中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

[学位论文] 张义侠中国医科大学 2008年博士导师: 张海鹏共71页

摘要 : 目的：肾透明细胞癌(renal Clear cell carcinoma，RCCC)是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，是泌尿外科临床上的主要病种之一。近几年研究表明肾癌(Renal cellcarcinoma，RCC)是多基因相关肿瘤，发病机制复杂，病程发生发展的分子生物学基础至今不明... 展开目的：肾透明细胞癌(renal Clear cell carcinoma，RCCC)是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，是泌尿外科临床上的主要病种之一。近几年研究表明肾癌(Renal cellcarcinoma，RCC)是多基因相关肿瘤，发病机制复杂，病程发生发展的分子生物学基础至今不明。趋化因子受体是一类介导趋化因子行使功能的GTP-蛋白偶联的跨膜受体，研究表明趋化因子及其受体在多种肿瘤的发生、生长和转移过程中发挥重要作用。趋化因子受体与很多细胞因子相互作用或受其调控。CXC类趋化因子受体4(chemokine CXC receptor 4，CXCR4)是研究最多的趋化因子受体之一，现有的研究表明CXCR4与肿瘤的发生、发展、浸润和转移关系密切，在很多肿瘤组织及细胞系中有高表达，而且可能受肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α，TNF-α)等细胞因子调节；而CCR类趋化因子受体3(chemokine CCR receptor3，CCR3)与肿瘤的发生、发展、浸润和转移关系的研究很少，而且是否和TNF有关还不清楚。有文献报道CXCR4和CCR3参与肾透明细胞癌的发病，但是机制不清楚；TNF-α与CXCR4和CCR3在肾癌中的相互作用也不明了。本实验旨在探讨CXCR4和CCR3在肾透明细胞癌中的表达情况；并通过TNF-α在肾透明细胞癌细胞系中对CXCR4和CCR3表达调节的研究，阐明CXCR4和CCR3在肾透明细胞癌发生、发展及侵袭中的作用及其与TNF-α之间的相互关系。为将来肾透明细胞癌的防治提供新的线索。方法： 1、本实验选取从2001～2007年中国医科大学附属第一医院泌尿外科手术切除的肾透明细胞癌标本51例。取18例癌旁正常肾组织标本作对照。所有标本均经福尔马林固定，石蜡包埋，4μm厚连续切片，应用免疫组织化学方法(S-P法)检测CXCR4和CCR3在肾透明细胞癌组织及癌旁正常肾组织中的表达情况；并与肾透明细胞癌患者的临床特征及TNM分期(TNM分期按照UICC标准)进行相关性分析。免疫组化结果判定： CXCR4和CCR3表达于细胞内，呈现棕色颗粒为阳性。每张切片随机选取5个高倍视野，每个视野计数100个细胞，计算阳性细胞的百分数。“-”：细胞没染色；“+”：<1％细胞染色；“++”：1-10％细胞染色；“+++”：10-50％细胞染色；“++++”： >50％细胞染色。 2、以人肾透明细胞癌细胞系A498和786-0为研究对象，应用RT-PCR方法检测肾透明细胞癌细胞系中趋化因子受体CXCR4和CCR3在mRNA水平的表达情况；应用Western blot方法检测肾透明细胞癌细胞系中趋化因子受体CXCR4和CCR3在蛋白水平的表达情况。 3、肾透明细胞癌细胞系中内源性TNF-α的检测：采用Real Time PCR检测肾透明细胞癌细胞系A498和786-0的TNF-α mRNA含量。采用ELISA法检测细胞系A498和786-0培养上清中TNF-α的蛋白含量。 4、内源性TNF-α与肾透明细胞癌细胞系中CXCR4和CCR3的相互作用：应用Real Time PCR法检测细胞系A498和786-0中TNF-α mRNA及CXCR4和CCR3mRNA量。采用抗TNF-α中和性抗体处理肾透明细胞癌细胞系A498，分别于处理后3、6、12、24和48小时，采用Real Time PCR检测细胞系CXCR4和CCR3mRNA表达情况，以未经处理的细胞系作为对照。 5、外源性TNF-α对肾透明细胞癌细胞系786-0中CXCR4和CCR3 mRNA表达的诱导作用：分别采用1ng/ml、10ng/ml和100ng/ml TNF-α作用肾透明细胞癌细胞系786-0，分别在1、3、6、12和24小时后，采用Real Time PCR检测细胞系中CXCR4和CCR3 mRNA表达情况，以未经处理的细胞系作为对照。 6、统计学分析：所有资料采用SPSS统计软件进行分析。P<0.05为有统计学差异。结果： 1、免疫组化结果表明：在肾透明细胞癌组织CXCR4和CCR3呈高表达；正常肾组织中的不表达； CXCR4和CCR3表达与肾透明细胞癌患者年龄、性别及肿瘤大小均无相关性，而与肿瘤TNM分期具有关(P<0.05)。 2、RT-PCR结果：应用RT-PCR方法检测肾透明细胞癌细胞系中CXCR4和CCR3在mRNA水平的表达情况，CXCR4和CCR3在两个肾透明细胞癌细胞系A498和786-0中mRNA水平表达程度有差异， CXCR4和CCR3mRNA在A498中表达显著，而在786-0中表达较弱。 3、Western blot结果：以人肾透明细胞癌细胞系A498和786-0为研究对象，应用Westernblot方法检测肾透明细胞癌细胞系中CXCR4和CCR3在蛋白水平的表达情况，CXCR4和CCR3在两个肾透明细胞癌细胞系A498和786-0中表达程度有差异，CXCR4和CCR3在A498中表达显著，而在786-0中表达较弱。 4、肾透明细胞癌细胞系中内源性TNF-α的表达：采用Real Time PCR检测肾透明细胞癌细胞系A498和786-0的TNF-αmRNA含量。结果显示A498表达高水平的TNF-αmRNA，而786-0表达低水平的TNF-α mRNA，两者相差9.3倍(P<0.01)。采用ELISA法检测A498和786-0培养上清中TNF-α的蛋白含量：A498培养上清中的TNF-α含量显著高于786-0(P<0.01)。TNF-αmRNA表达水平和TNF-α蛋白含量相一致。 5、内源性TNF-α与肾透明细胞癌细胞系中CXCR4和CCR3的相互作用：采用抗TNF-α中和性抗体处理肾透明细胞癌细胞系A498，分别于3、6、12、24和48小时后，采用Real Time PCR检测细胞系CXCR4和CCR3 mRNA表达情况，以未经处理的A498细胞作为对照。结果显示：经抗TNF-α抗体处理后，A498细胞系中CXCR4和CCR3 mRNA表达水平均较处理前降低，6小时、12小时及24小时与对照比较有明显降低(P<0.05)，其中12小时后降低最为显著，分别降至处理前的30.4％和41.7％(P<0.01)。 6、外源性TNF-α对肾透明细胞癌细胞系CXCR4和CCR3 mRNA表达的调节：分别采用1ng/ml、10ng/ml和100ng/ml TNF-α作用肾透明细胞癌细胞系786-0，未经TNF-α作用的肾透明细胞癌细胞系786-0作为对照，分别在1、3、6、12和24小时后，采用Real Time PCR检测CXCR4和CCR3 mRNA表达情况。结果显示在上述浓度的TNF-α作用下，肾透明细胞癌细胞系786-0中CXCR4和CCR3mRNA表达均出现不同程度上调(P<0.05)，其中在10ng/ml TNF-α作用下增加最为显著(P<0.01)。同时结果显示：CXCR4 mRNA和CCR3 mRNA表达在TNF-α作用6小时后增加最为显著。在10ng/mlTNF-α作用6小时后，CXCR4 mRNA和CCR3 mRNA表达分别增加了21.7倍和16.4倍(P<0.01)。结论： 1、证明了CXCR4和CCR3在肾透明细胞癌组织中过度表达；CXCR4和CCR3在肾透明细胞癌细胞系中有表达，提示CXCR4和CCR3参与了肾透明细胞癌发病：肾透明细胞癌组织中CXCR4和CCR3的表达与TNM分期密切相关。 2、证明了CXCR4和CCR3mRNA和蛋白在肾透明细胞癌细胞系A498中表达显著，在786-0中的表达弱；提示肾透明细胞癌细胞系A498的侵袭力可能比细胞系786-0的侵袭力强;CXCR4和CCR3的表达可能与肾透明细胞癌细胞系的侵袭力密切相关。 3、肾透明细胞癌细胞系A498和786-0细胞本身能分泌产生内源性TNF-α，其中A498自主分泌内源性TNF-α的能力强于786-0；提示细胞系A498的侵袭力可能高于细胞系786-0，肾透明细胞癌细胞系分泌内源性TNF-α的能力可能与肾透明细胞癌细胞系的侵袭力有关。 4、内源性及外源性TNF-α均可以上调肾透明细胞癌细胞系786-0中CXCR4和CCR3的表达，从而增加细胞系的侵袭力。收起

关键词 : 肾透明细胞癌表达

2. 凋亡抑制基因BCL-2蛋白产物在肾透明细胞癌中的表达

[学位论文] 陈海文西安交通大学 1996年硕士导师: 石涛;万恒麟共49页

摘要 : 该文用单克隆抗体,通过免疫组化方法研究了BCL-2癌蛋白在30例正常肾组织和39例肾透明细胞癌石蜡标本中的表达.发现在正常成人肾组织中有少量BCL-2蛋白表达,在肾癌中BCL-2蛋白表达较正常组织高.正常肾组织与肾癌中BCL-2表达率分别为13%(4/30)与44%(17/... 展开

关键词 : BCL-2 肾脏透明细胞癌

3. 基于尿液外泌体筛选肾透明细胞癌发生、发展相关miRNAs及miR-188-5p在肾透明细胞癌中的作用及其机制的研究

[学位论文] 李浩然南方医科大学 2020年博士导师: 谭万龙共128页

摘要 : 目的: 以尿液外泌体miRNAs为基础筛选与肾透明细胞癌发生、发展相关miRNAs;研究miR-188-5p在肾癌细胞中的作用和机制。研究方法与结果: 1尿液外泌体的分离、纯化及鉴定采用超速离心法，得到肾透明细胞癌患者及正常人的尿液外泌... 展开目的: 以尿液外泌体miRNAs为基础筛选与肾透明细胞癌发生、发展相关miRNAs;研究miR-188-5p在肾癌细胞中的作用和机制。研究方法与结果: 1尿液外泌体的分离、纯化及鉴定采用超速离心法，得到肾透明细胞癌患者及正常人的尿液外泌体;依临床资料进行匹配，分为肾透明细胞癌有血管侵犯组、无血管侵犯组和正常个体组。 2筛选与肾透明细胞癌发生相关的miRNAs 通过尿液外泌体miRNA测序，筛选出无血管侵犯组vs正常个体组间明显差异表达的miRNAs。随后通过单因素Logistics回归筛选出与肾透明细胞癌发生相关的miRNAs;通过Lasso回归、多因素Logistics回归建立预测肾透明细胞癌发生的模型，其预测效能优秀且能独立于临床资料进行预测;通过生物学富集分析，发现这些miRNA可能与泛素化依赖的蛋白分解等相关通路有关。 3筛选与肾透明细胞癌的发展相关的miRNAs 通过尿液外泌体miRNA测序，筛选出有血管侵犯组vs无血管侵犯组间明显差异表达的miRNAs。随后通过单因素COX回归筛选出与肾透明细胞癌预后相关的miRNAs;通过Lasso回归、多因素COX回归建立预测肾透明细胞癌预后的模型，其预测效能良好且能独立于临床资料进行预测;通过生物学富集分析，发现这些miRNA可能与泛素和泛素样蛋白的连接、激活和转运等通路有关。 4miR-188-5p在肾透明细胞癌发生和发展作用的分析 miR-188-5p与肾透明细胞癌的发生、发展均相关，基于TCGA数据库分析发现miR-188-5p与肾透明细胞癌更高的肿瘤分期、肿瘤级别和不良预后相关。随后通过单因素Logistics回归和单因素COX回归筛选出miR-188-5p在肾透明细胞癌发生和发展过程中的可能靶基因，生物学富集分析发现这些基因可能与细胞运动、免疫细胞调控和凋亡、泌尿生殖系统发育、突触的结构与活性等通路有关;同时，我们发现PTEN可能是miR-188-5p的核心靶基因，它们之间可能存在两个相互结合的靶点。 5miR-188-5p在肾透明细胞癌中的作用及机制通过体外实验证明，与786-O相比，miR-188-5p在恶性程度更高的肾癌细胞系CAKI-1中表达量更高。miR-188-5p异位表达可抑制PTEN的表达，而促进PI3K/AKT相关蛋白的磷酸化增多，进而促进肾癌细胞的增殖、迁移和侵袭;miR-188-5p的抑制则具有相反作用。结论: 1.基于尿液外泌体筛选出在肾透明细胞癌无血管侵犯组vs正常个体组间差异表达的miRNAs，它们在预测肾透明细胞癌发生风险具有良好效能，且可能与泛素化依赖的蛋白分解等通路有关; 2.基于尿液外泌体筛选出在有血管侵犯组vs无血管侵犯组间差异表达的miRNAs，它们在预测肾透明细胞癌预后和发展方面具有良好效能，且可能与泛素和泛素样蛋白的连接、激活和转运等通路有关; 3.miR-188-5p与肾透明细胞癌发生和发展相关，并可能通过调控免疫细胞、细胞运动、泌尿生殖系统发育等相关通路发挥作用; 4.miR-188-5p通过调控PTEN/PI3K/AKT信号轴促进肾透明细胞癌的增殖、迁移和侵袭。收起

关键词 : 肾透明细胞癌外泌体 miRNA

4. Survivin和PTEN在肾透明细胞癌中的表达及临床意义

[学位论文] 高嵩岚中国医科大学 2008年硕士导师: 吴斌共41页

摘要 : 前言: 在泌尿生殖系统肿瘤中，肾脏肿瘤发病率仅次于膀胱肿瘤，占全身肿瘤的0.4％～3％。肾癌细胞类型主要有透明细胞癌(RCCC)、颗粒细胞癌和未分化癌，其中RCCC占60％～85％。因此，对RCCC相关基因的研究对探讨其发病机制及诊断标准、对肾癌的治... 展开前言: 在泌尿生殖系统肿瘤中，肾脏肿瘤发病率仅次于膀胱肿瘤，占全身肿瘤的0.4％～3％。肾癌细胞类型主要有透明细胞癌(RCCC)、颗粒细胞癌和未分化癌，其中RCCC占60％～85％。因此，对RCCC相关基因的研究对探讨其发病机制及诊断标准、对肾癌的治疗具有极其重要的意义。 Survivin是凋亡抑制蛋白家族(IAPs)中结构独特的新成员，于1997年由耶鲁大学的Altieri等用效应细胞蛋白酶受体-1(EPR-1)cDNA在人类基因组库的杂交筛选中首先分离出来。多方面的研究提示，Survivin可引起肿瘤细胞凋亡的丧失，与肿瘤的发生密切相关，且其表达往往与肿瘤的恶性程度、预后不良呈正相关。PTEN基因是迄今为止发现的第一个具有双特异磷酸酶活性的抑癌基因，于1997年被3个研究小组分别发现并命名，即“与张力蛋白和辅助蛋白同源、第10染色体丢失的磷酸酶基因”，它不仅表现出抑癌基因的特性，而且还具有磷酸酶活性，在调节细胞的增殖和死亡、细胞的转移和黏连等方面起着重要的作用。有研究表明，PTEN基因在肿瘤的形成过程中有重要作用，与肿瘤生长及发展关系密切。PTEN基因作为一种新的抑癌基因，调控细胞的生长发育和细胞的凋亡，影响肿瘤细胞的浸润、转移和骨架蛋白的组装，对细胞的信号转导和其他生物过程有着重要作用。探讨PTEN和Survivin在RCCC中的表达及二者之间的相互关系，为研究RCCC的发病机制和诊断提供理论基础，并可以初步探讨其在RCCC预后评估中的意义。目的: 本研究通过检测RCCC中Survivin和PTEN的表达，评价Survivin和PTEN在RCCC发生发展中的作用及其与RCCC患者的临床病理因素之间的关系，希望能够有助于揭示Survivin和PTEN在RCCC进展中的作用，有助于对临床上预防和控制RCCC的发生和发展及预后提供理论依据。实验材料与方法: 1、材料取2005年至2006年于中国医科大学附属盛京医院手术切除并且经过病理诊断的89例RCCC组织石蜡标本。 2、方法采用标准免疫组织化学染色(SP)方法：石蜡标本常规脱蜡，切片，水化，组织抗原修复，用兔抗人PTEN特异性抗体、兔抗人Survivin特异性抗体孵育，链酶素抗生物素一过氧化氢酶连接法(SP)试剂盒染色，DAB显色分别检测PTEN、Survivin的表达情况。 3、相关性分析应用SPSS13.0统计软件进行数据处理，对Survivin与PTEN在RCCC的表达及其与各临床病理因素之间的关系进行分析。结果: Survivin染色大多定位于细胞浆，部分定位于细胞核，细胞膜无表达。在89例RCCC中，Survivin阳性表达59例(66.3％)；10例正常肾组织及18例癌旁组织中，Survivin均无阳性表达，两者差异具有显著性意义。 PTEN染色大多定位于细胞浆，极少数定位于细胞膜，细胞核无表达。89例RCCC中，PTEN阳性表达40例(44.9％)；10例正常肾组织及18例癌旁组织中，PTEN阳性表达阳性率分别为100％和88.9％，显著高于RCCC组织，两者差异具有显著性意义。 Survivin和PTEN的表达与患者年龄、性别和肿瘤大小无显著相关。与临床分期有关。而PTEN在Ⅰ～Ⅱ期RCCC中的表达明显高于Ⅲ～Ⅳ期，在无淋巴结转移的组织中的表达明显高于有淋巴结转移的组织；Survivin在Ⅰ～Ⅱ期RCCC中的表达明显低于Ⅲ～Ⅳ期，在无淋巴结转移的组织中的表达明显低于有淋巴结转移的组织。在RCCC中Survivin和PTEN表达呈负相关。结论: 1、Survivin的异常表达与RCCC的发生发展密切相关，其在RCCC中的高表达与肿瘤的恶性程度密切相关，Survivin可能是影响RCCC预后的重要分子指标。 2、PTEN表达的降低与RCCC的分化程度、临床分期及转移密切相关，提示抑癌基因PTEN可能在RCCC的发生、发展中起重要作用。对其蛋白的检测可作为判定RCCC发生及侵袭转移能力的一项客观指标。 3、RCCC中Survivin与PTEN蛋白表达呈明显负相关，二者表达的失调可能是RCCC发生发展的机制之一。收起

关键词 : Survivin PTEN 肾透明细胞癌表达

5. 基于缺氧相关lncRNAs的肾透明细胞癌预后模型构建及分子机制研究

[学位论文] 张寒 2022年博士导师: 甘华共104页

摘要 : 第一部分肾透明细胞癌缺氧相关lncRNAs的筛选及预后模型构建目的：缺氧是肾透明细胞癌的一个重要临床特征，并调节各种肿瘤发生发展过程。越来越多的证据表明，长非编码RNA（longnon-codingRNAs,lncRNAs）与肾透明细胞癌患者的生存结果密... 展开第一部分肾透明细胞癌缺氧相关lncRNAs的筛选及预后模型构建目的：缺氧是肾透明细胞癌的一个重要临床特征，并调节各种肿瘤发生发展过程。越来越多的证据表明，长非编码RNA（longnon-codingRNAs,lncRNAs）与肾透明细胞癌患者的生存结果密切相关，并调节缺氧诱导肿瘤的过程。因此，本研究旨在通过分析癌症基因组图谱数据库（TheCancerGenomeAtlasdatabase，TCGA），筛选与肾透明细胞癌患者总生存期紧密关联的缺氧相关lncRNA分子,从而建立预后评估模型，用于预测肾透明细胞癌患者的生存结果。方法： 1.肾透明细胞癌缺氧相关lncRNA分子筛选。从TCGA数据库下载肾透明细胞癌转录组数据，进一步分析提取出蛋白编码基因及lncRNA，以正常肾组织样本为对照，提取肾透明细胞癌中差异化表达的lncRNA进行后续分析。从分子特征数据库（theMolecularSignaturesDatabase）下载缺氧相关基因。对肾透明细胞癌样本中差异表达的lncRNA和缺氧相关基因进行共表达分析，以确定缺氧相关lncRNA。 2.肾透明细胞癌缺氧相关lncRNA预后模型构建。从TCGA下载肾透明细胞癌患者临床信息，将其随机分为一个训练集和三个验证集。在训练集中，将缺氧相关lncRNA纳入单因素和多因素Cox比例风险回归模型，以选择最佳lncRNA分子来构建用于预测肾透明细胞癌预后的缺氧相关lncRNA模型： Riskscore(patient)=nΣk=1(coef×exp) 3.缺氧相关lncRNA模型验证。在验证集中，应用构建的lncRNA预后评估模型计算每个样本的风险值，根据中位风险值分为高低风险两组，通过绘制ROC曲线、Kaplan-Meier生存曲线评估预后预测价值。 4.缺氧相关lncRNA模型临床应用探索。对风险值与肿瘤分期、分级进行相关性分析；将风险值、患者临床生物学特征共同纳入进行独立预后分析，筛选出影响肾透明细胞癌患者总生存期的独立预后因素，并构建列线图；分析患者风险值与肿瘤免疫微环境的关系。结果： 1.从TCGA数据库筛选出14143个在肾透明细胞癌组织中差异化表达的lncRNA。从分子特征数据库筛选出137个缺氧相关基因。差异化表达lncRNA与缺氧相关基因进行共表达分析，共获取598个缺氧相关lncRNA（HRL）。 2.将肾透明细胞癌患者按照1:1的比例随机分为训练集（n=255）和第一验证集（n=252），再按照3:7的比例随机分为第二验证集（n=153）和第三验证集（n=354）。在训练集中，将598个HRL与预后进行相关性分析，筛选出163个预后相关HRL。经Lasso回归筛选变量后纳入多因素COX比例风险回归模型，构建包含9个缺氧相关lncRNAs（ITPR1-DT，AC008760.2，AC084876.1，AC002070.1，LINC02027，AC147651.1，FOXD2-AS1，LINC00944，LINC01615）的预后预测模型。 3.在训练集中，应用本模型计算每个样本风险值，取中位风险值为最佳临界值，从而划分为高低风险两组。在预测肾透明细胞癌患者总生存期方面表现良好，验证集验证结果一致。 4.该模型与肿瘤分级、分期以及肿瘤免疫浸润有关，且模型计算风险值、患者年龄、肿瘤分期、分级为肾透明细胞癌患者独立预后因素，用于构建列线图，可有效判断1、2、3年生存率。结论：本研究结果表明缺氧相关lncRNA评估模型可有助于预测肾透明细胞癌预后。此外，该模型中的lncRNA可能是研究肾透明细胞癌发生发展和设计个体化治疗策略的有效靶点。第二部分缺氧相关lncRNAFOXD2-AS1参与肾透明细胞癌增殖侵袭的相关分子机制研究目的：基于第一部分肾透明细胞癌中缺氧相关lncRNA分子筛选及其预后模型的构建，我们进一步对模型中纳入的lncRNA分子功能及作用机制进行了进一步探索，重点探讨FOXD2-AS1在肾透明细胞癌增殖的功能及分子生物学机制。方法： 1.首先运用GEPIA软件预测FOXD2-AS1在肾透明细胞癌组织及正常肾脏组织中是否存在差异化表达，以及其表达量与生存的关系。 2.观察FOXD2-AS1在肾透明细胞癌细胞系中差异化表达及生物学行为。采用逆转录-实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测FOXD2-AS1在肾透明细胞癌细胞系中的表达情况。慢病毒转染肾透明细胞癌细胞构建FOXD2-AS1干扰和过表达稳定转染细胞株，行CCK-8、EDU、平板克隆、transwell迁移及侵袭等体外细胞实验探索FOXD2-AS1的表达对肾透明细胞癌细胞增殖、迁移、侵袭功能的影响。皮下注射干扰FOXD2-AS1肾透明细胞癌细胞及对照肾透明细胞癌细胞，体内动物实验构建裸鼠皮下成瘤模型，测量肿瘤体积及生存曲线，探索FOXD2-AS1的表达对肾透明细胞癌细胞增殖功能的影响。 3.探索FOXD2-AS1调控肾透明细胞癌增殖的分子生物学机制。筛选FOXD2-AS1下游微小RNA206（microRNA206，miR-206），构建FOXD2-AS1干扰和过表达稳定转染细胞株，通过双荧光素酶实验验证FOXD2-AS1与miR-206的竞争性结合关系。 4.筛选miR-206下游靶基因血管内皮生长因子A（Vascularendothelialgrowthfactor，VEGFA），双荧光素酶实验检测miR-206与VEGFA关系。干扰或过表达FOXD2-AS1，westernblot（WB）检测VEGFA表达。回复实验过表达FOXD2-AS1并共转miR-206mimics后，WB检测VEGFA表达变化，CCK-8、平板克隆、transwell迁移及侵袭实验检测肾透明细胞癌细胞功能增殖、迁移及侵袭功能。结果： 1．GEPIA软件显示lncRNAFOXD2-AS1在肾透明细胞癌组织高表达，且与患者不良预后密切相关。 2、qRT-PCR显示FOXD2-AS1在肾透明细胞癌细胞系KTCTL-140及RCC23中较人肾皮质近曲小管细胞系HK-2高表达。FOXD2-AS1干扰后，肾透明细胞癌细胞增殖、迁移、侵袭功能明显受抑。FOXD2-AS1过表达后，肾透明细胞癌细胞增殖、迁移、侵袭功能明显增强。动物实验显示干扰FOXD2-AS1后肾透明细胞癌肿瘤生长速度减慢。 3、构建FOXD2-AS1干扰和过表达稳定转染细胞株，双荧光素酶实验证实FOXD2-AS1与miR-206具有竞争性结合关系。 4、过表达FOXD2-AS1，VEGFA表达上调，而干扰后FOXD2-AS1，VEGFA表达下调。双荧光素酶实验证实miR-206与VEGFA存在结合关系。回复实验过表达FOXD2-AS1并共转miR-206mimics后，FOXD2-AS1对VEGFA的调控作用及对肾透明细胞增殖、侵袭作用可被miR-206mimics回复。结论：本研究结果显示在肾透明细胞癌细胞中，FOXD2-AS1可通过竞争性结合miR206，调控VEGFA表达，进而促进肾透明细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭。收起

关键词 : 肾透明细胞癌 lncRNA 缺氧总生存

6. 肾透明细胞癌的MDCT诊断及与病理分级对照研究

[学位论文] 李誉苏州大学 2017年硕士导师: 朱建兵共50页

摘要 : 第一部分感兴趣区设置方法的不同对肾透明细胞癌CT值测量的影响目的:评估感兴趣区（region of interest，ROI）设置方法不同对肾透明细胞癌患者CT值测量结果一致性的影响。材料与方法:收集本院2008年1月至2015年12月经本院病理证实为肾透... 展开第一部分感兴趣区设置方法的不同对肾透明细胞癌CT值测量的影响目的:评估感兴趣区（region of interest，ROI）设置方法不同对肾透明细胞癌患者CT值测量结果一致性的影响。材料与方法:收集本院2008年1月至2015年12月经本院病理证实为肾透明细胞癌患者的临床及影像资料。随机选取符合本研究要求的患者资料共50例。由一名放射科医师作为观察者在轴面平扫、动脉期、静脉期及延迟期CT图像上采用三种不同 ROI设置方法（肿瘤轮廓法、最大层面法、肿瘤多个小样本法）对肾透明细胞癌病灶进行各期CT值测量，三个月后该医师以同样方法重复病灶各期CT值的测量。将该医师上述两次采用每一种ROI设置方法所测得的各期CT值集合作为该ROI设置方法测得的相应各期CT值的最终测量值。采用配对样本t检验分析比较三种不同ROI勾画方法所测各期CT测量值的最终值之间的差异，然后对不同ROI设置方法测量的平均CT±SD值及观察者两次测量的结果重复性及一致性用Bland-Altman法及组内相关系数（ICC）法进行对比分析。结果：观察者采用三种不同ROI设置方法所测各期CT值均存在较好的一致性（ICC＞0.7），且三种方法所测各期CT值之间的差异均有统计学意义（p＜0.05），多个小样本法所测CT值要高于另外两种方法。Bland-Altman散点图显示肿瘤轮廓法测定的各期CT值分布均更集中，提示肿瘤轮廓法在同一观察者重复测量中一致性区间小，准确性好。结论：肾透明细胞癌患者采用肿瘤轮廓法与肿瘤最大层面法及多个小样本法勾画选择ROI所得CT值有显著差异，采用肿瘤轮廓法重复测量一致性评估差异度小，可重复性好。第二部分肾透明细胞癌增强MDCT强化特征与病理Fuhrman分级相关性的初步研究目的：探讨增强MDCT（Multidetector computed tomography）扫描肾透明细胞癌强化特征与病理Fuhrman分级的相关性。材料和方法：收集本院已病理证实且进行 Fuhrman分级的108例肾透明细胞癌患者的CT影像及临床资料，测量肾透明细胞癌病灶实质的平扫及三期增强CT值以及瘤灶同侧肾皮质和主动脉的四期CT值，并计算肾透明细胞癌病灶实质的绝对及相对强化CT值。根据Fuhrman病理分级，将纳入病例分为低级别（FuhrmanⅠ-Ⅱ级）和高级别（FuhrmanⅢ-Ⅳ级）两组，对两组间肾透明细胞癌肿瘤病灶实质的四期 CT值、三期绝对及相对强化CT值之间的差异采用配对样本t检验进行比较分析，P小于0.05差异有统计学意义。采用Spearman相关分析及ROC曲线分析进一步对肾透明细胞癌各CT参数与病理Fuhrman分级的相关性及其诊断效能进行评价。结果：本文共分析了81例低级别和27例高级别肾透明细胞癌患者，与高级别组比较，低级别组肿瘤实质平扫CT值低（P＜0.05），三期绝对强化CT值高（P＜0.05），动脉期及静脉期相对于主动脉及肾皮质相对强化CT值高（P＜0.05），差异有统计学意义，而延迟期相对与主动脉及肾皮质的相对强化CT值前者高于后者，但差异无统计学意义（P＞0.05）。Spearman相关分析及ROC曲线分析结果显示相关系数较高的为动脉期相对于主动脉的相对强化 CT值 A1（r=-0.311,P＜0.05），C1（r=-0.303,P＜0.05）以及动脉期绝对强化CT值（r=-0.247,P＜0.05）。ROC曲线下面积AUC（Area Under the ROC Curve）较高的为动脉期相对于主动脉的相对强化CT值A1（AUC为0.707），动脉期相对于肿瘤同侧肾皮质的相对强化CT值C1（AUC为0.702）以及动脉期绝对强化CT值（AUC为0.664）。结论：肾透明细胞癌增强MDCT强化CT值与其Fuhrman病理分级呈负性相关关系，其中动脉期相对于主动脉及肾皮质的相对强化 CT值（A1、C1）及动脉期绝对强化CT值诊断效能较高，有助于术前预测肾透明细胞癌的分级，进而可以为患者选择恰当的临床干预方案提供参考，具有一定的临床应用价值。收起

关键词 : 肾透明细胞癌 MDCT诊断病理分级

7. 能谱CT多参数定量分析在肾透明细胞癌病理分级中的价值研究

[学位论文] 郭君君湖北医药学院 2021年硕士导师: 胡必富共43页

摘要 : 背景：肾细胞癌是肾脏最常见的恶性肿瘤，包括10多种组织学与分子亚型，其中肾透明细胞癌（Renalclearcellcarcinoma，ccRCC）最常见且死亡率最高。ccRCC的核分级被证实是患者预后的独立影响因素，因此术前明确ccRCC的病理分级对临床选择合适的治疗方... 展开背景：肾细胞癌是肾脏最常见的恶性肿瘤，包括10多种组织学与分子亚型，其中肾透明细胞癌（Renalclearcellcarcinoma，ccRCC）最常见且死亡率最高。ccRCC的核分级被证实是患者预后的独立影响因素，因此术前明确ccRCC的病理分级对临床选择合适的治疗方案及预后评估有重要意义。传统的影像学检查对不同级别的ccRCC难以鉴别，而能谱CT或许能够提供定量参数区分它们。目的：探究能谱CT定量参数是否能够在术前预测肾透明细胞癌的病理分级。方法：收集我院2018年6月-2020年12月期间进行手术并经病理证实的38例肾透明细胞癌患者，其中高分化组（FurhmanⅠ-Ⅱ级）28例，低分化组（FurhmanⅢ-Ⅳ级）10例，所有患者术前均行常规平扫及能谱CT（GERevolutionenergyspectralCT）增强皮质期及实质期扫描，并将扫描图像传送至后处理工作站（AdvancedWorkstation4.7）,重建出70kev单能量图像、碘基图、能谱曲线图及有效原子序数直方图。分析内容包括： 1.分析肿瘤的常规征象：评价内容包括肿瘤形态、钙化、坏死、肾盂或肾周侵犯及瘤栓形成等征象，并测量肿瘤直径。包括患者的年龄、性别及肿瘤部位。 2．分析肿瘤的能谱征象：①70kev单能量CT值；②测量病灶内碘浓度（Iodinecontentoflesion,IClesion）与同层腹主动脉的碘浓度(Iodinecontentofaorta,ICaorta)，计算标准化碘浓度（Normolizediodineconcentration，NIC）=IClesion/ICaorta；③观察40kev、90kev对应的CT值，计算能谱曲线斜率(Energyspectrumcurveslope,K)=(CT40kev-CT90kev)/50；④有效原子序数。用SPSS25.0及MedCalc18.0软件对患者基本信息、常规CT征象及能谱CT多参数进行统计学分析。计量资料以均数±标准差表示，采用独立样本t检验进行分析;计数资料采用Fisher确切概率法进行分析。绘制受试者工作特征曲线（ReceiverOperatingCharacteristic,ROC）分析差异有统计学意义的能谱CT参数的诊断效能。结果： 1.高、低级别ccRCC的基本信息比较，性别、年龄及肿瘤部位等方面在两组间无明显差别，差异没有统计学意义（P＞0.01）。 2.高、低级别ccRCC的常规CT征象比较，肿瘤直径、肾盂或肾周侵犯在两组间的差异有统计学意义（P＜0.01），形态、钙化、坏死及瘤栓形成等方面在两组间的差别不大，差异没有统计学意义（P＞0.01）。 3.皮质期和实质期，低级别ccRCC的NIC值、K值、有效原子序数及70kev单能量CT值均大于高级别ccRCC，且差异有统计学意义（P＜0.01）。 4.ROC曲线分析显示NIC值对ccRCC的病理分级具有较高的诊断价值，曲线下面积（Areaundercurve,AUC）最大为0.857，最佳阈值为0.28，相对应的特异度为70%，敏感度为85.71%。结论： 1．肿瘤大小以及是否发生肾盂或肾周侵犯对高、低级别ccRCC的鉴别有一定价值。 2.能谱CT多参数定量分析可以区分不同病理分级的ccRCC，尤其是NIC值，在诊断高、低级别ccRCC中的特异度和灵敏度较高，能够为临床医生对患者的个体化治疗和预后评估提供帮助。收起

关键词 : 肾透明细胞癌能谱CT 病理分级

8. 蛋白激酶C活性及δ亚型在肾透明细胞癌中的表达及意义

[学位论文] 姜元军中国医科大学 2003年硕士导师: 孙志熙共39页

摘要 : 目的:探讨蛋白激酶C(Protein Kinase C,PKC)的活性在肾透明细胞癌发生发展中的作用,检测肾透明细胞癌组织中PKC-δ表达,研究其在肾透明细胞癌中的临床意义.结论:1.PKC在亚细胞水平的活性变化对于肾透明细胞癌的发生起重要的调控作用,肾透明细胞癌组织... 展开

关键词 : 蛋白激酶C 肾透明细胞癌

9. 舒尼替尼通过激活TFE3上调PD-L1表达导致肾透明细胞癌免疫逃逸的机制研究

[学位论文] 郭旭东山东大学 2021年博士导师: 金讯波共161页

摘要 : 1.研究背景肾细胞癌占所有癌症比例的2％至3％，大约30％的患者在诊断时已经出现转移，其余经过手术切除的患者有30％到40％会在随访过程中出现转移。肾透明细胞癌是肾细胞癌最常见类型，约占肾癌总数的75％。近年来，针对血管内皮生长因... 展开 1.研究背景肾细胞癌占所有癌症比例的2％至3％，大约30％的患者在诊断时已经出现转移，其余经过手术切除的患者有30％到40％会在随访过程中出现转移。肾透明细胞癌是肾细胞癌最常见类型，约占肾癌总数的75％。近年来，针对血管内皮生长因子受体的酪氨酸激酶抑制剂(TKI)的出现，大大改善了转移性肾细胞癌的总生存期(OS)和无进展生存期(PFS)，已成为转移性肾癌的一线治疗策略。苹果酸舒尼替尼是一种用于治疗晚期或转移性肾细胞癌的口服多靶点酪氨酸激酶抑制剂，其对包括包括血管内皮生长因子受体(VEGFR)1、2、3，血小板衍生生长因子受体(PDGFR)α、β，和碱性成纤维细胞因子(bFGF)在内的等多个酪氨酸激酶受体(TKRs)活性具有抑制作用。舒尼替尼通过抑制上述TKRs发挥抗血管生成作用，阻断肿瘤生长所需的营养物质供给，同时还能够直接杀死肿瘤细胞，从而起到抗肿瘤作用。但是，大多数转移性肾癌患者都会迅速出现对酪氨酸激酶抑制剂的耐药，而且在停药后并没有观察到较长的无进展生存期。近年来出现的免疫检查点抑制剂(ICI)，如程序性死亡受体1(PD-1)抑制剂、程序性死亡受体配体1(PD-L1)抑制剂和细胞毒性T淋巴细胞抗原4(CTLA-4)抑制剂已被FDA批准用于十几个不同的实体肿瘤，包括皮肤、肺、肾、膀胱、头颈部、淋巴细胞、肝和胃癌等，这也为转移性肾癌的治疗带来了新的曙光。然而，基于三期临床试验数据，PD-1/PD-L1抑制剂的临床反应率作为单一疗法使用时仅有20-44％。因此，TKI和ICI的新组合正成为一种新的治疗策略选择。近期进行的二期/三期临床试验也显示，TKI和ICI联合治疗取得较单药治疗更高的客观缓解率和无进展生存期。然而，TKI和ICI的联合治疗的分子机制尚需要进一步的研究。 MiT/TFE(microphthalmia-associatedtranscriptionfactor，小眼畸形转录因子)家族蛋白是进化上高度保守的一类转录调控因子，由包括TFEB、TFE3、TFEC和MITF在内的一系列碱性螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链(bHLH-LZ)转录因子组成，在溶酶体生物发生、细胞能量稳态和免疫反应等方面发挥着重要的调节作用，并广泛参与肿瘤的发生发展，被看作是一种原癌基因。TFEB及TFE3在肾癌、黑色素瘤、肺泡肉瘤中都存在异常表达的情况，且与患者预后成明显的负相关性。TFEB或TFE3基因融合易位型肾癌相比于透明细胞癌患者，其复发和转移率较高，预后明显较差。研究发现在MiT/TFE家族易位型肾细胞癌中，PD-L1在90％的肿瘤浸润性免疫细胞中呈过表达，明显高于其他类型肾细胞癌。这些结果表明MiT-TFE家族不仅在肾癌的进展中起着重要的作用，而且在肿瘤免疫逃逸的产生中也起着重要的作用。 TFE3和TFEB在营养感应和能量稳态中发挥重要作用，在营养丰富的条件下，TFEB和TFE3定位在胞质中。在细胞缺氧或饥饿状态下，TFEB及TFE3去磷酸化并迅速转移至细胞核内从而被激活。我们推测舒尼替尼通过抗血管生成作用导致肿瘤组织缺氧、营养缺乏，可激活TFE3和TFEB，进而上调PD-L1表达，从而介导肾癌免疫逃逸，这可能是舒尼替尼耐药的潜在机制之一，也为舒尼替尼和PD-L1抑制剂联合治疗提供了理论支持。目前，关于TFE3和TFEB在促进肾癌增殖及诱导肾癌免疫逃逸中的机制尚无深入研究。本课题我们拟研究:舒尼替尼激活TFE3进而上调PD-L1表达，从而介导ccRCC免疫逃逸的具体机制，并探索针对本机制新的治疗方法。 2.研究目的研究TFE3促进ccRCC细胞增殖的机制;研究TFE3通过上调PD-L1的表达进而介导ccRCC细胞免疫逃逸的机制;研究舒尼替尼通过激活ccRCC细胞TFE3进而增强PD-L1表达的机制;建立小鼠肾癌移植瘤模型，研究舒尼替尼联合PD-L1抑制剂对小鼠肾癌的治疗效果。 3.实验方法 3.1TFE3促进ccRCC细胞增殖的机制研究通过分析KaplanMeier绘图仪数据库，研究TFE3和TFEB表达与ccRCC患者生存预后的关系;通过分析癌症基因组图谱数据库(TCGA)和癌细胞系百科全书数据库(CCLE)，研究TFE3和TFEB在ccRCC组织标本和肿瘤细胞系中的表达差异，并通过qPCR进一步验证TFE3和TFEB在ccRCC组织标本的表达差异;采用siRNA瞬时转染法构建TFE3和TFEB基因敲减786-O细胞，qPCR和WesternBlot检测敲减效率，分别采用XCelligenceRTCADP仪、细胞形态学观察、EdU染色及克隆形成实验检测TFE3和TFEB基因敲减后对786-O细胞增殖的影响。 3.2TFE3诱导PD-L1表达上调进而介导ccRCC细胞免疫逃逸的机制研究 qPCR检测786-O细胞TFE3和TFEB基因敲减后，CD273(PD-L2)、CD274(PD-L1)及CD275(ICOSL)等免疫检查点标记物的表达;qPCR检测A498、TK-10、HepG2细胞TFE3和TFEB基因敲减后PD-L1水平的表达;采用WesternBlot、免疫荧光及流式细胞术检测786-O细胞TFE3和TFEB基因敲减后PD-L1的表达水平;通过荧光素酶报告实验检测TFE3和TFEB过表达后对PD-L1表达的影响;通过癌细胞系百科全书(CCLE)数据库，分析ccRCC肿瘤细胞系中TFE3和TFEB与PD-L1表达的相关性;通过HE和免疫组化染色检测ccRCC病理标本中PD-L1和TFE3表达的相关性，并检测免疫组化染色PD-L1低表达区及高表达区TFE3的核强度的差异，通过WesternBlot检测ccRCC组织标本中TFE3和PD-L1蛋白表达水平的关系。 3.3舒尼替尼通过激活ccRCC细胞TFE3进而上调PD-L1表达的机制研究将肾癌细胞系(786-O，A498，TK-10)分为实验组及对照组，实验组加入舒尼替尼(5μM)，处理48h后，qPCR及WesternBlot检测各组PD-L1mRNA及蛋白的表达;流式细胞术检测在舒尼替尼作用下786-O细胞PD-L1的表达;WesternBlot检测在舒尼替尼作用下786-O细胞TFE3核转位的表现，并采用免疫荧光法检测TFE3在细胞核及胞浆组分中的分布情况;在TFE3基因敲减786-O细胞中，通过qPCR及流式细胞术检测实验组及对照组PD-L1的表达水平;构建TFE3过表达786-O细胞，qPCR检测实验组及对照组PD-L1的表达水平。 3.4舒尼警尼联合PD-L1抑制剂对肾癌小鼠皮下移植瘤模型治疗效果的研究建立肾癌Renca细胞小鼠皮下移植瘤模型。将40只小鼠右上肢外侧皮下接种小鼠肾癌Renca细胞，并随机分为8组，其中4组接受药物处理后处死，另外4组接受药物处理后继续饲养至自然死亡。药物处理分组:舒尼替尼组、PD-L1抑制剂组，舒尼替尼+PD-L1抑制剂组及赋形剂+IgG对照组。当肿瘤生长至50mm3时，给予药物舒尼替尼(40 mg/kg，i.p.)及PD-L1抑制剂(200ug/小鼠，i.p.)，每2天一次，共5次，第5次注射2天后，处死小鼠，剥取移植瘤。每次给药前及处死前测量小鼠体重及肿瘤体积，绘制生长曲线。qPCR检测各组肿瘤组织中TFE3及PD-L1的表达水平。制备移植瘤单细胞悬液，并纯化分离肿瘤浸润淋巴细胞，流式细胞仪检测各组CD8+细胞毒T细胞颗粒酶B(GZMB)表达的差异。非处死组继续饲养至自然死亡，记录小鼠生存时间。 3.5统计分析使用ImageProPlus6.0对WesternBlot和荧光图像进行分析。数据以平均值±标准差表示，并使用GraphPadPrism软件进行统计分析(GraphPad)。根据数据资料的类型选择相应的统计学分析方法，计数资料选用Fisher精确检验或卡方检验，计量资料选用t检验或方差分析。采用Kaplan-Meier和Log-rank进行生存分析，采用Cox比例危险模型分析评估预后因素的意义。所有实验至少重复三次。p＜0.05为有统计学意义，图中表示为*p＜0.05，**p＜0.01，，***p＜0.001。 4.实验结果 4.1TFE3可显著促进ccRCC细胞增殖，而TFEB对细胞增殖无明显影响为阐明TFE3和TFEB在ccRCC中的作用，我们首先分析了公开发表的关于TFEB和TFE3表达的KaplanMeier绘图仪数据库，结果显示，TFE3表达与ccRCC患者的生存期呈负相关，而TFEB无明显负相关。我们通过分析TCGA数据集和癌细胞系百科全书(CCLE)数据集还发现，在ccRCC标本和肿瘤细胞系中TFE3基础表达高于TFEB。为进一步验证数据库信息，我们用qPCR检测了30例ccRCC患者组织标本，结果证实TFE3表达显著高于TFEB。为确定这种差异是否决定了ccRCC的增殖优势，我们将786-O细胞的TFEB和TFE3基因敲减，结果显示TFEB敲减不影响细胞增殖，TFE3的敲减显著抑制了细胞的增殖。这些结果通过EdU染色和克隆形成实验进一步得到验证。此外，我们还在肝癌细胞中将TFEB和TFE3基因敲减，并得到相似的结果。这表明在肾癌等恶性肿瘤中，TFE3可发挥强有效的促肿瘤增殖作用。 4.2在ccRCC细胞系和患者中,TFE3可通过上调PD-L1的表达而介导免疫逃逸我们接下来研究TFE3和TFEB是否可以通过调节免疫检查点分子的表达来介导免疫逃逸。结果显示，TFE3和TFEB均可正向调控CD274(PD-L1)、CD273(PD-L2)和CD275(ICOSL)等免疫检查点分子的表达。为了进一步阐明TFE3和TFEB对PD-L1表达的调控，我们首先将多个肿瘤细胞系(ccRCC细胞(786-O、A498、TK-10)、肝脏腺癌细胞(HepG2))的TFE3和TFEB基因敲减，发现PD-L1也随之下调。WesternBlot、免疫荧光和流式细胞术进一步证实上述结果。我们通过双荧光素酶报告实验，将TFE3和TFEB过表达质粒分别与荧光素酶报告质粒共转染，发现TFE3和TFEB过表达后均可显著增加pGL3-PD-L1报告质粒的荧光素酶活性，这说明TFE3和TFEB可以明显增强PD-L1基因启动子活性，进而上调PD-L1的表达。我们通过CCLE公用数据库获取ccRCC肿瘤细胞系数据资料，分析发现ccRCC肿瘤细胞系中TFE3表达水平与PD-L1水平呈正相关，而TFEB与PD-L1水平无明显相关性，这提示TFE3可能比TFEB对PD-L1的调控更为明显，因此，在后续实验中，我们重点研究TFE3在ccRCC免疫逃逸中的机制。接下来，我们评估在ccRCC组织标本中，TFE3水平是否与PD-L1表达具有相关性。免疫组化显示PD-L1高表达区域可发现TFE3高表达和核定位增强，WesternBlot也进一步证实ccRCC组织中TFE3与PD-L1表达水平呈正相关。 4.3舒尼替尼通过激活ccRCC细胞TFE3进而诱导PD-L1表达上调 qPCR和WesternBlot检测发现在不同ccRCC细胞系中舒尼替尼均可以诱导PD-L1的表达上调。流式细胞术检测也证实了上述结果。接下来我们进一步检测了舒尼替尼上调PD-L1的表达是否依赖于TFE3的激活，而TFE3激活依赖于其入核。核浆分离实验和免疫荧光实验结果显示，舒尼替尼显著增强786-O细胞中TFE3核转位及表达。敲减TFE3可以抑制PD-L1的表达，并且能够部分抵消舒尼替尼诱导的PD-L1水平上调。相反，TFE3过表达可增强PD-L1的表达，并可进一步增强舒尼替尼诱导的PD-L1表达。这些结果表明，舒尼替尼通过激活ccRCC细胞TFE3来诱导PD-L1的表达上调。 4.4联合PD- 收起

关键词 : 肾透明细胞癌舒尼替尼免疫逃逸

10. NSUN2对肾透明细胞癌的影响及机制研究

[学位论文] 陈鹏湖北医药学院 2023年硕士导师: 姚启盛共62页

摘要 : 背景：肾癌是泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率逐年上升，全世界每年约有40万人罹患肾癌，17.5万人死于该病。90%的肾癌为肾细胞癌，其中肾透明细胞癌（clearcellrenalcellcarcinoma,ccRCC）是肾细胞癌最常见的组织学亚型，约占肾... 展开背景：肾癌是泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率逐年上升，全世界每年约有40万人罹患肾癌，17.5万人死于该病。90%的肾癌为肾细胞癌，其中肾透明细胞癌（clearcellrenalcellcarcinoma,ccRCC）是肾细胞癌最常见的组织学亚型，约占肾细胞癌的70%-80%。虽然诊断技术的进步使得越来越多的早期肾癌患者得以明确诊断，但约有30%的ccRCC患者初诊时就存在远处转移，且大约1/3的肾细胞癌患者术后会复发，是否复发主要取决于患者的临床分期和组织病理学特征。转移性肾细胞癌即使在实施靶向治疗或肾癌根治术的前提下，转移性肾透明细胞癌患者的5年生存率仍然低于10%。当下针对肾透明细胞癌患者个体化治疗或临床有诊断意义的生物学标志物较为欠缺，所以探索新的生物学标志物在ccRCC患者的诊断及预后评估具有重要的临床意义。m5CRNA甲基化调节因子在肿瘤发生发展中起重要作用。NSUN2是RNAm5C甲基化重要的甲基转移酶。NSUN2参与调节细胞周期、RNA稳定性和细胞凋亡。本课题探讨NSUN2对肾透明细胞癌细胞的凋亡的影响及其机制研究。目的：探讨NSUN2对肾透明细胞癌细胞凋亡的影响及其机制。方法：1、利用TCGA数据库及在线数据库分析NSUN2在肾透明细胞癌中表达及意义。 2、收集我院确诊肾透明细胞癌患者的癌及癌旁组织，应用RT-PCR以及WB检测NSUN2的表达情况； 3、利用siRNA筛选出敲低效率最高的靶标序列，利用慢病毒感染系统构建稳定的NSUN2敲低细胞系，通过RT-PCR和westernblot检测稳转细胞系建立情况； 4、应用流式细胞检测技术及westernblot检测对照组和shNSUN2-786-O细胞凋亡水平的变化； 5、采用westernblot检测对照组和shNSUN2-786-O细胞p-AKT及AKT蛋白表达水平变化；结果：TCGA数据库数据分析显示NSUN2在透明细胞癌中的表达量较癌旁组织显著升高，且临床样本的癌组织NSUN2表达量明显高于癌旁。与TCGA数据分析结果一致。NSUN2在肾透明细胞癌的诊断中有一定价值，NSUN2高表达患者预后较差，NSUN2高表达与肾透明细胞癌免疫浸润程度有关，GSEA富集分析显示NSUN2与多条信号转导通路有关，尤其是AKT信号传导通路；RT-PCR和westernblot结果显示shNSUN2-786-O细胞中NSUN2mRNA及其蛋白表达水平降低，表明敲低NSUN2的稳定细胞系构建成功。敲低NSUN2会促进肾透明细胞癌细胞的凋亡。NSUN2敲低后磷酸化AKT比值降低。结论：1.NSUN2在肾透明细胞癌组织中高表达，且NSUN2对肾透明细胞癌的诊断有一定的价值； 2.高表达NSUN2影响肾透明细胞癌患者的生存期，NSUN2可以作为肾透明细胞癌预后的独立危险因素； 3.NSUN2通过升高磷酸化AKT的水平，抑制肾透明细胞癌凋亡。收起

关键词 : 肾透明细胞癌 NSUN2 细胞凋亡 AKT