摘要: 目的： 本研究基于脑-肠-菌轴理论，观察电针与穴位埋线对高脂饮食诱导的食源性肥胖（Dietinducedobesity，DIO）大鼠肠道菌群及血清中PYY、CCK、GLP-1和Ghrelin含量的影响，旨在探讨电针与穴位埋线对肠道菌群及脑肠肽的影响，为临床治疗肥胖症提供... 展开 目的： 本研究基于脑-肠-菌轴理论，观察电针与穴位埋线对高脂饮食诱导的食源性肥胖（Dietinducedobesity，DIO）大鼠肠道菌群及血清中PYY、CCK、GLP-1和Ghrelin含量的影响，旨在探讨电针与穴位埋线对肠道菌群及脑肠肽的影响，为临床治疗肥胖症提供更多的理论依据，有利于促进电针与穴位埋线治疗肥胖症在临床上的应用与推广。 方法： 将50只4周龄SPF级SD大鼠（雌雄各25只）适应性喂养1周后，随机分为普通饲料组8只（雌雄各4只）和高脂饲料组42只（雌雄各21只），高脂饲料组大鼠的体质量超出同期普通饲料组大鼠平均体质量的20%为肥胖大鼠造模成功的标准。喂养6周后，雄性大鼠造模成功12只，喂养8周后，雌性大鼠造模成功12只，共24只大鼠造模成功。将造模成功的24只大鼠随机平均分为模型组（M组）、电针组（E组）和穴位埋线组（A组）每组8只DIO大鼠（雌雄各4只）；普通饲料组为空白组（B组），8只大鼠（雌雄各4只）。电针组与穴位埋线组均取“天枢”穴和“丰隆”穴进行干预，电针组使用频率为3Hz-8Hz，强度为0.5-1mA的疏密波干预30min，1次/d，连续6d，休息1d，共28d，左右两侧穴位交替使用；穴位埋线组使用7号一次性使用埋线针15度平刺后，边退针边将5mm的4-0PDO线推入穴位，使线体完全置于大鼠体内脂肪层，针体退到皮下时快速出针并用无菌棉球按压针孔，1次/14d，共28d。以大鼠的体质量、Lee’s指数和摄食量评价电针与穴位埋线减肥的整体效应，使用16SrDNA扩增子测序方法对各组大鼠的肠道菌群进行检测，运用ELISA检测各组大鼠血清中PYY、CCK、GLP-1和Ghrelin含量。 结果： 1.电针与穴位埋线减肥整体效应评价 造模前，普通饲料组大鼠和高脂饲料组大鼠之间的体质量与Lee’s指数均无明显差异（P＞0.05），分别给予两组大鼠普通饲料或高脂饲料喂养。造模后，与普通饲料组比较，高脂饲料组大鼠的体质量与Lee’s指数均明显升高（P＜0.05）。通过电针与穴位埋线干预后，体质量方面，与模型组比较，电针组与穴位埋线组DIO大鼠的体质量均明显减少（P＜0.05）；Lee’s指数方面，与模型组比较，电针组与穴位埋线组DIO大鼠的Lee’s指数均显著降低（P＜0.01）；摄食量方面，与模型组比较，电针组与穴位埋线组DIO大鼠的摄食量均显著降低（P＜0.01）。电针组与穴位埋线组进行比较，两者对DIO大鼠体质量、Lee’s指数和摄食量的影响无明显差异（P＞0.05）。 2.电针与穴位埋线对肠道菌群的影响 （1）ASVs 空白组中特有的ASVs个数为2553，模型组中特有的ASVs个数为2904，电针组中特有的ASVs个数为2636，穴位埋线组中特有的ASVs个数为1082。 （2）门、科、属水平上肠道菌群的相对丰度 在门水平上，厚壁菌门（Firmicutes）和拟杆菌门（Bacteroidota）所占比例最大。空白组中厚壁菌门占29.08%，拟杆菌门占56.65%；模型组中厚壁菌门占56.57%，拟杆菌门占21.72%；电针组中厚壁菌门占35.08%，拟杆菌门占45.74%；穴位埋线组中厚壁菌门占36.65%，拟杆菌门占48.28%。与空白组比较，模型组肠道菌群中厚壁菌门、变形菌门（Proteobacteria）、广古菌门（Euryarchaeota）、Desulfobacterota、放线菌门（Actinobacteria）、Campilobacterota和酸杆菌门（Acidobacteria）相对丰度增加，拟杆菌门（Bacteroidota）和Patescibacteria相对丰度减少，厚壁菌门与拟杆菌门的比值（F/B）升高。通过电针与穴位埋线干预后，与模型组比较，电针组与穴位埋线组肠道菌群中厚壁菌门、变形菌门、广古菌门、Desulfobacterota和放线菌门的相对丰度均减少，拟杆菌门、Patescibacteria和疣微菌门（Verrucomicrobiota）相对丰度均增加，F/B的比值均降低，其相对丰度逐渐趋于空白组。 在科水平上，与空白组比较，模型组肠道菌群中普雷沃氏菌科（Prevotellaceae）、Muribaculaceae、Saccharimonadaceae和乳杆菌科（Lactobacillaceae）相对丰度减少，毛螺球菌科（Lachnospiraceae）、Oscillospiraceae和拟杆菌科（Bacteroidaceae）相对丰度增加。通过电针与穴位埋线干预后，与模型组比较，电针组与穴位埋线组肠道菌群中普雷沃氏菌科、Muribaculaceae、Saccharimonadacea、Akkermansiaceae和拟杆菌科相对丰度均增加，毛螺球菌科、Oscillospiraceae和乳杆菌科相对丰度均减少，其中乳杆菌科相对丰度在模型组的基础上进一步减少，并且电针可使琥珀菌科（Succinivibrionaceae）相对丰度增加，穴位埋线可使肠杆菌科（Enterobacteriaceae）相对丰度增加。 在属水平上，与空白组比较，模型组肠道菌群中普氏菌属（Prevotella）、Muribaculaceae、拟普雷沃氏菌属（Alloprevotella）、Candidatus_Saccharimonas、乳杆菌属（Lactobacillus）和Prevotellaceae_UCG-003相对丰度减少，拟杆菌属（Bacteroides）和假单胞菌属（Pseudomonas）相对丰度增加。通过电针与穴位埋线干预后，与模型组比较，电针组与穴位埋线组肠道菌群中普氏菌属、Muribaculaceae、Candidatus_Saccharimonas、Akkermansia、Prevotellaceae_UCG-003和拟杆菌属相对丰度均增加，假单胞菌属和乳杆菌属相对丰度均减少，其中乳杆菌属相对丰度在模型组的基础上进一步减少，并且电针可使厌氧螺菌属（Anaerobiospirillum）相对丰度增加。 （3）Alpha多样性分析 Dominance、Shannon和Simpson指数显示，模型组物种的多样性和均匀性均高于空白组，Chao1指数显示模型组中所含的物种总数最高。通过电针与穴位埋线干预后，电针组与穴位埋线组肠道菌群物种的多样性和均匀性均降低，所含的物种总数也都降低，并且穴位埋线组降低得更为显著。 （4）Beta多样性分析 通过PCoA图可以看出空白组和模型组肠道菌群结构之间存在较大的差异，有明显的分离趋势，通过电针与穴位埋线干预后，电针组和穴位埋线组肠道菌群结构逐渐趋向于空白组。 （5）组间群落结构差异分析 Adonis检验结果显示，模型组与空白组、电针组和穴位埋线组之间肠道菌群结构存在明显差异（P＜0.05），穴位埋线组与空白组之间肠道菌群结构也存在明显差异（P＜0.05），空白组与电针组、穴位埋线组与电针组之间肠道菌群结构没有明显差异（P＞0.05）。 T-test检验显示，模型组与空白组、电针组和穴位埋线组之间肠道菌群结构最具有显著差异的是厚壁菌门和拟杆菌门（P＜0.05），模型组与空白组比较，厚壁菌门显著增为加，拟杆菌门显著减少（P＜0.01）。电针组和穴位埋线组与模型组比较，均表现拟杆菌门显著增加（P＜0.01），电针组厚壁菌门明显减少（P＜0.05），穴位埋线组厚壁菌门显著减少（P＜0.01）。穴位埋线组与空白组之间存在明显差异的物种是Cyanobacteria，穴位埋线组中Cyanobacteria明显减少（P＜0.05）。 （6）体质量与厚壁菌门和拟杆菌门的相关性分析 相关性分析显示体质量与厚壁菌门相对丰度呈显著正相关关系（r＝0.7264，P＝0.0014），体质量与拟杆菌门相对丰度呈显著负相关关系（r＝-0.6851，P＝0.0034）。 3.电针与穴位埋线对脑肠肽的影响 （1）电针与穴位埋线对血清中PYY、CCK、GLP-1和Ghrelin的影响 与空白组比较，模型组血清中PYY、CCK、GLP-1和Ghrelin含量均显著下降（P＜0.01），通过电针与穴位埋线干预后，与模型组比较，电针组和穴位埋线组血清中PYY、CCK和Ghrelin含量均显著升高（P＜0.01），GLP-1含量明显升高（P＜0.05）。与电针组比较，穴位埋线组血清中PYY和Ghrelin含量显著升高（P＜0.01），血清中CCK和GLP-1含量无明显差异（P＞0.05）。 （2）体质量与血清中PYY、CCK、GLP-1和Ghrelin的相关性分析 相关性分析显示体质量与血清中PYY、CCK、GLP-1和Ghrelin含量呈显著负相关关系（r＝-0.7140，P＝0.0019；r＝-0.7531，P＝0.0011；r＝-0.7403，P＝0.0015；r＝-0.7520，P＝0.0012）。 （3）厚壁菌门与血清中PYY、CCK、GLP-1和Ghrelin的相关性分析 相关性分析显示厚壁菌门与血清中PYY、GLP-1和Ghrelin含量呈显著负相关关系（r＝-0.6857，P＝0.0034；r＝-0.7736，P＝0.0007；r＝-0.7161，P＝0.0024），厚壁菌门与血清中CCK含量呈明显负相关关系（r＝-0.5982，P＝0.0160）。 （4）拟杆菌门与血清中PYY、CCK、GLP-1和Ghrelin的相关性分析 相关性分析显示拟杆菌门与血清中PYY、CCK、GLP-1和Ghrelin含量呈显著正相关关系（r＝0.7589，P＝0.0007；r＝0.7722，P＝0.0007；r＝0.9033，P＜0.0001；r＝0.7843，P＝0.0005）。 结论： 1.电针与穴位埋线均可有效降低DIO大鼠的体质量、Lee’s指数和摄食量，两者之间无明显差异。 2.电针与穴位埋线对紊乱的肠道菌群有良性调节作用。电针与穴位埋线均能使DIO大鼠肠道菌群中的厚壁菌门相对丰度减少，拟杆菌门相对丰度增加，F/B的比值降低，两者之间无明显差异。 3.电针与穴位埋线均能升高DIO大鼠血清中PYY、CCK、GLP-1和Ghrelin的含量，并且穴位埋线对DIO大鼠血清中PYY和Ghrelin含量的影响优于电针。 收起