摘要: 马尔尼菲篮状菌（Talaromycesmarneffei,TM）在25℃时呈菌丝相生长，产生分生孢子；37℃体外培养或者感染人体后转化为致病性酵母相，属于条件致病菌。它极容易侵犯免疫功能低下或缺陷的人群，尤其是HIV阳性患者，可引发致命的马尔尼菲篮状菌病（Tala... 展开 马尔尼菲篮状菌（Talaromycesmarneffei,TM）在25℃时呈菌丝相生长，产生分生孢子；37℃体外培养或者感染人体后转化为致病性酵母相，属于条件致病菌。它极容易侵犯免疫功能低下或缺陷的人群，尤其是HIV阳性患者，可引发致命的马尔尼菲篮状菌病（TalaromycesMarneffei，TSM），如果不及时治疗，病死率极高。该病主要在东南亚、我国南方尤其是广东、广西和香港等呈区域性流行。当其产生分生孢子时，人类主要通过鼻腔吸入，然后经过气管到达肺部，继而进入血液循环从而引起全身感染。以往的研究显示，这种致病真菌在酵母相可表达多种特异性毒力因子，从菌丝相转变为酵母相的过程与其发挥致病性密切相关。马尔尼菲篮状菌从菌丝相向致病性酵母相的转变不仅在细胞形态方面发生变化，在抗原分子、毒性特征的表达和细胞壁的组成成分等方面也发生相应的改变。但马尔尼菲篮状菌双相转换机制及其致病机理尚未研究清楚。 目的：本研究计划初步探索细胞完整性信号通路中差异性表达的Wsc1、Wsc2和Mid2基因的功能，尝试阐明马尔尼菲篮状菌在细胞信号通路中与致病性中的调控作用机制。本研究结果可为深入了解马尔尼菲篮状菌细胞壁完整性信号通路和致病分子机制、马尔尼菲篮状菌临床治疗和药物的开发提供科学依据。 方法：通过同源重组方法将目的基因进行敲除，从而获得基因突变株。用含有荧光白、刚果红、SDS、山梨糖醇、氯化钠、氯化钾、过氧化氢、亚硝酸钠、两性霉素B、氟康唑、卡泊芬净和米卡芬净的培养基同时培养对照菌株和基因缺失突变株，观察它们之间的生长形态、生长方式、产孢情况以及孢子萌发等是否有差别，尝试初步探索细胞壁信号通路上Wsc1、Wsc2和Mid膜传感器的作用。 结果：（1）目的基因Wsc1、Wsc2和Mid2被成功敲除；（2）与Spm4相比，高温（39℃）条件下，ΔWsc1、ΔWsc2、ΔMid2突变株敏感性增强；（3）相比Spm4，ΔWsc1、ΔWsc2、ΔMid2突变株对荧光白、刚果红、SDS敏感性下降；（4）在37℃条件下，ΔWsc2对KCl的敏感性稍增强；（5）ΔWsc1、ΔWsc2突变株对卡泊芬净敏感性增强，ΔWsc1表现更为明显；（6）ΔWsc1突变株对米卡芬净敏感性增强。 结论：（1）Wsc1、Wsc2和Mid2基因可能是马尔尼菲篮状菌提高温度耐受性所需要的，上述过程可能通过细胞壁完整性信号通路调控；（2）马尔尼菲篮状菌Wsc1、Wsc2和Mid2基因参与调控细胞壁胁迫物质荧光白、刚果红和SDS敏感性；（3）马尔尼菲篮状菌Wsc1、Wsc2和Mid2参与抗真菌药物调控，Wsc1基因可能是棘白霉素类抗真菌药的关键靶基因。 收起