摘要: 目的: 探讨通腑理气汤(TFLQ)治疗胃癌(GC)的作用机制。 方法: 第一部分:TFLQ作用于GC的网络药理学分析 通过TCMSP数据库、HERB数据库筛选TFLQ的活性成分及靶点;通过Genecards数据库、OMIM数据库获得GC潜在治疗靶点;Venn图获得TFLQ-GC交集... 展开 目的: 探讨通腑理气汤(TFLQ)治疗胃癌(GC)的作用机制。 方法: 第一部分:TFLQ作用于GC的网络药理学分析 通过TCMSP数据库、HERB数据库筛选TFLQ的活性成分及靶点;通过Genecards数据库、OMIM数据库获得GC潜在治疗靶点;Venn图获得TFLQ-GC交集靶点;使用软件Cytoscape3.9.1进行绘制“中药-活性成分-靶点”图;通过STRING构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络分析TFLQ与GC的靶点互作，Cytoscape3.9.1进行核心基因筛选与可视化分析;使用Metascape数据库和BioLadder生信云平台对TFLQ治疗GC的基因本体(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)进行富集分析;使用AutoDock1.5.6软件和PyMOL软件对TFLQ活性成分与核心基因进行分子对接和可视化处理。 第二部分:TFLQ作用于GC的体外及体内实验 本研究将TFLQ作用于BGC823细胞及细胞皮下接种后的BALB/c裸鼠，以验证网络药理学分析。通过CCK8实验分别在24h、48h及72h检查TFLQ对细胞生长抑制作用;克隆形成实验来对TFLQ影响BGC823细胞的克隆形成能力进行检测;通过划痕实验来对TFLQ影响BGC823细胞的迁移能力进行检测;通过裸鼠皮下肿瘤实验检测TFLQ的体内抑瘤效果;通过Western blotting和免疫组化来对BALB/c裸鼠皮下GC组织中的PI3K/AKT/mTOR信号通路和相关蛋白表达水平进行检测。 结果: 网络药理学分析结果: 1.TFLQ预测到了 289个对应的靶点，获得12261个与GC治疗相关的靶点,TFLQ治疗GC的潜在作用靶点158个。 2.TFLQ主要活性成分有槲皮素、山奈酚、木犀草素、豆甾醇、β-谷甾醇等;PPI分析显示，TFLQ治疗GC的关键靶点有TNF、VEGFA、IL6、IL1β等。 3.GO富集分析显示，BP分析获得1604个条目，CC分析获得78个条目，MF分析获得161个条目;KEGG富集分析显示，富集到202条信号通路，TFLQ治疗GC的主要信号通路有TNF、IL-17和PI3K/AKT等通路。 体外和体内实验结果: 1.CCK8实验表明TFLQ浓度依赖性抑制BGC823的体外增殖;集落形成实验发现，TFLQ对细胞长期存活能力与克隆形成能力具有浓度依赖性抑制;划痕实验发现，TFLQ对BGC823细胞迁移的抑制效果与药物浓度及时间正相关。 2.裸鼠皮下肿瘤实验发现,TFLQ浓度依赖性抑制BALB/c裸鼠皮下肿瘤生长,卡培他滨与TFLQ具有协同作用;Western blotting和免疫组化实验表明，TFLQ抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的活化，促进BGC823细胞凋亡，调控PI3K/AKT/mTOR信号通路是TFLQ治疗胃癌的作用机制之一。 结论: TFLQ通过多成分、多靶点、多通路协调治疗GC,调控PI3K/AKT/mTOR信号通路是TFLQ治疗GC的作用机制之一。 收起