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排序：

[学位论文] 王利郑州大学 2017年博士导师: 汪忠镐共242页

摘要 : 背景和目的：胃食管反流病(GERD)是一种常见的消化道疾病。在西方国家，胃食管反流病的发病率已被为10%-20%；亚洲发生率略低于西方国家为约5.2%-8.5%。胃食管反流病不仅引起反酸烧心的症状，还可以引起有癌变倾向的Barrettt食管；有一部分胃食... 展开背景和目的：胃食管反流病(GERD)是一种常见的消化道疾病。在西方国家，胃食管反流病的发病率已被为10%-20%；亚洲发生率略低于西方国家为约5.2%-8.5%。胃食管反流病不仅引起反酸烧心的症状，还可以引起有癌变倾向的Barrettt食管；有一部分胃食管反流病患者表现为呼吸道症状：咳嗽、呼吸困难、多痰。尤其需要注意的是GERD在以下疾病表现出较高的发病率：哮喘、咳嗽、慢性阻塞性肺病(COPD)，与特发性肺纤维化(IPF)。而且，GERD在这些疾病的出现通常预示着更差的生活质量和预后。食管的症状与并发症通常与胃液中的胃酸、胆汁直接刺激和继发炎性微环境改变有关。而呼吸道症状则与神经反射、胃液误吸、胃液微量吸入导致的机能变化和炎性微环境改变有关。虽然有关GERD的相关研究很多，但是胃食管反流病的引起的食管和肺部整体的基因表达的改变仍然没有被研究。如今，二代测序技术为我们研究整体的基因表达的改变提供了强有力的工具。凭借着更高的测序速度和灵敏度，二代测序技术被用来识别差异表达的基因，发现新的转录。近年来，虽然有利用二代测序技术来研究胃食管反流的细胞实验和microRNA研究，但是还没有针对胃食管反流对更真实模拟胃食管反流影响的动物模型食管和肺部影响的转录组学研究。因此，本课题拟通过GERD在食管和肺部的转录基因组进行二代测序并进一步进行生物信息学的分析，对测序得到的差异表达基因结合OMIM数据库得到的相关疾病基因进行生物信息学分析：GO分析，KEGG通路分析，蛋白质–蛋白质相互作用网络分析，并对有关临床特征进行生物信息学分析和验证。初步探讨GERD对食管和肺部转录基因组表达的影响，以期为进一步GERD相关疾病的研究提供线索和参考。本研究分为以下两个部分：第一部分：对胃食管反流大鼠模型食管组织转录组学研究；第二部分：对胃食管反流大鼠模型肺组织转录组学研究。第一部分对胃食管反流大鼠模型食管组织转录组学研究目的：通过对胃食管反流大鼠模型食管组织转录组学研究分析胃食管反流对食管的影响，并找出可能联系胃食管反流和Barrett食管的分子基础。方法： 1.建立胃食管大鼠模型； 2.利用二代测序技术检测对照组大鼠、GERD大鼠模型食管组织转录基因组的表达情况，分析得到食管差异表达基因，并对其进行生物信息学分析：GO分析，KEGG通路分析，STRING蛋白质相互作用网络分析； 3.结合在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)检索到的GERD及Barrett食管相关基因，对这些基因进行比较和分析，找出可能联系GERD及Barrett食管的基因。结果： 1.GERD大鼠模型食管转录基因组测序得到749条差异表达基因； 2.对这749条差异表达基因进行GO分析显示：分子功能(molecular functions, MF)、生物过程(Biological Process, BP)和细胞组分(Cellular Component,CC)聚类分析分别分为8组、12组、7组，过表达分析对应的出现富集程度改变的类别分别有17个、37个和13个(P＜0.05)； 3.KEGG一共检索到相关的通路有237条，利用DAVID进行的富集分析显示41条通路富集程度改变明显(P＜0.05)； 4.STRING识别出食管749条差异表达基因中的668条基因，有450条基因发生蛋白质-蛋白质相互作用，处于中心位置与较多蛋白有相互作用的枢纽基因(hub gene)为Fos,Rac2,Mmp9,Agt,Fgr,Itgb2,Hck,Cd68,Itgam,Tyrobp等基因； 5．在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)检索到的GERD及Barrett食管相关人类基因位点分别是205个和439个，对应的大鼠基因分别是176个和367个； 6.同时出现在两个基因列表中的28条人类基因和对应的24条大鼠基因为可能联系两种疾病的基因； 7.同时出现在差异表达基因和Barrett食管相关大鼠基因两个基因列表中的22条大鼠基因为可能联系两种疾病的基因； 8.用GERD及Barrett食管相关大鼠基因在STRING检索得到的蛋白质-蛋白质相互作用网络中，可能联系两种疾病的基因为处于中心位置与较多蛋白有相互作用的枢纽基因(hub gene)：Tp53,Akt1,Mapk8,Stat3,Akt2,Mapk9,Mapk10,Ins2,Pten,Kras,Smarca4,Egfr,Erbb3,Hras,Crebbp等基因。 9.用食管差异表达基因和Barrett食管相关大鼠基因在STRING检索得到的蛋白质-蛋白质相互作用网络中，可能联系两种疾病的基因为处于中心位置与较多蛋白有相互作用的枢纽基因(hub gene)：Tp53,Akt1,Stat3,FosIns2,Mapk8,Akt2,Il6,Fgr,Mmp9,Mapk9,Kras,Mapk10,Rac2,Egfr等基因。小结： 1．GERD大鼠模型食管转录基因组有749条基因差异表达； 2．GERD与Barrett食管之间存在有相互联系的基因，但各个可能联系两种疾病的基因还需要更深入的验证。第二部分对胃食管反流大鼠模型肺组织转录组学研究目的：通过对胃食管反流大鼠模型肺组织转录组学研究分析胃食管反流对食管的影响，并找出可能联系GERD和哮喘、咳嗽、IPF、COPD的分子基础。方法： 1.利用二代测序技术检测对照组大鼠、GERD大鼠模型肺部组织转录基因组的表达情况，分析得到差异表达基因，并对其进行生物信息学分析：GO分析，KEGG通路分析，STRING蛋白质相互作用网络分析； 2.结合在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)检索到的GERD及哮喘、咳嗽、IPF、COPD相关基因，对这些基因进行比较和分析，找出可能联系GERD与这些肺部疾病的基因。 3.结合模型大鼠肺部病理特点利用Reactome进行相关分析，并对有关基因进行验证。结果： 1.GERD大鼠模型肺部组织转录基因组测序得到380条差异表达基因； 2.对这380条差异表达基因进行GO分析显示：分子功能(molecular functions, MF)、生物过程(Biological Process, BP)和细胞组分(Cellular Component, CC)聚类分析分别分为7组、12组、7组，过表达分析对应的出现富集程度改变的类别分别有9个、16个和5个(P＜0.05)； 3.KEGG一共检索到相关的通路有194条，利用DAVID进行的富集分析显示9条通路富集程度改变明显(P＜0.05)； 4.STRING识别出肺部380条差异表达基因中的345条基因，有203条基因发生蛋白质-蛋白质相互作用，处于中心位置与较多蛋白有相互作用的枢纽基因(hub gene )为Actn2,Cxcr2,Il1b,Mmp9,Ccr1,Edn1,Tlr2,LOC497963,Ccl2,Itgam等基因； 5．在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)检索到的哮喘、咳嗽、IPF、COPD相关人类基因位点分别是270个、50个、106个和436个，对应的大鼠基因分别是232个、44个、75个和318个； 6.同时出现在GERD和哮喘两个基因列表中的8条人类基因和对应的7条大鼠基因为可能联系两种疾病的基因； 7.同时出现在肺部差异表达基因和哮喘两个基因列表中的14条大鼠基因为可能联系两种疾病的基因； 8.同时出现在GERD和咳嗽两个基因列表中的6条人类基因和对应的4条大鼠基因为可能联系两种疾病的基因； 9.同时出现在肺部差异表达基因和咳嗽两个基因列表中的1条大鼠基因为可能联系两种疾病的基因； 10.同时出现在GERD和IPF个基因列表中的3条人类基因和对应的2条大鼠基因为可能联系两种疾病的基因； 11.同时出现在肺部差异表达基因和IPF两个基因列表中的3条大鼠基因为可能联系两种疾病的基因; 12.同时出现在GERD和COPD两个基因列表中的13条人类基因和对应的10条大鼠基因为可能联系两种疾病的基因； 13.同时出现在肺部差异表达基因和COPD两个基因列表中的10条大鼠基因为可能联系两种疾病的基因； 14.用GERD及哮喘相关大鼠基因在STRING检索得到的蛋白质-蛋白质相互作用网络中，可能联系两种疾病的基因为处于中心位置与较多蛋白有相互作用的枢纽基因(hub gene)：Tnf,Stat6,Il4,Ptpn6,Stat4,Tyk2,Cxcl12,Il12b,Tgfb1,Ifng,Lep,Mmp9,Vegfa等基因； 15.用肺部差异表达基因和哮喘相关大鼠基因在STRING检索得到的蛋白质-蛋白质相互作用网络中，可能联系两种疾病的基因为处于中心位置与较多蛋白有相互作用的枢纽基因(hub gene)：Tnf,Lep,Stat6,Il4,Tgfb1,Cxcl12,Il12b,Il1b,Itgam,LOC497963,Mmp9,Tlr4,Tyk2等基因； 16.用GERD及咳嗽相关大鼠基因在STRING检索得到的蛋白质-蛋白质相互作用网络中，可能联系两种疾病的基因为处于中心位置与较多蛋白有相互作用的枢纽基因(hub gene)：Hdac8,Pten,Crebbp,Cdc6,Fgfr1,Ret,Csnk2a1,Ehmt1,Orc1,Ptpn11,Wnt5a等基因； 17.用肺部差异表达基因和咳嗽相关大鼠基因在STRING检索得到的蛋白质-蛋白质相互作用网络中，可能联系两种疾病的基因为处于中心位置与较多蛋白有相互作用的枢纽基因(hub gene)：Cxcr2,Actn2,Il1b,Mmp9,Tlr2,Ccr1,Edn1,LOC497963等基因； 18.用GERD及IPF相关大鼠基因在STRING检索得到的蛋白质-蛋白质相互作用网络中，可能联系两种疾病的基因为处于中心位置与较多蛋白有相互作用的枢纽基因(hub gene)：Egfr,Pten,Erbb2,Cav1,Hras,Ptpn11,Crebbp等基因。 19.用肺部差异表达基因和IPF相关大鼠基因在STRING检索得到的蛋白质-蛋白质相互作用网络中，可能联系两种疾病的基因为处于中心位置与较多蛋白有相互作用的枢纽基因(hub gene)：Tgfb1,Fgr,Mmp9,Edn1,Egfr,LOC497963,Actn2,Erbb2,Cxcr2,Cdkn1a,Il1b,Tlr2等基因； 20.用GERD及IPF相关大鼠基因在STRING检索得到的蛋白质-蛋白质相互作用网络中，可能联系两种疾病的基因为处于中心位置与较多蛋白有相互作用的枢纽基因(hub gene)：Stat3,Notch1,Egfr,Il6,Tgfb1,Crebbp,Erbb2,Pten等基因； 21.用肺部差异表达基因和IPF相关大鼠基因在STRING检索得到的蛋白质-蛋白质相互作用网络中，可能联系两种疾病的基因为处于中心位置与较多蛋白有相互作用的枢纽基因(hub gene)：Il6，Stat3，Tgfb1，Mmp9，Egfr，Edn1，Fgr，Kras，Nos3等基因； 22.肺部比较明显的病理特点是细胞外基质重构，在Reactome查询到的与之相关的分类是细胞外基质组织(R-RNO-1474244)，里面涉及了17条基因：Mfap4,Ceacam4,Ctsg,Itga7,Fn1,Mmp8,Mmp9,Elane,Vcan,Itgam,Lox,It 收起

关键词 : 胃食管反流 Barrett食管转录组学 RNA-seq技术

2. 河南省食管良性狭窄相关病因分析及微创治疗的效果观察

[学位论文] 李治仝郑州大学 2018年博士导师: 汪忠镐共106页

摘要 : 目的：食管狭窄是由各种原因引起的食管管腔缩小的疾病，它可引起患者出现吞咽困难、呕吐、吸入性肺炎、体重减轻、免疫力下降等，甚至导致死亡，严重影响患者的生活质量。大多数食管狭窄是恶性的，良性食管狭窄少见。食管良性狭窄常见的原因有... 展开目的：食管狭窄是由各种原因引起的食管管腔缩小的疾病，它可引起患者出现吞咽困难、呕吐、吸入性肺炎、体重减轻、免疫力下降等，甚至导致死亡，严重影响患者的生活质量。大多数食管狭窄是恶性的，良性食管狭窄少见。食管良性狭窄常见的原因有食管、胃外科手术后、长期胃食管反流刺激、酸碱摄入烧灼、射频消融治疗、胸部放射治疗或嗜酸粒细胞性食管炎等引起的食管狭窄。尽管有很多治疗良性食管狭窄的方法，但任何机械处理之后都表现出非常高的复发倾向和并发症。本研究旨在分析河南省良性食管狭窄的特点，结合我科使用球囊导管、支架置入、抗反流手术治疗不同病因的食管良性狭窄的临床经验，探讨不同的微创手术方式对不同病因的食管良性狭窄的安全性及临床效果。方法：一、河南省食管良性狭窄相关病因及狭窄特点分析对312例食管良性狭窄患者根据其病史、多层螺旋CT、上消化道造影及胃镜检查，明确食管狭窄的类型、狭窄的部位、长度及程度。采用DSA下或胃镜直视下活检明确病变性质。二、介入治疗食管良性狭窄疗效分析 2013年1月至2016年12月，在我院介入科共收集488名食管良性狭窄患者入组。分析所有患者入院时症状、体征、有无合并症等。针对不同病因的食管狭窄采取球囊扩张成形术或者联合食管可回收金属覆膜支架置入术，观察术后并发症情况及随访临床疗效。三、介入手术联合抗反流手术治疗胃食管反流性食管良性狭窄疗效分析 2013年1月至2016年12月，共收集66例反流性食管狭窄患者，采用介入治疗（球囊扩张治疗或者联合可回收支架置入）组38例，介入治疗解除食管狭窄后再次抗反流手术组28例。分析两组患者入院时一般情况、症状、体征、合并症等，观察围手术期并发症情况及术后随访临床疗效。四、术前检查评估入院患者术前常规行多层螺旋CT、上消化道造影及胃镜检查，明确食管狭窄的性质、狭窄的部位、长度及狭窄段管径。CT进行平扫和多期增强扫描，观察食管段狭窄有无强化、有无纵膈感染，初步判断食管狭窄的部位、性质及严重程度等。数字胃肠x线造影选用碘造影剂，判断食管狭窄的部位、长度、狭窄管径、有无食管瘘以及是否合并食管裂孔疝等情况。常规胃镜判断狭窄病变情况、贲门有无松弛，明确病变的部位，通过活检明确病变性质。当反流性食管狭窄解除1个月未再复发者，行食管高分辨率压力测定及24小时食管PH-阻抗监测，观察食管括约肌及反流情况。食道测压可以了解静息时和吞咽时食管各部分结构（食管上括约肌、食管体部和下食管括约肌）的压力水平，也能检查出有无食管裂孔疝。食道阻抗-PH联合监测系统主要监测胃食管反流患者的DeMeester(DMS)评分、PH＜4所占的反流时间、站立位PH＜4的时间、卧位PH＜4的时间、PH＜4的反流次数、症状指数等。五、食管球囊扩张成形术患者仰卧于DSA检查床上，头偏向右侧，吸氧、心电监护、铺巾，首先口服造影剂正位造影确定狭窄位置、程度和狭窄长度。5F椎动脉导管和加硬导丝配合下经过狭窄段食管至胃腔，沿加硬导丝交换10、12、15、20、25或者30mm等不同规格的球囊导管，以狭窄环位于球囊正中位置为最佳，慢慢加压充盈球囊。如果患者不能耐受扩张，或者经球囊导管扩张后食管狭窄仍存在，选用食管支架置入术。六、食管可回收自膨式金属支架置入术术前禁食12小时，患者仰卧于DSA检查床上，头偏向右侧，首先口服造影剂正位造影确定狭窄位置、程度和病变长度。置开口器，在导丝导管引导下经口、咽、食管，通过狭窄部位进入胃腔，经导管造影证实导管进入胃腔无误，交换加硬导丝，沿加硬导丝选用合适型号的食管内支架。常用的食管可回收支架型号为直径:13-22mm，长度:80-140mm。调整支架位置后完全释放复查造影了解自膨式支架位置如何，评估造影剂是否顺利通过狭窄食管段、有无对比剂外溢等。七、腹腔镜下抗反流手术腹腔镜下抗反流手术选用腹腔镜下Toupet法胃底折叠术或合并食管裂孔疝修补术。全麻插管，患者取仰卧位，头高脚低30°，双下肢分开，主刀者站于患者的两下肢之间。腹部常规消毒、铺巾，在肚脐上缘戳1个1.0cm孔置气腹针建立气腹，气腹压力为12-15mmHg。然后在腹腔镜下在上腹部再戳1个1.0cm和3个0.5cm孔，置入相应大小的套管针(trocar)。有食管裂孔疝者先将疝内容物复位，用超声刀游离食管周围韧带、网膜组织，暴露左、右膈肌脚及食管，游离下段食管有约3-5cm长度，避免损伤血管和神经。先用2-0丝线间断缝合膈肌脚缩小食管裂孔至1.5cm，然后将胃底自食管右侧后方包绕食管下段270°，用2-0丝线间断缝合胃底与包绕的食管约2～3针，宽约2.0～3.0cm，最后形成270°的宽松折叠瓣包绕食管下段。患者在术后恢复胃肠蠕动功能开始进流质饮食，逐步过渡到普通饮食。八、统计学分析使用SPSS17.0软件统计分析（SPSS，美国芝加哥），所有定量资料数据采用（x±s）表示，定性资料数据均以百分比形式表示。连续性资料用t检验，资料不符合正态分布用Mann-Whitney检验和wilcoxon秩和检验统计分析。相对危险度(odds ratios，OR)用Logistic回归分析。P＜0.05表示差异有统计学意义。结果：一、河南省食管良性狭窄的相关病因及狭窄特点分析 312例食管良性狭窄患者中，246例患者(78.8％)为食管癌或贲门癌术后吻合口狭窄，32例(10.3％)因胃食管反流引起食管溃疡性狭窄;20例(6.4％)为强酸、强碱引起的食管腐蚀性狭窄;14例(4.5％)因肿瘤放疗损伤食管造成狭窄。按照食管狭窄的长度划分，262例84.0％）为短节段狭窄（狭窄长度≤2cm），多见于吻合口狭窄;50例(16.0％)为长节段狭窄(狭窄长度＞2cm)，多见于化学物质腐蚀性狭窄。二、介入治疗食管良性狭窄患者疗效观察 488例食管良性狭窄患者入组，其中368例食管吻合口狭窄患者均先采用小球囊预扩张，300例患者再次采用20mm或者25mm较大球囊扩张成形术，360例球囊扩张手术成功，成功率为97.8％;66例反流性食管狭窄患者均成功采用25mm或者30mm大球囊扩张成形;35例腐蚀性食管狭窄患者中，30例患者首先空肠营养管置入，1个月后采用12mm或15mm球囊扩张，球囊扩张成功28例，成功率为80％;19例放疗性食管狭窄中均成功采用25mm或者30mm球囊扩张成形。球囊反复扩张后狭窄复发者，选用可回收食管内支架置入。62例吻合口狭窄患者成功放置可回收金属覆膜内支架，6例反流性食管狭窄患者放置食管支架，15例腐蚀性食管狭窄放置食管支架，3例放疗性食管狭窄放置食管支架。术后患者平均随访10.5±2.9个月，有88.3％的吻合口狭窄组患者临床治愈，24.3％反流性狭窄组治愈，74.2％腐蚀性狭窄组患者治愈，77.8％放疗性狭窄组患者治愈。反流性狭窄组治愈率明显低于其他三组(P＜0.05)。食管狭窄的总体通畅率，在短期内四组没有明显差别，但在中长期随访中发现反流性食管狭窄组通畅率(62.2％)明显低于吻合口狭窄组(90.4％)、腐蚀性狭窄组(87.1％)和放疗性狭窄组(88.9％)。三、介入治疗联合抗反流手术治疗反流性食管狭窄疗效分析共66例反流性食管狭窄患者入组。其中，介入治疗（球囊扩张或联合支架置入）组38例，男性24例，女性14例，平均年龄60.16±9.82岁;介入治疗联合抗反流手术组28例，男性20例，女性8例，平均年龄57.32±10.35岁。介入治疗组，失访1例，临床治愈9例(24.3％)，有效20例(51.4％)，无效9例(24.3％)，总有效率75.7％;介入治疗联合抗反流手术组，无失访患者，临床治愈14例(50％)，有效13例(46.4％)，无效1例(3.6％)，总有效率96.4％。介入治疗联合抗反流手术组临床总有效率比介入治疗组显著升高(P＜0.05)。结论： 1、在河南省，食管良性狭窄大部分是食管或胃术后吻合口狭窄，反流性食管狭窄的发病率也不应忽视。 2、球囊扩张或联合食管内支架治疗食管良性狭窄是安全、有效的方法。但是不同病因的食管狭窄临床疗效有差异。球囊扩张或者联合支架置入治疗反流性狭窄组的疗效、通畅率显著低于其他病因的食管狭窄。 3、介入治疗联合腹腔镜下抗反流手术治疗反流性食管狭窄是安全、有效的方法，无严重并发症的发生，而且有效率和食管通畅率显著高于单独介入手术。解除食管狭窄的同时，抗反流手术修复抗返流屏障、从根本上治疗病因是可靠的、可供选择的方法。收起

关键词 : 食管良性狭窄介入手术抗反流手术球囊导管支架置入疗效评价

[学位论文] 岳永强郑州大学 2018年博士导师: 汪忠镐共102页

摘要 : 目的: 探讨血管紧张素Ⅱ1型受体相关蛋白(AngtiotensinⅡtype1receptor associated protein，ATRAP)对体外培养的血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscular cell，VSMC)凋亡的影响及相关机制;腺病毒过表达的ATRAP对颈动脉球囊损伤引起的内膜增生... 展开目的: 探讨血管紧张素Ⅱ1型受体相关蛋白(AngtiotensinⅡtype1receptor associated protein，ATRAP)对体外培养的血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscular cell，VSMC)凋亡的影响及相关机制;腺病毒过表达的ATRAP对颈动脉球囊损伤引起的内膜增生的作用。从而丰富ATRAP抑制颈动脉内膜增生的作用机制，并为临床治疗颈动脉术后再狭窄提供新的治疗方向。方法: 体外实验: 1 VSMC的获得、培养与鉴定 VSMC购自广州吉妮欧生物科技有限公司。取自大鼠胸主动脉段组织，酶消化法获得。在添加10％胎牛血清(FBS)的DMEM的培养基中常规培养，在leica倒置显微镜下观察细胞生长状态、汇合度等;用α-SM-actin鉴定VSMC细胞表型。 2 TUNEL检测腺病毒过表达的ATRAP对VSMC凋亡的影响 2.1 构建ATRAP过表达腺病毒与对照病毒由汉恒生物科技（上海）有限公司构建ATRAP的腺病毒过表达载体并提供对照腺病毒。 2.2 TUNEL测定ATRAP过表达对VSMC凋亡的影响 VSMC培养至5-7代，汇合度达90％，胰酶消化后，接种至96孔板(1x105cells/ml)，汇合度达50-70％时，转染Adv.ATRAP或Adv.GFP，24小时后更换为在添加0.1％FBS的高糖DMEM培养基中培养24小时以获得同步化，添加或不添加AngⅡ(100nM)继续培养24h，用原位末端转移酶标记技术(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling assay;TUNEL assay)测定VSMC凋亡的改变，在leica活细胞工作站测定细胞凋亡的比例。 2.3 总RNA提取及荧光定量PCR测定凋亡相关基因mRNA表达的改变 VSMC接种于6孔板，余处理同前述。用RNAiso plus试剂盒提取VSMC的总RNA，按照PrimeScriptMRT Master Mix反转录试剂盒说明书反转录cDNA，并在Applied Biosystems QuantStudio(R)6Flex上进行荧光定量PCR测定凋亡相关基因的mRNA表达改变。 2.4 Westernblot检测ATRAP及凋亡相关蛋白的表达 RIPA和PI(20∶1)提取VSMC总蛋白，并用western blot检测ATRAP及凋亡相关蛋白（caspase3，caspase8，caspase9，bcl-2，bax等）的表达改变。 3 ATRAP干扰对VSMC凋亡的影响 3.1 ATRAP siRNA及阴性对照的构建由上海吉玛制药技术有限公司合成ATRAP siRNA并提供阴性对照。 3.2 ATRAP siRNA干扰序列干扰效率的鉴定 VSMC接种于6孔板，汇合度达70-90％时，用LipofectamineTM RNAiMAX Transfection Reagent(InvitrogenTM)转染ATRAP siRNA及阴性对照至培养基，48小时后用Trizol法提取总RNA，应用荧光定量PCR方法检测各组干扰序列对ATRAP的干扰效率。 3.3 western blot检测ATRAP干扰对凋亡相关基因蛋白表达的改变细胞处理同上，提取细胞总蛋白，利用western blot技术测定ATRAP、GFP、cleaved-cas8、cleaved-cas-3、bel-2、bax等的改变，以GAPDH作为内参。 4 westen blot检测过表达的ATRAP对VSMC凋亡影响的机制研究 5 观察腺病毒转染的ATRAP对大鼠颈动脉球囊损伤引起的内膜增生的作用 6 腺病毒转染的ATRAP对大鼠颈动脉球囊损伤处VSMC凋亡的影响 Tunel/DAPI免疫荧光染色测定大鼠颈动脉球囊损伤处细胞凋亡的改变。结果: 1 VSMC的获得、培养与鉴定倒置荧光纤维镜下可见细胞贴壁生长，单个细胞呈细长梭形，细胞生长致密处细胞平行排列成束，典型的“峰谷状”生长。用α-SM-actin染色后，通过倒置荧光显微镜观察，血管平滑肌细胞呈绿色荧光。 2 腺病毒过表达的ATRAP促进离体的大鼠VSMC凋亡 2.1 细胞处理腺病毒转染ATRAP至培养的VSMC24小时，更换0.1％FBS的DMEM培养基并加入AngⅡ继续培养24小时后进行TUNEL染色发现，过表达的ATARP促进离体的VSMC凋亡，且与AngⅡ刺激没有明显的相关性。AngⅡ组:Adv.ATRAP组相比Adv.GFP组，VSMC凋亡率增高（11.50±1.66％比1.13±0.27％，P＜0.05）;无AngⅡ组:Adv.ATRAP组相比Adv.GFP组，VSMC凋亡率增高(13.17±0.48％比1.20±0.17％，P＜0.05)。 2.2 荧光定量PCR结果检测ATRAP及凋亡相关基因mRNA的表达结果显示，ATRAP过表达引起促凋亡基因bax表达明显上调，抑制凋亡基因bcl-2表达下调。 2.3 Western blot检测ATRAP及凋亡相关蛋白的表达 western blot结果显示，ATRAP与GFP未形成融合蛋白，cleaved-caspase8，cleaved-caspase3，bax蛋白表达增加，bcl-2蛋白表达减低，而cleaved-caspase-9表达没有明显改变，表明ATRAP过表达可诱导VSMC促凋亡蛋白表达增加，且主要是通过死亡受体途径（外源性途径）促进VSMC凋亡。 3 ATRAP干扰对VSMC凋亡的影响 3.1 荧光定量PCR鉴定ATRAP干扰序列的干扰效果结果显示，325干扰序列组对ATRAP干扰效率高于其他两组，因此选用325干扰序列进行后续实验。 3.2 westen blot检测凋亡相关蛋白的改变 western blot结果显示，ATRAP干扰后，cleaved-caspase8，cleaved-caspase3，bax蛋白表达减低，bcl-2蛋白表达增高，表明ATRAP沉默后可抑制VSMC凋亡。 4 过表达的ATRAP促进VSMC凋亡的机制研究 4.1 ATRAP抑制AngⅡ刺激引起的Akt磷酸化在多个时间点(30min、45min、60min、2h、4h)，Adv.ATRAP组相比Adv.GFP组，p-Akt蛋白表达明显减低（PD＜0.05），说明在VSMC中，ATRAP过表达抑制AngⅡ刺激引起的Akt磷酸化。 4.2 PTEN抑制剂可逆转ATRAP对AngⅡ刺激引起的Akt磷酸化的抑制作用在多个时间点(30min、45min、60min、2h、4h)，Adv.ATRAP+bpv组相比Adv.ATRAP组，p-Akt蛋白表达明显增高（P＜0.05)，说明在VSMC中，PTEN抑制剂可逆转ATRAP过表达对AngⅡ刺激引起的Akt磷酸化的抑制。 4.3 PTEN抑制剂可逆转ATRAP对VSMC凋亡的促进作用 TUNEL结果显示，Adv.ATRAP+bpv组相比Adv.ATRAP组，VSMC凋亡明显减少，而与AngⅡ存在无明显相关（Adv.ATRAP+AngⅡ组相比Adv.ATRAP+AngⅡ+bpv组，11.50±1.66％比1.81±0.19％，P＜0.05;Adv.ATRAP相比Adv.ATRAP+bpv组，13.17±0.48％比1.45±0.15％，P＜0.05）;mRNA及蛋白表达也支持PTEN抑制剂逆转ATRAP对VSMC凋亡的促进作用。体内实验 5 腺病毒转染的ATRAP抑制大鼠颈动脉球囊损伤引起的内膜增生在球囊损伤并腺病毒孵育后3天，Adv.ATRAP转染组相比Adv.GFP转染组，大鼠左颈总动脉内膜增生没有明显差异;而在球囊损伤并腺病毒孵育后7天、14天后，Adv.ATRAP组相比Adv.GFP转染组，内膜面积及内膜中膜比(I/M)明显减少(P＜0.05)。 6 腺病毒转染的ATRAP促进大鼠颈动脉球囊损伤处VSMC的凋亡 TUNEL/DAPI免疫荧光染色结果表明，在球囊损伤并腺病毒孵育后3天，Adv.ATRAP转染组相比Adv.GFP转染组，大鼠左颈总动脉内膜处细胞凋亡没有明显差异;而在球囊损伤并腺病毒孵育后7天、14天后，Adv.ATRAP组相比Adv.GFP转染组，内膜处细胞凋亡率明显增高(P＜0.05)。结论: 1 腺病毒过表达ATRAP促进离体大鼠VSMC的凋亡 2 腺病毒过表达的ATRAP抑制AngⅡ刺激引起的Akt磷酸化 3 PTEN抑制剂显著抑制了ATRAP过表达诱导的离体大鼠VSMC的凋亡 4 PTEN抑制剂可逆转ATRAP过表达对AngⅡ刺激引起的Akt磷酸化的抑制 5 siRNA干扰ATRAP抑制VSMC凋亡 6 过表达ATRAP显著抑制大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜的形成 7 过表达ATRAP促进大鼠颈动脉球囊损伤处的细胞凋亡。收起

关键词 : 颈动脉内膜增生血管紧张素Ⅱ1型受体相关蛋白血管平滑肌细胞细胞凋亡抑制机制

4. 小口径组织工程血管体外构建的实验研究

[学位论文] 李春民首都医科大学 2009年博士导师: 汪忠镐共90页

摘要 : 目的：探讨间充质干细胞做为种子细胞，体外诱导为血管细胞，在生物反应器内种植于可降解材料支架上，进行组织工程化血管构建的可行性。方法： 1.分离犬骨髓间充质干细胞做为种子细胞，体外应用EBM—2培养基和平滑肌细胞专用培养基(含有P... 展开

关键词 : 血管体外构建间充质干细胞种子细胞生物反应器平滑肌细胞

5. 肾动脉成形支架植入术治疗动脉硬化性肾动脉狭窄的临床研究

[学位论文] 廖传军首都医科大学 2012年博士导师: 汪忠镐共70页

摘要 : 目的:肾动脉成形支架植入术一直被认为是治疗动脉硬化性肾动脉狭窄的一种有效方法,但是其适应症及疗效却一直饱受争议,本研究的目的就是探讨肾动脉成形支架植入术在治疗动脉硬化性肾动脉狭窄中的具体作用。方法:回顾性的分析首都医科大学附属北... 展开

关键词 : 肾动脉狭窄肾动脉成形术支架植入术肾血管性高血压肾小球滤过率

6. 近端锁骨下动脉阻塞血管腔内治疗的长期结果

[学位论文] 王克勤首都医科大学 2010年博士导师: 汪忠镐共60页

摘要 : 目的:血管腔内治疗是治疗锁骨下动脉局限性阻塞的方法之一。本文对59例行血管腔内治疗的病人长期疗效进行报道。材料与方法:在1998年6月到2008年9月,我们对59例病人的61条阻塞的锁骨下动脉进行血管腔内治疗(46个男性、13个女性,34—82岁,平均年... 展开

关键词 : 锁骨下动脉窃血综合征动脉闭塞性病变基底动脉供血不足管腔内治疗

7. 食管裂孔疝与呼吸道症状临床相关性研究

[学位论文] 李治仝首都医科大学　 2012年硕士导师: 汪忠镐共35页

摘要 : 目的：食管裂孔疝(hiatalhernia,,HH)与反流性食管炎常共存,胃食管反流病(Gastroesophagealrefluxdisease,GERD)能引起呼吸道症状。在我们治疗反流引起的呼吸道症状时,也发现HH的存在,但不确定HH与呼吸道症状是否有关。本研究通过对HH患者回顾性研究... 展开目的：食管裂孔疝(hiatalhernia,,HH)与反流性食管炎常共存,胃食管反流病(Gastroesophagealrefluxdisease,GERD)能引起呼吸道症状。在我们治疗反流引起的呼吸道症状时,也发现HH的存在,但不确定HH与呼吸道症状是否有关。本研究通过对HH患者回顾性研究,验证HH与呼吸道症状有无相关性。方法：从2009年1月至12月在胃食管反流中心收集GERD住院患者,把其中HH患者依其有无呼吸道症状,分为呼吸道症状组(A组)和无呼吸道症状组(B组);无HH患者根据有无呼吸道症状,又分为呼吸道症状组(C组)和无呼吸道症状组(D组),分别对其性别、年龄、有无吸烟史、临床症状及诊治进行临床分析。把易诱发呼吸道症状的其他相关因素考虑在内。结果：在362例GERD中196例有HH(54.1%),男性110例,女性86例。A组132例,主要表现为喘息、憋气、胸闷、咳嗽等;B组64例,主要表现为反酸、烧心、胸痛、口苫、咽干等。C组78例,D组88例。对四组进行分析,发现HH与呼吸道症状有相关性(x2=15.3,P＜0.05)。进一步多变量分析研究显示HH能增加呼吸道症状的风险(优势比OR值2.3,95%可信区间CI1.5-3.6)。然后178例HH行胃底折叠术并裂孔疝修补术,7例行胃底折叠术,11例保守治疗。术后60例出现吞咽困难,33例腹胀,10例腹泻,对症治疗一段时间均好转。随访到168例裂孔疝修补术后患者,平均随访12.3±3.3个月,症状基本痊愈45例(26.8%),效果好63例(37.5%),效果一般35例(20.8%),无效25例(14.9%),总有效率85.1%。结论： HH发病隐匿,由于其独特的形成因素,使其不仅易致GERD,也能增加呼吸道症状的风险。通过有效的诊断并积极治疗HH,能显著减轻反流及其引起的呼吸道症状。腹腔镜胃底折叠并裂孔疝修补术治疗HH具有微创、安全及有效特点,对于难治性哮喘并有HH患者,效果满意。收起

关键词 : 食管裂孔疝胃食管反流病呼吸道症状胃底折叠术疝修补术

8. 1014例胃食管反流病入院患者的诊治分析

[学位论文] 宁雅婵首都医科大学 2011年硕士导师: 汪忠镐共35页

摘要 : 目的：探讨胃食管反流病(gastroesophageal reflux disease,GERD)的临床特点,分析误诊情况,总结微创治疗方法及评估疗效。方法：收集解放军第二炮兵总医院胃食管反流病中心从2006年10月至2009年11月入院诊治的1014例GERD患者临床资料,对患者性别... 展开

关键词 : 胃食管反流病微创治疗胃底折叠术疗效评估