中国科学技术信息研究所--国家工程技术数字图书馆

[学位论文] 黄剑飞上海海洋大学 2008年硕士导师: 李健共47页

摘要 : 芽孢杆菌是一类可以分泌外杆菌肽、大环内脂、环肽、类噬菌体颗粒等十几种抗菌活性物质，抗菌谱广泛，对多种病原菌的生长具有较强的抑制作用。本试验分为三部分，第一部分从健康牙鲆肠道分离的一株对鳗弧菌具有较强拮抗效果的芽孢杆菌(H-1)，对其进行... 展开芽孢杆菌是一类可以分泌外杆菌肽、大环内脂、环肽、类噬菌体颗粒等十几种抗菌活性物质，抗菌谱广泛，对多种病原菌的生长具有较强的抑制作用。本试验分为三部分，第一部分从健康牙鲆肠道分离的一株对鳗弧菌具有较强拮抗效果的芽孢杆菌(H-1)，对其进行了鉴定；第二部分对芽孢杆菌(H-1)的表面粘附蛋白进行了研究，比较了粘附蛋白对健康和鳗弧菌感染状态下牙鲆肠粘液的粘附能力的差异；第三部分对这株芽孢杆菌粘附能力和拮抗能力的影响因子进行了研究。 1.从健康牙鲆肠道内分离到一株芽孢杆菌(H-1)，和鳗弧菌W-1株进行拮抗实验，结果表明该菌株对鳗弧菌具有较强的拮抗作用(抑菌直径D=25.53mm)。应用形态学、生理生化及16S rDNA序列分析方法对该菌株进行了综合鉴定，结果显示菌株H-1与枯草芽孢杆菌标准菌株同源性高达98％，故将其确定为Bacillus subtilis。 2.以枯草芽孢杆菌(H-1)为试验材料，应用5mol/L LiCl提取其表面蛋白，利用蛋白印迹法鉴定出在枯草芽孢杆菌表面蛋白中分子量为28.6kDa的蛋白质参与了健康和鳗弧菌感染牙鲆肠粘液的粘附过程。同时蛋白印迹法显示，枯草芽孢杆菌全菌蛋白在健康和鳗弧菌感染牙鲆肠粘液中有一个相同的粘附受体，蛋白分子量为13.9kDa；健康个体还有一个粘附受体，分子量是28.9kDa。结果显示，不论鱼体健康与否，枯草芽孢杆菌都可以作为一种外源益生菌在牙鲆消化道内定植和重建其消化道微生态环境。 3.以枯草芽孢杆菌(H-1)为试验材料，研究了pH值、盐度、Ca2+、Mn2+对H-1的粘附能力和拮抗鳗弧菌效果的影响。结果表明pH值为7.0时，枯草芽孢杆菌的粘附能力和抑菌能力都最强；偏酸、偏碱都能减弱H-1的粘附能力和抑菌能力。盐度在20～40‰之间时枯草芽孢杆菌的抑菌能力随着盐度的升高而降低。盐度在20～35‰时，粘附力随着盐度的增加而升高，但超过35‰时，粘附力反而下降。在培养基中添加Ca2+可以增强枯草芽孢杆菌的粘附能力和抑菌能力，而添加Mn2+可以减弱这种粘附力和抑菌能力。收起

关键词 : 枯草芽孢杆菌抗菌效果表面

2. 羊毛织物固定化溶菌酶抗菌整理研究

[学位论文] 胡英俊江南大学 2008年硕士导师: 范雪荣;王强共47页

摘要 : 溶菌酶(lysozyme)是专门作用于微生物细胞壁的水解酶。它广泛分布于动物、植物和微生物中，具有抗菌性强、安全无毒、热稳定性好、作用范围广等优点，在食品、医药、生物工程、化妆品等行业得到了广泛应用。国内外关于溶菌酶固定化的研究报导，大多是... 展开溶菌酶(lysozyme)是专门作用于微生物细胞壁的水解酶。它广泛分布于动物、植物和微生物中，具有抗菌性强、安全无毒、热稳定性好、作用范围广等优点，在食品、医药、生物工程、化妆品等行业得到了广泛应用。国内外关于溶菌酶固定化的研究报导，大多是通过吸附作用或戊二醛交联作用将其固定在无机材料上，而关于将其固定于纺织品表面，并建立一种新型的纺织品抗菌方法还尚不多见。本文首先研究了吸附法和戊二醛交联法对溶菌酶在羊毛织物上的固定化效果，并对这两种固定化工艺进行了优化，在此基础上，对固定化溶菌酶的性质进行了研究。主要内容包括酶的最适温度、最适pH值、热稳定性、操作稳定性、贮存稳定性以及一些添加助剂对酶活力的影响，同时对不同方法固定的溶菌酶进行了一系列表征，结果分析及比较。最后，对固定了溶菌酶的羊毛织物的抗菌性能进行了测试。试验结果表明：溶菌酶通过戊二醛交联固定在羊毛织物上，主要工艺条件为：戊二醛浓度0.2％，交联时间2h，溶菌酶用量5g/L，固定化时间6h，固定化pH值7.0；静态物理吸附法的工艺条件为：固定化pH值7.0，溶菌酶用量5g/L，沉积时间0.5h。溶菌酶经固定化以后，固定化酶的最适温度和游离酶相同，都是40℃；最适pH与游离酶相比有一点偏移，固定化酶为7.0，游离酶为6.0；固定化溶菌酶在一定的条件下，可以被重复使用；固定化酶的热稳定性优于游离酶的热稳定性；固定化酶的贮存稳定性好；抑制剂对于固定化酶活力的影响比游离酶要小；金属离子对于固定化酶的抑制作用要小于游离酶。通过红外、扫描电镜、考马斯蓝染色等技术对经吸附法和交联法在羊毛织物上固定的溶菌酶进行了表征，证实溶菌酶的确固定在羊毛织物上。最终测得在最优工艺条件下整理的羊毛织物抗菌性能良好，交联法的抑菌率高达80.95％，吸附法的为56.19％，且交联法的耐洗涤性好。收起

关键词 : 羊毛织物溶菌酶抗菌效果

3. 基于无机多孔材料的医用抗菌敷料的制备及性能研究

[学位论文] 王斌沈阳理工大学 2023年硕士导师: 常军共108页

摘要 : 本文主要利用硅藻土为载体制备了三种抗菌剂，与聚丙烯酸/聚乙烯醇(PAA/PVA)水凝胶复合制备出抗菌性水凝胶，并研究了其性能，包括载银硅藻土/载银羟基磷灰石(Ag-DE/Ag-HA)抗菌性粉末、载对百里香酚硅藻土、载磺胺嘧啶硅藻土。首先，在制备载银... 展开本文主要利用硅藻土为载体制备了三种抗菌剂，与聚丙烯酸/聚乙烯醇(PAA/PVA)水凝胶复合制备出抗菌性水凝胶，并研究了其性能，包括载银硅藻土/载银羟基磷灰石(Ag-DE/Ag-HA)抗菌性粉末、载对百里香酚硅藻土、载磺胺嘧啶硅藻土。首先，在制备载银硅藻土时，探索了载银硅藻土的最佳合成工艺，结果如下:当紫外辐照硝酸银溶液时间20min,银氨溶液浓度0.3mol/L,反应温度45℃,反应时间60min时制备的载银硅藻土含银量最高，含银量高达12.0％。探索了PAA/PVA水凝胶吸水性的影响因素，结果表明，当聚合温度为50℃,反应时间为28h,丙烯酸与聚乙烯醇的质量比为7∶3,交联剂N-N''亚甲基双丙烯酰胺用量为0.15g时吸水率达到最大值，吸水率为145倍。通过共沉淀法和离子交换法制备了Ag-DE/Ag-HA抗菌性粉末，相对于载银硅藻土，Ag-DE/Ag-HA抗菌性粉末的含银量更高，分别能够达到23.9％和27.3％,杀菌率高达99％。载银硅藻土和Ag-DE/Ag-HA对大肠杆菌(E.coli)和金黄色葡萄球菌(S.aureus)均有明显的抑菌作用，载银硅藻土的最小抑菌浓度(MIC)为250μg/mL,而Ag-DE/Ag-HA抗菌性粉末的MIC更低，为62.5μg/mL,抑菌率能够达到90％以上，含有Ag-DE/Ag-HA抗菌性粉末的PAA/PVA水凝胶的最小抑菌含量为1.0％,具有较好的抗菌效果。其次制备了载对百里香酚硅藻土,并且与PAA/PVA复合制备出抗菌型水凝胶,对产物进行了表征和研究。通过无机改性的硅藻土负载对百里香酚相比于未改性的硅藻土具有更好的负载效果，载对百里香酚硅藻土在不同pH缓冲液中都具有缓释效果，在0.1mol/L的盐酸缓冲液、0.01mol/L氢氧化钠缓冲液和pH为7.2的磷酸盐缓冲液中24h基本释放完毕。通过无机改性的硅藻土负载对百里香酚和未改性硅藻土负载对百里香酚的MIC均为250μg/mL。产物杀菌率高达99％,最小抑菌含量均为1.5％,具有较好的抗菌效果。加入产物的水凝胶吸水率为163倍。最后制备了载磺胺嘧啶硅藻土，并且与PAA/PVA水凝胶复合制备出含载磺胺嘧啶硅藻土的PAA/PVA抗菌型水凝胶，对其进行了表征和性能研究，通过沉淀共混法制备出的载磺胺嘧啶硅藻土对E.coli和S.aureus都具有抑菌作用，抑菌圈的宽度为16mm,杀菌率为99％,MIC为250μg/mL,含有载磺胺嘧啶硅藻土的抗菌性水凝胶的最小抑菌含量为1.5％,具有较好的抗菌效果。适量添加硅藻土能够改善水凝胶的吸水倍率，当添加2％的硅藻上时，水凝胶的吸水率能够达到184倍。收起

关键词 : 医用抗菌敷料抗菌效果无机多孔材料

4. 绵织物纳米银抗菌整理

[学位论文] 邵明东华大学 2006年硕士导师: 周翔共53页

摘要 : 所谓“抗菌”是指在一定时间内抑制细菌生长、繁殖、存活；“抗菌材料”是指在材料中添加抗菌剂,使制品具有内在抗菌性,可以在一定时间内将粘污在材料上的细菌杀死或抑制其繁殖。纳米银抗菌材料是一种新型抗菌材料,具有广谱、耐久、安全的特点。随着人... 展开所谓“抗菌”是指在一定时间内抑制细菌生长、繁殖、存活；“抗菌材料”是指在材料中添加抗菌剂,使制品具有内在抗菌性,可以在一定时间内将粘污在材料上的细菌杀死或抑制其繁殖。纳米银抗菌材料是一种新型抗菌材料,具有广谱、耐久、安全的特点。随着人们对环境质量要求的提高,纳米银抗菌材料具有广阔的市场前景。本文选用纳米银无机抗菌剂对纯棉织物进行整理,确定了抗菌整理的适宜处理工艺,研究了处理后棉织物的物理性能、抗菌效率、表面形态等,并与未处理织物的性能进行了比较。利用细胞超声波粉碎机对纳米银胶液进行预处理,确定了合理的预处理参数,结果表明:粉碎次数为4次以上时,纳米银的平均粒径均小于100nm,增加振荡次数可以有效降低纳米银的粒径和分散指数,使得纳米银颗粒分布均匀。细胞超声预处理得到的不同粒径纳米银,在60℃,40min的条件下浸渍处理棉织物,比较处理后织物的抗菌效率可知:小粒径、低浓度的纳米银胶液处理织物,其抗菌效果能达到大粒径、高浓度纳米银胶液的处理效果。对比浸轧法和浸渍法处理工艺,结果表明:浸渍法处理棉织物的抗菌效果远优于浸轧法。浸轧法中,晾干和汽蒸方式处理织物的断裂强力与断裂延伸度均较未处理织物有明显提高。浸渍法中处理棉织物的抗菌效率可达99.9％。通过对比不同浸渍条件下棉织物的性能,确定纳米银应用于棉织物的抗菌整理工艺为:10μg/mL纳米银胶液,温度60℃,时间40min,浴比1:50。采用SEM扫描电镜、X-射线衍射、折皱回复角、毛细管效应等手段研究了经适宜工艺整理后的织物的性能,结果表明:纳米银粒子在纤维表面有部分聚集,纳米粒子小于纤维孔隙,可以进入纤维内部,整理后织物的抗菌效果和耐水洗牢度均较好,经10次洗涤后织物的抗菌率为95.4％；棉织物在抗菌整理前后的结晶度基本不变,纳米银主要进入纤维的无定形区；弹性恢复较未整理的要好；抗菌处理后棉织物的润湿性下降,并且处理液浓度越高润湿性越差。通过电感耦合等离子体原子发射光谱仪测试抗菌处理后棉织物上的银含量,再结合抗菌棉织物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抗菌效率测试,得出棉织物中纳米银含量在74ppm～82ppm范围内变化时,棉织物的抗菌效率随着银含量的增加而增大,增长率逐渐趋于平缓。织物上银含量大于82ppm时,棉织物对两种细菌的抗菌效率达到99.9％以上；织物上银含量相同时,棉织物对金黄色葡萄球菌的抗菌率明显高于对大肠杆菌的抗菌率。收起

关键词 : 棉织物抗菌整理纳米银抗菌效果

5. 西瓜霜有效发酵菌种筛选及其抗菌有效部位的化学成分研究

[学位论文] 李斌黑龙江中医药大学 2016年硕士导师: 匡海学共70页

摘要 : 西瓜霜（Mirabilitum Praeparatum），也称为西瓜硝或者西瓜白霜，是用葫芦科植物西瓜Citrullus lanatus(Thunb.)Matsumu.et Nakai与芒硝经过制霜法炮制成的霜剂。其性味寒咸，入脾、肺二经。中医理论认为西瓜霜清热泻火，消肿止痛的功效来源于西瓜与... 展开西瓜霜（Mirabilitum Praeparatum），也称为西瓜硝或者西瓜白霜，是用葫芦科植物西瓜Citrullus lanatus(Thunb.)Matsumu.et Nakai与芒硝经过制霜法炮制成的霜剂。其性味寒咸，入脾、肺二经。中医理论认为西瓜霜清热泻火，消肿止痛的功效来源于西瓜与芒硝的共同作用，然而本课题组在其炮制研究中发现，西瓜霜以制霜法炮制，其实是一个发酵的过程，某些耐高盐微生物参与到西瓜霜发酵中，其次生代谢产物具有抗菌活性，可能为西瓜霜的药效物质基础。课题组以中医药基础理论为出发点，结合生物技术方法、微生物免疫学方法和中药化学方法，优化西瓜霜发酵工艺，确定抗菌有效部位，发酵菌种的分离、纯化和鉴定及有效菌种的筛选，并对抗菌有效部位进行化学成分的分离和化合物鉴定等方面进行了探究。主要研究内容如下：为了证明西瓜霜提取物的抗菌有效性，及芒硝对抗菌效果的影响。本文首先采用小鼠体内抗菌实验，证明西瓜霜甲醇提取物在生物体内具有对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的良好抑菌效果，芒硝没有显著的抗菌效果。为满足进一步筛选有效发酵菌种及纯种发酵工艺方面研究的需要，本实验在西瓜霜发酵过程中对发酵液进行取样，对每个阶段的样品进行菌种分离、纯化，并进行鉴定，共得到5株菌，通过形态学和ITS序列进行鉴定，分别鉴定为产朊假丝酵母(Cyberlindnera jadinii)，普通青霉菌(Penicilium commune)，红冬孢酵母菌(Rhodosporidium diobovatum)，匍枝根霉(Rhizopus stolonifer)，产红青霉菌(Penicilium rubens)，5株菌在西瓜霜中均为首次分离。为进一步筛选有效发酵菌种，并探究芒硝在西瓜霜炮制过程中的作用，本文通过纯种发酵，利用纯种发酵液萃取物进行体外抗菌实验，最终筛选出两株具有抗菌效果的菌种分别为普通青霉菌(Penicilium commune)、产红青霉菌(Penicilium rubens)。在不同成分的培养基发酵对比中发现，仅含15%芒硝的培养基萃取物具有抑菌效果。提示芒硝虽然没有直接的抗菌作用，但是在西瓜霜的发酵过程中，芒硝起到了重要的作用。在体内抗菌实验确定了西瓜霜甲醇提取物抗菌有效的基础上，对其进行了系统的分离和化学结构鉴定研究。通过硅柱胶色谱、十八烷基硅烷键合硅胶(ODS)柱色谱和高效液相等分离方法，采用1H-NMR谱、13C-NMR谱等波谱解析，分离并鉴定了6个化合物，其中生物碱类化合物4个：(1),(1S,3S)-1-甲基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸[(1S,3S)-1-methyl-1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid)]、(3),甲基2-[2-甲酰基-5-(甲氧甲基)-一氢吡咯]基丙酸[methyl2-[2-formyl-5-(methoxymethyl)-1H-pyrrol-1-yl]propanoate]、(5),4-(2-甲酰基-5-甲氧基吡咯)基丁酸甲酯[4-(2-formyl-5-methoxy methylpyrrol-1-yl)butyric acid methyl ester]、(6),1-甲基四氢-β-咔啉[1,2,3,4-Tetrahydropyrido[3,4-b]indole-carboxylic]；简单苯丙素类化合物1个：(2),苯甲醇O-(6'-O-β-D-吡喃木糖基)-β-D-吡喃葡萄糖苷[phenylmethyl-6-O-β-D-xylopyranosyl(1→6)-β-D-glucopyranoside]；其他类化合物1个：(4)对羟基苯丙酸甲酯[methyl3-(4-hydroxyphenyl)propionate]、其中2，3，4，5，6均为西瓜霜中首次分离。本文通过药效实验确定了西瓜霜的有效部位为甲醇提取物并对其进行了化学成分的研究，进一步弥补了西瓜霜研究的不足，阐明了西瓜霜的药效物质基础。此外，以微生物的代谢产物为出发点探究西瓜霜炮制的基本原理开辟了炮制学研究的思路，也是对于西瓜霜药效物质基础研究、炮制工艺的规范和质量标准的制定具有重要的促进作用，而且对于揭示传统发酵中药的内涵具有重大意义。收起

关键词 : 西瓜霜炮制工艺化学成分抗菌效果

6. 抗紫外兼具抗菌聚酰胺6纤维的开发

[学位论文] 张榕东华大学 2015年硕士导师: 朱美芳共68页

摘要 : 聚酰胺6(PA6)，因其断裂强度高，耐磨性优异，广泛应用于服装、地毯装饰等领域，尤其是在内衣袜类、安全带、降落伞、帘子布、汽车内饰等方面占有稳定的市场，并且日益发展。功能化改性，特别是多重功能化，将大大提高通用 PA6纤维的价值和应用性能，... 展开

关键词 : 聚酰胺6纤维表面改性共混法抗菌效果

7. 纳米银在织物表面的原位还原及其抗菌效果的研究

[学位论文] 石雪东华大学 2011年硕士导师: 徐红；毛志平共60页

摘要 : 随着科技的发展和人类生活水平的日益提高，人们对生活品质的追求更趋向于环保、健康，纺织品的抗菌问题越来越引起世界各国的高度重视。因此，研制一种安全、耐久、具有普适性的抗菌整理方法对改善人民生活品质是非常有帮助的。本文采用一种生... 展开随着科技的发展和人类生活水平的日益提高，人们对生活品质的追求更趋向于环保、健康，纺织品的抗菌问题越来越引起世界各国的高度重视。因此，研制一种安全、耐久、具有普适性的抗菌整理方法对改善人民生活品质是非常有帮助的。本文采用一种生态处理方法对两种具有代表性的织物:亲水性的纯棉织物和超疏水的涤纶织物进行了抗菌整理，并对其抗菌性能进行了研究。首先利用多巴胺在温和的条件下，可以在多种底物表面发生聚合反应形成聚多巴胺薄膜的性质对织物进行改性处理，使织物表面均匀覆盖多层聚多巴胺薄膜，然后利用在潮湿的环境下具有较好粘附性和还原性的特性，在不加入其他还原剂的情况下，通过一步浸渍工艺将银离子在织物表面原位还原成银纳米粒子，并将其牢固的结合在织物表面，从而获得负载银纳米粒子的抗菌织物。采用X射线光电子能谱和X射线衍射研究了织物表面银的存在状态，用扫描电子显微镜和场发射电镜对聚多巴胺的膜结构和银纳米粒子的粒径及分布状态进行观察，探讨了多巴胺浓度和硝酸银浓度对织物表面银含量的影响，并对整理织物的抗菌耐久性进行了研究。研究结果表明:本方法制备的负载银纳米粒子的织物表面银粒子分布均匀、平均粒径在100nm以下，银含量随着多巴胺浓度或硝酸银浓度的提高而提高，在经受剧烈的皂洗处理时，虽然抗菌织物表面银含量的保留率较低，大约为30％，但银含量的流失主要集中在前10次皂洗过程中，占总共洗脱到皂洗液中银含量的90％左右，而在后续的皂洗过程中，银含量的流失很低，可以证明负载银纳米粒子的织物具有较好的耐久性。在对织物抗菌性进行研究的过程中，发现多巴胺改性织物基本不具有抗菌性，而对于只采用吸附工艺处理的织物，银离子含量较低，抗菌性能较差，且耐洗牢度低。而对于负载银纳米粒子的多巴胺改性织物，在经受30次剧烈的皂洗处理后，抗菌效果仍非常好，杀菌率可达到99.99％。本文实现了以一种浸渍工艺在不同性质底物表面制备载有银纳米粒子抗菌织物的要求，为抗菌整理的普适性奠定了基础。收起

关键词 : 纳米银织物表面原位还原抗菌效果

8. 预处理巨噬细胞膜包被金纳米笼用于细菌感染的治疗&病例报告

[学位论文] 王灿武汉大学 2019年博士导师: 张玉峰共139页

摘要 : 第一部分预处理巨噬细胞膜包被金纳米笼治疗细菌感染实验目的：金纳米笼（gold-silvernanocages,GSNCs）在近红外激光的照射下具有光热效应，由此金纳米笼可以作为一种有效的抗菌剂。同时由于金纳米笼具有中空的内部结构和多孔的壁结构，因此该纳米颗... 展开第一部分预处理巨噬细胞膜包被金纳米笼治疗细菌感染实验目的：金纳米笼（gold-silvernanocages,GSNCs）在近红外激光的照射下具有光热效应，由此金纳米笼可以作为一种有效的抗菌剂。同时由于金纳米笼具有中空的内部结构和多孔的壁结构，因此该纳米颗粒可以作为抗菌药物的载体。而巨噬细胞膜表面存在细菌识别受体，它与细菌中的病原体相关分子模式之间存在一定的相互作用。由此本实验针对以上两种材料，设计了一种新的靶向传递纳米系统，探究巨噬细胞经特定的细菌处理后，巨噬细胞膜上相应的识别受体表达的变化，并进一步探究预处理的巨噬细胞膜包被金纳米笼构成的纳米系统在体内外对细菌的靶向效果以及抗菌效果。实验一细菌预处理后巨噬细胞的特性方法：将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌与巨噬细胞共培养后，以未处理的巨噬细胞作为空白对照，对细菌处理后的巨噬细胞进行TLR2、TLR4的蛋白免疫荧光染色，流式细胞术检测巨噬细胞膜上受体的表达，RT-PCR检测TLR2、TLR4、TLR6在mRNA水平上的表达。结果：细胞免疫荧光和细胞流式分析显示巨噬细胞膜上TLR2和TLR4的表达升高，RT-PCR结果显示TLR2、TLR4、TLR6在mRNA水平上的表达上调。实验二膜包被金纳米笼的表征、光热行为和药物释放特性方法：通过醇还原、金银置换反应制备金纳米笼颗粒，巨噬细胞膜通过超声破碎、梯度离心获得，将两者混匀后通过机械挤压制备出巨噬细胞膜包被金纳米笼。对此纳米颗粒进行一系列的形态和光热表征，并使用模拟药物进行光控脉冲释放。结果：巨噬细胞膜涂层均匀的覆盖在金纳米笼表面，巨噬细胞膜包被纳米颗粒表现出良好的结构稳定性和蛋白质生物稳定性，并展现出优异的光热转换能力和光热转换稳定性。载药后的金纳米笼能够光响应性的脉冲释放药物。实验三膜包被金纳米笼的体外抗菌效果方法：将不同的巨噬细胞膜包被金纳米笼与金葡菌共同孵育，通过流式细胞术检测巨噬细胞膜包被金纳米笼与细菌的结合能力，并从细菌生长曲线、平板菌落计数和细菌死活染色检验能靶向细菌的纳米颗粒在近红外光照射下的抗菌性能。结果：金葡菌预处理的巨噬细胞膜包被金纳米笼与金葡菌的结合率最高，大肠杆菌预处理的次之。在近红外光照下，金葡菌预处理的巨噬细胞膜包被金纳米笼的抗菌效果最佳。实验四膜包被金纳米笼的体内抗菌效果方法： 1.检测静脉注射后不同时间点的血药浓度及器官代谢情况。 2.将装载了荧光的巨噬细胞膜包被金纳米笼局部注射于小鼠皮下脓肿部位，通过小动物荧光成像检测纳米颗粒在感染部位的潴留；局部注射于皮下脓肿部位的巨噬细胞膜包被金纳米笼，在近红外光的照射下，通过感染部位的皮损情况、感染组织菌落计数以及温度上升检测其抗菌效果。 3.将装载了荧光的巨噬细胞膜包被金纳米笼静脉注射于骨髓炎模型小鼠体内，通过小动物荧光成像检测纳米颗粒在感染部位的聚集；全身注射后的巨噬细胞膜包被金纳米笼，在近红外光的照射下，通过感染组织的菌落计数检测其对感染部位的抗菌效果。结果： 1.巨噬细胞膜涂层能够给纳米颗粒通过更长的血液循环时间，主要代谢器官是肝脏和肾脏。 2.金葡菌预处理的巨噬细胞膜包被金纳米笼在金葡菌感染的皮下脓肿处存在最大药物潴留，在近红外光照下，金葡菌预处理的巨噬细胞膜包被金纳米笼的在感染处的抗菌效果最佳。 3.金葡菌预处理的巨噬细胞膜包被金纳米笼可以特异性靶向至金葡菌感染的骨髓炎处，在近红外光照下，金葡菌预处理的巨噬细胞膜包被金纳米笼的在感染处的抗菌效果最佳。结论：本实验开发的金黄色葡萄球菌预处理巨噬细胞膜包被金纳米笼纳米系统具有明显的细菌粘附性，并在体内表现出延长的血液循环时间和良好的生物相容性，通过局部或全身注射均可有效地传递并保留在感染部位，达到良好的抗菌效果。收起

关键词 : 细菌预处理巨噬细胞膜金纳米笼药物传递抗菌效果

9. 红豆杉种子中抗菌成分的筛选及其应用研究

[学位论文] 荣婉菁江苏大学 2023年硕士导师: 余江南共114页

摘要 : 抗生素的使用极大提高了金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus, S. aureus）及大肠埃希菌（Escherichia coli, E. coli）等病原菌所致感染及炎症的治愈率。然而，抗生素的滥用导致了耐药性细菌的出现，单独使用一种抗生素也远达不到良好治疗效果。因... 展开抗生素的使用极大提高了金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus, S. aureus）及大肠埃希菌（Escherichia coli, E. coli）等病原菌所致感染及炎症的治愈率。然而，抗生素的滥用导致了耐药性细菌的出现，单独使用一种抗生素也远达不到良好治疗效果。因此，急需寻求不易产生耐药性且抗菌谱较广的天然抗菌物质，制定两种或多种药物联合抗菌方案以提高单药抗菌性能。红豆杉作为一种天然珍稀植物，其不同部位（枝叶、树皮和根）中活性成分（紫杉烷二萜类、多糖类和甾体类等）具有良好的抗菌、抗炎、抗氧化和抗肿瘤等药理作用，而种子作为红豆杉重要部位，对其活性成分抗菌筛选研究却不多。研究目的：本课题旨在选取重庆巴南区的南方红豆杉（Taxus wallichiana var. mairei, T. wallichiana var. mairei）种子，探究其中活性成分对 S. aureus（CMCC26003）与 E. coli （ATCC25922）抑制作用，制备纳米胶束提高各抗菌成分的溶解度，综合筛选最优抗菌成分，并与小檗碱（berberine, BBR）、青霉素钠（penicillin sodium, PG）和阿莫西林胶囊（amoxilin capsule, AMO）进行联合抗菌，探讨药物之间相互作用并进一步观察其动态杀菌效果。最后，将制备红豆杉种子抗菌手工皂，初步对天然抗菌产品进行探索。这可能为天然物质的抗菌筛选提供研究思路，为天然红豆杉抗菌产品的研发提供理论基础。研究方法：首先，将乙醇作为提取溶剂对红豆杉种子进行加热回流超声提取，以石油醚对红豆杉种子粗提液进行萃取，并通过单因素法考察乙醇浓度、料液比、提取温度、提取时间和提取次数对红豆杉种子粗提物得率影响，筛选最优提取工艺；通过AB-8型大孔吸附树脂（macroreticular resin, MAR）对红豆杉种子粗提物进行分离；为提高AB-8型MAR分离部位（简称AB-8部位）溶解度，通过薄膜分散法制备聚合物胶束，以单因素法筛选最优处方，并对其进行体外评价；采用微量肉汤稀释法（microbroth dilution method, MBD）测定AB-8部位及其聚合物胶束对S. aureus与E. coli的最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration, MIC）以综合筛选最优抗菌部位。其次，通过柱层析法，以硅胶（silica gel, SG）为填料，以二氯甲烷与甲醇混合溶剂为洗脱液进行纯化，将获得不同组分继续进行抗菌筛选，追踪 SG 最优抗菌组分，通过高效液相色谱（high performance liquid chromatography, HPLC）与液质联用（liquid chromatography-mass spectrometry, LC-MS）技术对其进行成分分析；为提高药物的溶解度和抗菌性能，通过薄膜分散法制备纳米混合胶束，以单因素法筛选最优处方，并对其进行体外评价。同时，将斑马鱼作为模式生物对红豆杉种子样品（AB-8 最优抗菌部位及其聚合物胶束与 SG 最优抗菌组分及其纳米混合胶束）进行 72 h 急性毒性评价。另外，为探究红豆杉种子样品分别与 BBR、PG、AMO 的联合抗菌效果，采用微量棋盘法进行联合药敏试验，并通过部分抑菌浓度指数（fraction inhibitory concentration index, FICI）判断药物之间联合效应；采用时间-杀菌曲线（time-killing curve）法观察各联用组0~24 h动态杀菌效果。最后，选择橄榄油、椰子油及AB-8最优抗菌部位聚合物胶束制备红豆杉种子抗菌手工皂，以不同指标对其进行一系列质量评价。研究结果：首先，最佳提取工艺为：乙醇浓度：60%、料液比：2:25、提取温度：70℃、提取时间：6 h、提取次数：3次；获得不同极性AB-8部位为A-1、A-2、A-3、A-4、A-5；为提高A-2~A-5的溶解度，成功制备A-2~A-5聚合物胶束（A-2-PM~A-5-PM）；在一定浓度范围内，综合筛选了 A-1~A-5及 A-2-PM~A-5-PM的抗菌活性，明确了 A-5为最优抗菌部位；A-5-PM 最优处方是 A-5、F68 和 F127 分别为 9 mg、4 mg 和 32 mg；该胶束粒径（partical size, PS）为 23.26±0.12 nm，多分散指数（polydispersion index, PDI）为0.139±0.005，ζ 电位（zeta potential, ZP）为-19.25±0.15 mV；临界胶束浓度（critical micelle concentration, CMC）为7.59×10-2 mg/mL；包封率（encapsulation efficiency, EE）和载药量（drug loading, DL）为95.87%±0.08%和18.53%±0.01%；在7天内稳定性良好。其次，对A-5继续进行纯化，共获得10个组分（A5-1~A5-10），经抗菌筛选确定A5-4与A5-8为SG最优抗菌组分；空白纳米混合胶束（B-MM）最优处方是卵磷脂与胆酸钠均为10 mg，PVP K30为24 mg，而A5-4与A5-8纳米混合胶束（A5-4-MM与A5-8-MM）的最佳载药量均为5 mg；A5-4-MM与A5-8-MM的PS分别为135.43±0.04 nm和105.73±0.08 nm，PDI分别为0.204±0.002和0.203±0.002，ZP分别为-14.73±0.12 mV和-12.65±0.08 mV， CMC 为 1.98×10-2 mg/mL，具有较高的 EE（83.67%±0.07%和 88.33%±0.06%）和 DL （8.53%±0.05%和8.64%±0.01%），在7天内均有良好的稳定性；经分析A5-4可能包含紫杉醇与三尖杉宁碱等10种物质，A5-8中有紫杉醇在内等5种物质。同时，斑马鱼急性毒性结果表明A-5、A-5-PM、B-MM、A5-4、A5-4-MM、A5-8、A5-8-MM、BBR的IC50值分别是29.49、58.03、48.07、26.50、24.71、23.23、17.67、10 μg/mL，其中A-5-PM毒性最小，A5-4-MM与A5-8-MM可能受胆盐影响，其毒性略高于A5-4与A5-8。另外，联合药敏试验结果表明联用组抗菌活性更强，可明显降低药物单用MIC；除A-5与BBR联合抗 S. aureus 呈相加作用外，其余联用组均呈显著协同抗菌作用；在此基础上，各联用组动态杀菌效果明显高于其单用组，尤其是纳米胶束与抗生素联合抗菌作用，且药物相互作用与联合药敏试验结果基本保持一致。最后，红豆杉种子抗菌手工皂最佳配方是：橄榄油12 g，椰子油8 g，NaOH为3.13 g，A-5-PM（A-5：0.20 g）溶液为7.82 mL；质量评价结果表明：该皂成型较好、皂体光滑且硬度适宜；对皮肤刺激较小；水分及挥发物、总游离碱及氯化物含量均符合相关行业标准；冷稳定性较热稳定性更好；具有良好的抗菌活性，尤其是对S. aureus抑制作用。研究结论：天然红豆杉种子中的活性成分对S. aureus及E. coli均有良好的抑制作用，最优抗菌成分为A-5、A5-4和A5-8，其纳米胶束载药系统能成为提高药物溶解度并提升原药抗菌性能的优秀递送体系。而且，红豆杉种子样品与阳性药（尤其是抗生素）联用后极大提高了抗菌性能，这可能将减少抗生素用量，从而减少细菌耐药情况的发生。最后，成功制备了红豆杉种子抗菌手工皂，这将为红豆杉抗菌产品的开发奠定基础，为天然抗菌物质的利用提供新思路。收起

关键词 : 手工皂红豆杉种子活性成分提取工艺抗菌效果

10. 纳米银对牙本质粪肠球菌生物膜的抗菌效果研究

[学位论文] 吴大明武汉大学 2014年博士导师: 范兵共106页

摘要 : 目的:(1)评价纳米银（silver nanoparticles，AgNPs）溶液冲洗对牙本质粪肠球菌(Enterococcus faecalis，E.faecalis)生物膜的抗菌效果;(2)评价AgNPs凝胶封药对牙本质E.faecalis生物膜的抗菌效果;(3)评价AgNPs凝胶处理的牙本质抵抗E.faecalis的附着和... 展开目的:(1)评价纳米银（silver nanoparticles，AgNPs）溶液冲洗对牙本质粪肠球菌(Enterococcus faecalis，E.faecalis)生物膜的抗菌效果;(2)评价AgNPs凝胶封药对牙本质E.faecalis生物膜的抗菌效果;(3)评价AgNPs凝胶处理的牙本质抵抗E.faecalis的附着和生物膜形成的能力;(4)制备并表征介孔生物活性玻璃(mesoporous bioactive glasses，MB Gs)和载银介孔生物活性玻璃(Ag-loaded mesoporous bioactive glasses，Ag-MBGs)，初步评价Ag-MBGs对根管E.faecalis生物膜的抗菌效果。方法:实验一:在牙本质片上构建4周E.faecalis生物膜，然后将96个牙本质片随机均分为4组(n=24)，分别以0.1％AgNPs溶液、2％次氯酸钠(sodium hypochlorite，NaOCl)溶液和生理盐水为冲洗液，使用注射器针头冲洗牙本质E.aecalis生物膜2分钟，未处理标本作为对照组。利用扫描电镜(scanning electron microscopy，SEM)观察每组12个标本E.faecalis生物膜的结构，每组另外12个标本用激光共聚焦扫描显微镜(confocal laser scanning microscopy,CLSM)结合LIVE/DEAD荧光染色法分析E.faecalis生物膜内活菌比，评价0.1％AgNPs溶液冲洗对牙本质E.faecalis生物膜的抗菌效果。实验二:在牙本质片上和牙根锥块内构建4周E.faecalis生物膜，然后将80个牙本质片和40个牙根锥块随机均分为4组（每组20个牙本质片和10个牙根锥块），分别用0.02％AgNPs凝胶、0.01％AgNPs凝胶、氢氧化钙(calcium hydroxide，Ca(OH)2)糊剂和生理盐水封药7天。SEM观察每组10个牙本质片上E.faecalis生物膜的结构，CLSM结合LIVE/DEAD荧光染色法分析每组另外10牙本质片上残留E.faecalis生物膜内活菌比。获取牙根锥块内0～100μm和100～200μn深度的牙本质碎屑，分散、梯度稀释后涂布BHI琼脂培养板，培养24小时后计数菌落形成单位(colony forming units,CFUs)，评价药物对牙本质小管内E.faecalis的抗菌效果。实验三:将200个牙本质片平均分为5组:生理盐水组、Ca(OH)2糊剂组、2％洗必泰(Chlorhexidine，CHX)凝胶组、0.01％和0.02％AgNPs凝胶组。标本经上述药物处理7天后接种E.faecalis悬液，37℃厌氧培养1天或7天。SEM定性评价E.faecalis对牙本质的附着和生物膜形成情况，CLSM结合LIVE/DEAD荧光染色法定量分析牙本质表面附着的E.faecalis总量和活菌比。制备牙本质片20个，分别用0.01％和0.02％AgNPs凝胶封药7天。将牙本质片放入无菌24孔板中，每孔加入1mLddH2O。1天和7天时，分别吸取每组5个孔内的液体，电感耦合等离子原子发射光谱仪测量液体中Ag+浓度。实验四:采用溶剂挥发诱导自组装结合凝胶-溶胶技术合成MBGs，采用离子吸附法制备Ag-MBGs，表征MBGs和Ag-MBGs的理化性能，评价MBGs和Ag-MBGs在Tris-HCl缓冲液中的离子释放特征，以及浸入模拟体液(simulated body fluids，SBF)后的pH值变化情况。在12个根管预备后的单根下颌前磨牙根管内构建4周E.faecalis生物膜，分别用Ca(OH)2糊剂、MBGs和Ag-MBGs封药7天。利用SEM、CLSM结合LIVE/DEAD荧光染色法观察药物处理后根管内的E.faecalis生物膜结构，初步评价Ag-MBGs对根管E.faecalis生物膜的抗菌效果。结果:实验一:经2％NaOCl溶液冲洗的牙本质E.faecalis生物膜结构明显破坏，仅少量的生物膜残留在牙本质表面;0.1％AgNPs溶液冲洗并不能破坏牙本质E.faecalis生物膜结构完整性，生物膜内活菌比低于未处理组(P＜0.05)，但与生理盐水冲洗组无统计学差异(P＞0.05)。实验二:AgNPs凝胶显著破坏牙本质E.faecalis生物膜的结构并杀灭生物膜内细菌。其中0.02％AgNPs凝胶组牙本质E.faecalis生物膜内活菌比、牙本质小管内0～100μm和100～200μm深度的CFUs少于0.01％AgNPs组和Ca(OH)2组(P＜0.05)，后两组又显著少于生理盐水组(P＜0.05)。实验三:生理盐水和Ca(OH)2处理的牙本质表面聚集大量E.faecalis，随着培养时间延长逐渐形成稠密的E.faecalis生物膜;AgNPs凝胶处理的牙本质表面附着的细菌较少，形成的E.faecalis生物膜稀疏;而2％CHX处理的牙本质表面附着的细菌最少。2％CHX组平均细菌总量和活菌比显著低于AgNPs凝胶组(P＜0.05)，后者又显著低于生理盐水组和Ca(OH)2组(P＜0.05);培养1或7天，0.01％和0.02％AgNPs凝胶组的平均细菌总量和活菌比均无明显差异(P＞0.05)。AgNPs凝胶处理后的牙本质浸泡在ddH2O中1天或7天，0.02％AgNPs凝胶组牙本质释放的Ag+量均高于0.01％AgNPs凝胶组(P＜0.05)。0.02％或0.01％AgNPs凝胶组牙本质浸泡在ddH2O中7天释放的Ag+量高于1天，但差异无统计学意义(P＞0.05)。实验四:合成的MBGs为典型的介孔材料:表面光滑均匀平整，内部有规则的介孔通道，Ⅵ型氮气吸附-脱附等温线和H1型滞后环，平均孔径为4.7nm，对应的XRD小衍射角出现三个衍射峰。Ag-MBGs内部保持介孔结构，但介孔通道边缘变得不规整，表面和内部有大量纳米颗粒，EDS能谱证实为Ag元素。MBGs和Ag-MBGs浸泡在SBF中，SBF的pH值轻度上升，并保持稳定;在Tris-HCl中各元素呈缓释状态，释放速率随时间延长而降低。经Ag-MBGs处理的根管E.faecalis生物膜结构破坏明显，仅残留少量细菌在牙本质小管口内;而经MBGs处理的E.faecalis生物膜结构完整，残留大量活菌。有少量Ag-MBGs和MBGs颗粒残留在根管壁上。结论:1.AgNPs对牙本质E.faecalis生物膜的抗菌效果与其应用方式有关。AgNPs溶液冲洗不能破坏牙本质表面E.faecalis生物膜结构，但AgNPs凝胶封药能破坏牙本质表面的E.faecalis生物膜结构，并有效杀灭牙本质表面和牙本质小管内的E.faecalis。2.2％CHX处理的牙本质能产生明显的持续抗菌效果。AgNPs凝胶处理的牙本质浸泡在液体中迅速释放Ag+，不能形成缓释;AgNPs凝胶处理的牙本质与E.faecalis接触早期可导致E.faecalis死亡，但7天后出现E.faecalis对牙本质的附着和生物膜的形成。Ca(OH)2处理的牙本质无持续抗菌效果。3.Ag-MBGs形成Ag缓释系统，对根管内E.faecalis生物膜具有较强的抗菌效果，抗菌效果与其释放的Ag+有关。收起

关键词 : 牙本质纳米银溶液粪肠球菌生物膜抗菌效果