＜0.05)和5.46倍(P＜0.01)。 (2)CCK8增殖实验中，过表达miR-941后，miR-941mimics组细胞生长速度显著快于mimicsNC组(P＜0.01)，表明FD-LSC-1和Tu686细胞增殖能力增强；反之，转染miR-941抑制剂后细胞增殖能力随之降低。 (3)Transwell侵袭实验中，过表达miR-941后，miR-941mimics组穿膜细胞数显著多于mimicsNC组(P＜0.01)，表明F 收起

关键词 : 喉鳞状细胞癌外泌体生物标志物 has-miR-941 miRNAs