中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

[学位论文] 黄海霞山东大学 2001年硕士导师: 高建新共60页

摘要 : 哺乳动物脊髓生长发育及损伤修复是神经系统研究的热点,神经营养因子NTF在其中发挥重要的作用,机制复杂.该课题研究了脑源性神经营养因子(BDNF)和神经营养因子-3(NT-3)以离体培养的胚胎大鼠脊髓神经元尤其是胆碱能神经元和一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元... 展开

关键词 : 脑源性神经营养因子神经营养因子-3

2. 米诺环素对不完全脊髓损伤大鼠脊髓BDNF和NT-3表达的影响

[学位论文] 段冰玉华中科技大学 2013年硕士导师: 周厚纶共54页

摘要 : 神经营养因子是具有神经营养活性，与神经细胞生长、存活相关的细胞因子的统称，是一种重要的细胞因子。在中枢神经系统（CNS）发育过程中，神经因子对神经元的存活和分化，生长发育起着重要的作用，而且也是成熟的中枢及周围神经系统的神经元维持生存... 展开神经营养因子是具有神经营养活性，与神经细胞生长、存活相关的细胞因子的统称，是一种重要的细胞因子。在中枢神经系统（CNS）发育过程中，神经因子对神经元的存活和分化，生长发育起着重要的作用，而且也是成熟的中枢及周围神经系统的神经元维持生存和正常生理功能所必须的。神经因子在成年大鼠神经系统的发展和突触可塑性形成中起着重要作用，它们保护损伤的神经再生并且通过活化酪氨酸激酶受体（trk）以及闸门信号通路来促进神经元干细胞的分化。因此，神经因子被认为是中枢神经系统（CNS）和周围神经系统（PNS）疾病可能的治疗药物。脑源的神经营养因子（BDNF）是1982年发现的直至1989年才确定其分子构成从猪脑提取液中获得的一种分子量为12．3KD的碱性蛋白。它的氨基酸序列与NT-3有55%的同源性，在程序性细胞死亡中可以挽救敏感神经元的死亡。尽管骨骼肌表达BDNFmRNA，但是它最早被报道在离体培养的鸡运动神经元中报道BDNF不能支持运动神经元的存活。从此，关于BDNF对于敏感神经元的作用开始得到越来越多的研究，并且人们开始研究BDNF对于交感神经元和脑神经元的作用。但是，最近大鼠中BDNF对于运动神经元的作用已经被研究所证实。BDNF的作用一般是通过其高亲和力收提trkB和trkC。BDNF和这些受体结合以后导致自身磷酸化使得它们能够与磷酸化的蛋白相结合，直接激活这些蛋白从而诱导细胞生长和分化。神经生长因子3（NT-3）是神经因子家族第三个发现的成员，是有119个氨基酸单位合成的分子量为28kDa的一种碱性蛋白，等电点pI=9.3，与NGF有55%的同源性，但是它与NGF以及BDNF的不同之处在于它在交感神经元的弱活性，NT-3的受体是trkC，它广泛存在于中枢神经系统（包括脑嗅球、小脑、海马、隔膜）以及周围神经系统（胸腺、肌肉、肝脏、横膈膜）。NT-3功能上诱导敏感神经元和副交感神经元的存活和分化，同时在离体培养中能够支持运动神经元的存活。调节神经肌肉突触的功能，并且阻止细胞发生程序性凋亡。米诺环素是第二代半合成四环素类药物，有高脂溶性并能穿透血脑屏障，具有抗炎、免疫调节作用以及神经保护活性，近年来，已经证实在脊髓损伤大鼠体内，米诺环素能够通过抑制小胶质细胞活化、减少细胞凋亡、抑制氧自由基产物以及金属蛋白酶（MMPs）、影响白细胞活化而减少白介素1（IL-1）的释放等途径来缓解脊髓损伤的症状。尽管作为治疗神经系统疾病的潜在药物，米诺环素的治疗作用毋庸置疑是综合性的，而且已经有很多研究显示神经因子在神经系统疾病中是不可或缺的，然而，几乎没有研究评估米诺环素在脊髓损伤中对BDNF以及NT-3表达的影响。本实验的目的是在制备不完全脊髓损伤（iSCI）大鼠模型的基础上，观察米诺环素对大鼠运动功能的恢复以及其对大鼠体内BDNF和NT-3表达的影响，并通过所得的实验结果推测米诺环素神经保护作用的可能机制。实验大鼠被随机分成三组：空白对照组（CG）、损伤+生理盐水组（NS）、损伤+米诺环素组（TG），观察并记录大鼠的行为学改变，并采用RT-PCR以及免疫组织化学法（SABC法），分别检测了三组大鼠在不同时间点体内BDNF和NT-3的mRNA以及蛋白的表达情况。RT-PCR结果显示：与CG组相比较，NS以及TG组大鼠体内BDNF和NT-3的mRNA相对含量均升高，但TG组升高较NS组多，差异具有显著性意义（P<0.05）。免疫组化结果显示：在各组大鼠脊髓前角区内，均有BDNF和NT-3蛋白阳性表达，但TG组以及NS组阳性反应增强，而TG组表达比NS组强，差异具有显著意义（P<0.05）。RT-PCR与免疫组化所示的BDNF和NT-3的变化趋势相一致。以上结果提示，米诺环素能促进iSCI大鼠的行为学恢复，上调大鼠脊髓内BDNF和NT-3的表达，因此，可以推测米诺环素的神经保护机制也可能与增强了神经因子表达有关，通过神经因子作用从而发挥神经保护作用。收起

关键词 : 脊髓损伤米诺环素脑源性神经营养因子神经营养因子3

3. 梓醇对拟帕金森病模型的保护作用及机制探讨

[学位论文] 许刚上海交通大学 2010年博士导师: 胡雅儿共91页

摘要 : 帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是多发于中老年人的一种神经退行性疾病,临床症状主要表现为静止性震颤、僵直、运动迟缓及平衡障碍等。病理变化为选择性的黑质致密部(substantia nigral pars compacta,SNpc)多巴胺能神经元进行性的变性坏死、纹状... 展开帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是多发于中老年人的一种神经退行性疾病,临床症状主要表现为静止性震颤、僵直、运动迟缓及平衡障碍等。病理变化为选择性的黑质致密部(substantia nigral pars compacta,SNpc)多巴胺能神经元进行性的变性坏死、纹状体内的多巴胺转运体(dopamine transporter,DAT)密度及多巴胺(Dopamine,DA)含量降低。目前临床上的治疗方法主要是多巴胺替代治疗,并不能延缓或逆转疾病进程。所以很多研究机构致力于延缓或逆转多巴胺能神经元退行性病变,主要包括细胞移植,基因治疗以及神经营养因子等,但是应用于临床还有一定的距离。寻找小分子化合物以刺激内源性的神经营养因子表达上调可能是延缓或逆转疾病进程的另一种途径。地黄是祖国医学中常用的一种滋阴中药,多用于神经退行性疾病的治疗,包括帕金森病及阿尔茨海默病等。梓醇是地黄多种环烯醚帖类化合物中含量最高的一种。本文主要阐述了梓醇的分离提取、对拟帕金森病模型的保护作用以及部分作用机制的探讨。梓醇的分离提取,我们采用的方法是甲醇回流,乙酸乙酯萃取除去脂溶性成分,活性炭柱层析,硅胶柱层析以及重结晶,分离得到梓醇,得率为0.2％,经13C-NMR,旋光度鉴定结构正确,HPLC鉴定纯度>95％。由于帕金森病本身是一种慢性疾病,而梓醇也需要较长的时间起作用,所以我们选用一种损伤时间较长而又恢复较慢的动物模型,即MPTP/丙磺舒联合应用的拟帕金森病小鼠模型。通过rota-rod行为学分析,模型小鼠的运动功能明显低于正常小鼠,梓醇能明显上调模型小鼠的行为学成绩；高效液相电化学检测器(High performance liquid chromatography-electrochemical detector,HPLC-ECD)测定分析显示模型小鼠纹状体内的DA及其主要代谢产物(dihydroxy-phenyl acetic acid,DOPAC,homovanillicacid,HVA)含量明显降低,梓醇可以显著上调纹状体内DA及其主要代谢产物(DOPAC和HVA)的含量；免疫组织化学及体视学分析结果显示,模型小鼠的SNpc内酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)阳性神经元明显减少,梓醇能明显增加模型小鼠SNpc内TH阳性细胞数；放射自显影显示梓醇能明显提高模型小鼠的纹状体内降低的DAT密度；单位点竞争结合分析法发现梓醇并不占领多巴胺受体的结合位点；酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)显示梓醇能够明显上调模型小鼠纹状体内胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line derivedneurotrophic factor,GDNF)及脑源性神经营养因子(brain derivedneurotrophic factor,BDNF)含量。在MPP+损伤的原代培养的中脑多巴胺能神经元中,梓醇预保护24h能够明显上调减少的TH阳性细胞数及缩短的轴突长度,并呈现良好的剂量效应。逆转录聚合酶链反应(Reverse Transcriptase Polymerase ChainReaction,RT-PCR)发现梓醇可以上调MPP+损伤后的中脑培养系统中GDNF及BDNF mRNA表达及BV2细胞中的大脑多巴胺神经营养因子(cerebral dopamine neurotrophic factor,CDNF)mRNA表达。通过K252a阻断BDNF受体TrkB后,梓醇的保护作用减弱；PP1阻断GDNF受体RET激酶后,梓醇的保护作用减弱(TH阳性细胞数)或消失(轴突长度)；抗GFRα1中和抗体阻断后,梓醇的保护作用完全消失。综上所述,梓醇对MPTP慢性小鼠模型及MPP+损伤的中脑多巴胺能神经元均具有保护作用,而且这种保护作用部分是通过上调GDNF、BDNF而实现的,亦可能与上调CDNF表达有关。提示梓醇与临床现有药物的作用机制不同,有可能会延缓疾病进程,为治疗PD的药物开发提供了一条新的途径和实验依据。收起

关键词 : 梓醇帕金森病大脑多巴胺神经营养因子胶质源性神经营养因子脑源性神经营养因子多巴胺

4. 神经营养因子对面神经损伤修复作用的研究

[学位论文] 张治军四川大学 2000年博士导师: 梁传余共68页

摘要 : 目的:比产三种不同神经营养因子组合方案的促神经再生和功能恢复效果.结论:神经营养因子有促周围神经再生作用,神经肌电活动恢复与髓轴索数目有相关性.该研究条件下BDNF/NT-3基础上的三种神经营养因子组合方案+CNTF组优于+NF-4组和+IGF-1组.

关键词 : 面神经再生神经营养因子

5. 神经营养因子NT3及其受体TrkC在锰致神经毒性中的作用及其机制

[学位论文] 韦福广西医科大学 2018年硕士导师: 邹云锋共91页

摘要 : 目的：通过体外培养的小鼠原代神经元及体内小鼠短期、慢性染锰实验，测定不同浓度锰处理组神经营养因子NT3与其受体TrkC及其激活的下游信号转导通路相关蛋白和凋亡蛋白的表达情况，探讨NT3及其受体TrkC在锰致神经毒性的潜在作用机制。方... 展开目的：通过体外培养的小鼠原代神经元及体内小鼠短期、慢性染锰实验，测定不同浓度锰处理组神经营养因子NT3与其受体TrkC及其激活的下游信号转导通路相关蛋白和凋亡蛋白的表达情况，探讨NT3及其受体TrkC在锰致神经毒性的潜在作用机制。方法：将体外培养的小鼠神经元经不同浓度的MnCl2·4H2O溶液处理24小时后，在倒置相差显微镜下观察染锰后细胞形态改变，经MTT法测定其存活率，确定小鼠神经元实验各处理组的染锰浓度。小鼠神经元按不同浓度染锰24小时后，经荧光定量PCR分析TrkC及NT3的mRNA表达水平;经Western Blot测定不同染锰剂量及不同染锰时间的细胞中NT3与TrkC及其下游信号转导通路相关蛋白(p-Akt、Akt，p-Erk，Erk，P-CREB，CREB)表达水平和其下游凋亡相关蛋白(Caspase3、Bax和Bcl2)的含量变化;经免疫荧光观察小鼠神经元内NT3及TrkC定位及变化情况;经TMRM染料染色后，分别经荧光显微镜及流式细胞仪检测细胞的线粒体膜电位的变化情况;采用Annexin V-FITC细胞凋亡试剂盒、Tunel凋亡试剂盒及DAPI染色检测其凋亡率。为验证在锰作用下，TrkC受体是否会在NT3缺乏情况下被Caspase3切割，将小鼠神经元分别预先经NT3及Caspase的拮抗剂Z-VAD-FAM处理后按200μM剂量染锰24小时，观察细胞形态变化并再次检测以上指标变化情况。此外，将24只雄性C57BL/6小鼠随机分为0、5、20、50mg/kg剂量组，分别经腹腔注射生理盐水及相应浓度的MnCl2·4H2O溶液，每周5天，连续2周;同时将36只雄性C57BL/6小鼠，随机分为对照组、100mg/L组、200mg/L组和400mg/L组。暴露组按对应剂量，通过饮用水暴露锰，对照组予以普通饮用水，持续暴露32周。染锰结束后提取小鼠皮层及海马蛋白，经Western Blot检测NT3与TrkC及其下游信号转导通路相关蛋白表达水平和其下游凋亡相关蛋白的含量变化。结果： 1.与0μM剂量组相比，当染锰浓度等于或高于200μM时，随着染锰浓度的升高，原代小鼠神经元的存活率下降(p＜0.05)。不同浓度的锰可以引起小鼠神经元不同程度的损伤并出现形态学改变。 2.与0μM剂量组相比，随着染锰浓度的增高，小鼠神经元中核分裂及核固缩相数目增多，被脱氧核糖核苷酸末端转移酶标记DNA断裂的细胞数目增多。与0μM剂量组相比，400μM剂量组的AnnexinⅤ+/PI-和AnnexinⅤ+/PI+细胞数目约提高15％;200μM及400μM剂量组的AnnexinⅤ-/PI+细胞数目约提高16％(p＜0.05)。 3.与0μM剂量组相比，随着染锰浓度的增高，小鼠神经元内NT3及TrkC的mRNA水平下降，蛋白表达水平降低(p＜0.05)，细胞膜上NT3及TrkC荧光强度减弱。 4.与0μM剂量组相比，随着染锰浓度的增高，小鼠神经元内NT3与TrkC及其激活的下游信号转导通路相关蛋白及其下游的凋亡蛋白表达水平改变。其中:pAkt、pErk1/2、pCREB、Bcl2蛋白含量随着染锰浓度的升高而降低(p＜0.05);与之相反，促调亡蛋白Bax和Cleav-Caspase3含量随着锰处理浓度的升高而增加(p＜0.05)。 5.与0μM剂量组相比，随着染锰浓度升高，小鼠神经元经TMRM标记的荧光强度降低;200μM及400μM线粒体膜电位水平分别下降了20％及40％(p＜0.05)。 6.与0小时相比，小鼠神经元经200μM锰处理组后12小时左右可观察到细胞损伤及形态改变。小鼠神经元内NT3与TrkC及其激活的下游信号转导通路相关蛋白及其下游的凋亡蛋白表达水平随着时间的变化而改变，但各蛋白开始改变的时间有差异。其中:pAkt、pErk1/2、pCREB、Bcl2蛋白含量随着染锰时间的增加而降低(p＜0.05);与之相反，促凋亡蛋白Bax和Cleav-Caspase3含量随着锰处理时间的增加而降低(p＜0.05)。 7.小鼠神经元预先经NT3及Z-VAD-FAM处理两个小时后，TrkC及其激活的下游信号转导通路相关蛋白及其下游的凋亡蛋白表达水平改变。其中，与直接200μM锰处理组相比pAkt、pErk1/2、pCREB、Bcl2蛋白含量升高(p＜0.05);与之相反，促凋亡蛋白Bax和Cleav-Caspase3含量下降(p＜0.05)。 8.小鼠神经元预先经NT3及Z-VAD-FAM处理两个小时后，与直接经200μM锰处理组相比，其经TMRM标记后的荧光强度升高，线粒体膜电位水平都增高15％左右(p＜0.05)。 9.小鼠神经元预先经NT3及Z-VAD-FAM处理两个小时后，与直接200μM锰处理组相比，神经元中核分裂及核固缩相数目减少，被脱氧核糖核苷酸末端转移酶标记的DNA断裂数目降低，Annexin V+/PI-和Annexin V+/PI+细胞数目约分别降低10％及12％(p＜0.05)。 10.小鼠经短期腹腔注射染锰后，皮层及海马中NT3与TrkC及其激活的下游信号转导通路相关蛋白及其下游的凋亡蛋白表达水平发生改变。其中:pAkt、pErk1/2、pCREB、Bcl2蛋白含量随着染锰浓度的升高降低(p＜0.05);与之相反，促凋亡蛋白Bax和Cleav-Caspase3含量随着锰处理浓度的升高而增加(p＜0.05)。 11.小鼠经饮水慢性染毒后，皮层中NT3与TrkC及其激活的下游信号转导通路相关蛋白及其下游的凋亡蛋白表达水平发生改变。其中:pAkt、pErk1/2、pCREB、Bcl2蛋白含量随着染锰浓度的升高降低(p＜0.05);与之相反，促凋亡蛋白Bax含量随着锰处理浓度的升高而增加(p＜0.05)。结论： 1.染锰可导致体外培养的小鼠原代神经元形态改变，引起细胞不同程度的损伤，并降低细胞的存活率。染锰也可以导致体外培养的小鼠神经元线粒体膜电位改变并引起细胞凋亡。 2.锰可以影响NT3与TrkC及其激活的下游信号转导通路相关蛋白，并改变其下游凋亡蛋白的表达水平。 3.NT3及Z-VAD-FAM通过改善锰致NT3与TrkC及其激活的下游信号转导通路相关蛋白以及凋亡蛋白的改变水平，从而减轻锰所致的神经毒性作用。收起

关键词 : 金属锰神经毒性神经营养因子神经营养因子受体信号通路蛋白表达

6. 重组人类胶质细胞源神经营养因子的纯化及活性测定

[学位论文] 杜芳首都医科大学 1998年硕士导师: 张澄波共50页

摘要 : 胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对DA能神经元有着特异性营养作用,它可能对中脑多巴胺能神经元的进行性退化疾病(如PD病)有着预防和治疗效果.因此,获取高度纯化并存在生物活性的GDNF将有重要意义.该实验对含有编码人重组GDNF基因的大肠杆菌进行扩增,将... 展开

关键词 : 中脑组织神经营养因子胶质细胞源性神经营养因子眼前房移植

7. 神经营养因子在慢性炎症痛中作用的初步研究

[学位论文] 方明北京大学 2000年博士导师: 韩济生;王韵共83页

摘要 : 研究人员以分子生物学和形态学方法为主要研究手段,以单发佐剂性关节炎大鼠为慢性痛模型(刘红香等,1996),对上述问题进行了探讨,得到了以下主要的实验结果:一、GDNF在痛觉调制中的作用.结果首次表明,GDNF是除神经营养素家庭以外参与痛觉调制的神经营养... 展开

关键词 : 神经营养因子慢性炎症痛

8. 脑源性神经营养因子对人黄素化卵巢颗粒细胞合成雌二醇和孕酮功能调控的研究

[学位论文] 陈炜南方医科大学 2004年硕士导师: 陈士岭;邢福祺共47页

摘要 : 目的该研究观察了BDNF对人卵巢黄素化颗粒细胞合成和分泌甾体激素的影响,其次探讨这种影响通过何种途径实现,研究了BDNF对参与合成甾体激素的酶或其他蛋白质(甾体生成急性调控蛋白mRNA,17<,a>-羟化酶mRNA,芳香化物酶mRNA)表达的影响,初步探讨BDNF的作用机... 展开

关键词 : 脑源性神经营养因子雌二醇孕酮

9. 早期脑出血后细胞凋亡与p75NTR、TrkA的相关性研究

[学位论文] 钟湘平南华大学 2014年硕士导师: 廖勇仕共47页

摘要 : 目的：探讨p75NTR、TrkA在早期人高血压脑出血后的表达，并初步阐明与细胞凋亡的联系。方法：收集脑出血后血肿周围不同部位组织标本；取血肿表面组为A组，半暗带组为B组，脑皮质区组为C组，其中，A组、B组为实验组，C组为对照组；并在A、B、C三... 展开

关键词 : 高血压脑出血细胞凋亡 p75神经营养因子受体神经营养因子受体TrkA

10. BDNF通过TrkB调控食管鳞癌细胞增殖、侵袭转移的作用及机制研究

[学位论文] 闫良英郑州大学 2021年硕士导师: 莫赛军共81页

摘要 : 背景和目的食管癌是消化系统恶性肿瘤之一，也是全球面临的重大健康挑战。食管癌在我国恶性肿瘤发病率中，排名第六位;在恶性肿瘤死亡率中，排名第四位。食管癌主要有两种不同的组织学类型，分别是食管鳞状细胞癌(Esophagealsquamouscellcarcin... 展开背景和目的食管癌是消化系统恶性肿瘤之一，也是全球面临的重大健康挑战。食管癌在我国恶性肿瘤发病率中，排名第六位;在恶性肿瘤死亡率中，排名第四位。食管癌主要有两种不同的组织学类型，分别是食管鳞状细胞癌(Esophagealsquamouscellcarcinomas，ESCC，中文简称食管鳞癌)和食管腺癌。在我国，食管鳞癌占食管癌病例的90％，约为全球的53％。食管鳞癌侵袭性强，且发病率和死亡率较高，癌症患者5年生存率较低，约为20％。目前食管鳞癌是以转移和侵袭为特征的进展期癌症，其预后仍无明显改善。早期的干预和恰当的治疗能有效地抑制食管鳞癌的进展，因此寻找引起食管鳞癌恶性转变所作用的分子靶标，是提高临床食管癌诊疗的当务之急。脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor，BDNF)是神经营养因子的一种，与神经生长因子(nerve growth factor，NGF)、神经营养因子-3(neurotrophin，NT-3)和神经营养因子-4(neurotrophin，NT-4)属同一基因家族，在神经细胞的增殖、分化及细胞凋亡中发挥着重要作用。有研究表明BDNF在许多非神经组织中异常表达，与多种恶性肿瘤发生发展密切相关。酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase receptor B，TrkB)是由原癌基因Trk家族编码的酪氨酸蛋白受体激酶，是一种强效癌基因，为BDNF的特异性受体。BDNF和TrkB在多种恶性肿瘤中表达普遍上调，参与肿瘤细胞的生长、增殖、分化与凋亡等多项过程的调控，如肝癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、结直肠癌等。BDNF与TrkB的结合可以激活Wnt/β-catenin、MAPK/ERK、PI3K、PLC-γ信号通路，信号通路的异常激活对肿瘤细胞的发生发展、增殖分化、迁移侵袭、血管生成、凋亡、放化疗及预后具有直接相关性。然而，BDNF/TrkB在食管鳞癌中的作用研究较少，目前仅有生物信息学及免疫组化分析阐明了BDNF与食管鳞癌的不良预后密切相关。在本研究中，我们探讨BDNF在食管鳞癌组织中的表达情况及其对食管鳞癌细胞增殖、侵袭转移的作用和分子机制。首先利用免疫组化实验和Westernbloting检测BDNF在食管鳞癌组织和食管鳞癌细胞中的表达水平;通过Westernbloting实验筛选出本课题所用食管鳞癌细胞株为低分化的KYSE150和高分化的KYSE30细胞;采用CCK-8分析、平板克隆形成、Transwell小室、流式细胞术和小管形成实验在细胞水平研究BDNF和TrkB抑制剂K252a对食管鳞癌细胞增殖、克隆形成、迁移、侵袭、凋亡及其条件培养基对肿瘤化的人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)管腔形成能力、迁移能力的影响;最后采用KEGG富集分析、免疫组织化学和Westernbloting初步探讨BDNF通过TrkB调控食管鳞癌细胞增殖、凋亡、浸润转移等的分子机制。通过上述研究，揭示BDNF可通过TrkB调控食管鳞癌增殖、迁移和侵袭等的作用和机制，为应用于食管鳞癌靶向治疗的研究提供理论基础。方法 (1)探究BDNF表达与食管鳞癌发展进程的相关性。通过生物信息学分析BDNF在正常食管上皮、癌旁组织和食管癌中的表达情况;通过免疫组化检测BDNF在正常食管上皮组织、癌旁及食管鳞癌组织中的表达情况;通过Westernbloting检测BDNF在正常的食管上皮细胞和不同的食管鳞癌细胞中的表达。 (2)探究BDNF通过TrkB调控食管鳞癌细胞增殖、迁移侵袭、凋亡和血管生成的影响。经BDNF和TrkB抑制剂K252a处理食管鳞癌细胞KYSE150和KYSE30后，通过细胞毒性实验检测对食管鳞癌细胞毒性的影响;通过平板克隆形成检测对食管鳞癌细胞增殖能力的影响;通过流式细胞术检测对食管鳞癌细胞凋亡能力的影响;通过细胞划痕、Transwell实验检测对食管鳞癌细胞及诱导后的HUVECs细胞迁移和侵袭的影响;通过小管形成实验检测对食管鳞癌细胞血管生成的影响。 (3)探究BDNF通过TrkB调控食管鳞癌细胞增殖、迁移侵袭、凋亡等的分子机制。通过KEGG富集分析在食管鳞癌中BDNF/TrkB调控的信号通路;通过免疫组织化学实验检测BDNF/TrkB在食管鳞癌中调控的信号通路相关蛋白的表达水平;通过Westernbloting实验检测BDNF/TrkB在食管鳞癌中调控的信号通路相关蛋白的变化。结果 (1)免疫组织化学染色、生物信息学和Westernbloting实验结果显示，BDNF在食管鳞癌中高表达，在正常食管上皮及癌旁组织中无或低表达;BDNF在正常食管上皮细胞中低表达，在食管鳞癌细胞中高表达。 (2)采用外源性BDNF处理食管鳞癌细胞KYSE150和KYSE30，经检测发现BDNF不仅促进了食管鳞癌细胞的增殖、克隆形成、迁移侵袭、小管形成及抗凋亡能力，还上调了细胞增殖相关蛋白PCNA、CyclinD1和侵袭相关蛋白MMP9、N-cadherin的表达。TrkB抑制剂K252a处理食管鳞癌细胞KYSE150和KYSE30，结果显示K252a抑制了食管鳞癌细胞的增殖、克隆形成、迁移侵袭、小管形成及促进了细胞的凋亡;同时K252a下调了细胞增殖相关蛋白PCNA、CyclinD1和侵袭相关蛋白MMP9、N-cadherin的表达，而E-cadherin蛋白表达升高。 (3)免疫组织化学、KEGG富集分析发现BDNF/TrkB可能通过MAPKJERK和PI3K/AKT途径调控食管鳞癌的增殖凋亡、迁移侵袭及血管生成等;经TrkB抑制剂K252a抑制BDNF/TrkB信号，食管鳞癌细胞中总的ERK1/2和AKT蛋白及磷酸化的ERK1/2和AKT蛋白表达水平下降。结论 1.BDNF高表达与食管鳞癌发展进程密切相关。 2.BDNF促进食管鳞癌细胞的增殖、侵袭转移、血管形成并抑制凋亡。 3.TrkB抑制剂K252a能抑制食管鳞癌细胞的增殖、侵袭转移、血管生成并促进凋亡。 4.BDNF/TrkB轴通过MAPK/ERK和PI3K/AKT途径调控食管鳞癌细胞的增殖凋亡、侵袭转移和血管形成等。收起

关键词 : 食管鳞癌细胞增殖脑源性神经营养因子神经生长因子神经营养因子-3