摘要: 肾结石是一种临床上常见病多发病，而肾结石所导致的慢性肾脏病以及终末期肾病已成为一个突出的公共卫生问题。作为肾结石的早期表现，目前还没有有效的预防和治疗肾结晶引起的肾损伤的方法。晶体诱导肾损伤病理形成和晶体物质对肾小管上皮细胞的刺激... 展开 肾结石是一种临床上常见病多发病，而肾结石所导致的慢性肾脏病以及终末期肾病已成为一个突出的公共卫生问题。作为肾结石的早期表现，目前还没有有效的预防和治疗肾结晶引起的肾损伤的方法。晶体诱导肾损伤病理形成和晶体物质对肾小管上皮细胞的刺激有直接的关联，在晶体物质的刺激下，氧化应激的发生会引发肾小管较为明显的炎症反应，发生肾结石的风险也相应增加。近几年发展过程中，很多研究学者对代谢性疾病展开研究和分析，如果罹患泌尿系结石，那么发生代谢性疾病的可能性也明显增加，代谢性疾病的发生和结石有直接的关联。机体的微炎症状态、氧化应激的激活以及上皮间质转化的发生也会对肾结石发生产生影响，肾脏疾病的发病率进而增加，便会导致梗阻性肾病的发生。肾小管上皮细胞在晶体物质的刺激作用下，会分泌一些物质，其中最主要的物质就是骨桥蛋白，也就是OPN，进一步招募炎症细胞如单核-巨噬细胞迁移到病变部位，从而加重结晶部位的炎症反应。结晶的形成是一种生物矿化的过程，骨桥蛋白参与这一过程并发挥重要作用。但调控骨桥蛋白分泌的确切机制尚不清楚。 长链非编码RNA(Long non-coding RNA，lncRNA)其转录长度超过200nt，是非编码RNA的一个重要构成部分。目前已被大量研究证实在多种人类疾病中发挥重要的调控作用，主要表现在从表观遗传学调控角度阐明疾病的发生发展机制。但是仅有少数lncRNA的功能和机制得到了充分的阐明。在肾脏病研究领域，目前已有很多关于lncRNA的研究报道。本课题研究团队前期通过生物芯片筛选了OPN相关的lncRNA基因表达谱，而lncRNA的种属间保守性较差，通过小鼠样本研究得到的lncRNA极为有限。为了进一步探究lncRNA的生物学功能，我们重点关注了芯片数据中OPN相关lncRNA MALAT1在草酸钠结晶肾损伤中的调控作用，以期从基因调控角度为临床防治结晶肾损伤提供指导依据。 目的： 探讨长链非编码RNA MALAT1在草酸钠诱导的结晶肾损伤中的表达变化，生物学功能及其潜在作用机制，为临床上草酸盐所致结晶性肾损伤的防治提供理论依据和治疗靶点。 方法： 1.借助结晶肾损伤模型的构建，把草酸钠作为刺激物质，对肾小管上皮细胞进行刺激，并采用实时荧光定量PCR技术、蛋白免疫印迹分析(western blot)以及荧光原位杂交技术在草酸钠刺激肾小管上皮细胞(HK-2)体外模型中鉴定MALAT1的细胞定位，验证MALAT1及骨桥蛋白OPN的表达水平。 2.采用RNA干扰技术构建MALAT1敲低细胞模型。检测肾小管上皮细胞的细胞增殖活性、细胞粘附、凋亡诱导情况以探究MALAT1在草酸钠诱导的结晶肾损伤中的生物学功能。 3.应用生物信息学技术、双荧光素酶报告系统探究MALAT1在草酸钠结晶肾损伤中调控骨桥蛋白的潜在机制。 结果： 1.成功构建草酸钠刺激肾小管上皮细胞结晶肾损伤细胞模型并且通过实时荧光定量PCR法验证MALAT1在草酸钠结晶肾损伤细胞模型中表达上调。 2.骨桥蛋白在草酸钠结晶肾损伤细胞模型中表达上调;肾小管上皮细胞增殖活力减弱，凋亡诱导增加，干扰MALAT1细胞增殖活力进一步减弱，加重凋亡诱导。 3.基于生物信息学分析及文献检索发现miR-127-5p分别与MALAT1以及骨桥蛋白的3'UTR直接结合。 4.在线lncRNA与miRNA数据库分析及双荧光素酶报告系统验证miR-127-5p介导MALAT1对骨桥蛋白的调控作用。 5.miR-127-5p抑制剂可部分逆转因干扰MALAT1所介导的骨桥蛋白低表达水平。 结论： 通过体外构建人肾小管上皮细胞结晶肾损伤模型证实lncRNA MALAT1通过吸附miR-127-5p调控骨桥蛋白并影响细胞增殖及黏附活性进而参与草酸钠结晶肾损伤的发生过程，能够为探究晶体刺激导致肾损伤疾病的预防和治疗提供可行性经验参考。 收起