摘要: 创伤性脑损伤（TBI）后相关部位会出现神经细胞的坏死、炎性反应以及神经营养因子的缺乏等改变，这些因素会导致患者出现难治性神经功能障碍。细胞移植的应用为改善脑损伤后神经功能障碍提供了新的希望。有研究表明神经干细胞（NSCs）联合神经营养因子... 展开 创伤性脑损伤（TBI）后相关部位会出现神经细胞的坏死、炎性反应以及神经营养因子的缺乏等改变，这些因素会导致患者出现难治性神经功能障碍。细胞移植的应用为改善脑损伤后神经功能障碍提供了新的希望。有研究表明神经干细胞（NSCs）联合神经营养因子3（NT-3）基因修饰的嗅鞘细胞（OECs）移植能改善TBI后神经功能受损情况。 目的： 探讨NSCs联合NT-3基因修饰的OECs（NT-3-OECs）移植对大鼠TBI后神经生长因子（NGF）表达的影响。 方法： 1.动物分组：选取成年SD大鼠100只随机分为五组：Sham组、TBI组、NSCs治疗组、NT-3-OECs治疗组、NSCs联合NT-3-OECs治疗组。 2.OECs和NSCs的原代培养：从新生乳鼠脑组织的海马体及嗅球组织提取并培养NSCs和OECs。 3.构建联合NT-3基因修饰的OECs：载有NT-3基因的慢病毒转染OECs，运用ELISA法检测培养皿中上清液NT-3的含量。 4.造模与细胞移植：各组采用改良Feeney DM制作颅脑损伤模型。造模1d后进行细胞移植，分别将10ul相应细胞悬液或生理盐水注入损伤灶。 5.大鼠神经功能缺损评分：按照大鼠改良神经功能缺损评分（mNSS）的标准，于移植后1d、7d、14d、28d行评分，来评价大鼠神经功能缺损程度。 6.HE染色：对各组大鼠麻醉，灌注，断头取脑，石蜡包埋脑组织，切片备用。按照说明书进行HE染色，镜下观察拍照。 7.ELISA测定：取用移植后7d的大鼠脑组织，ELISA法测定炎性因子IL-6、IL-1β及NGF蛋白的表达。 8.免疫组化：通过免疫组织化学染色的方式检测移植后7d的大鼠脑组织中p75、Nestin及NGF蛋白的表达。 9.统计学方法：采用SPSS21.0统计软件分析，计数资料采用均值±标准差表示，两组间用t检验进行比较，多组间采用单因素方差进行比较，以P＜0.05为差异具有统计学意义。 结果： 1.经过慢病毒转染后的OECs培养基中NT-3的含量高于未转染的OECs（P＜0.05）。 2.移植28d，联合组与TBI组、NSCs组、OECs组比较，mNSS评分降低（P＜0.05）。 3.移植28d，联合组较TBI组、NSCs组及OECs组比较，神经细胞排列相对规整，细胞肿胀减轻，空洞修复，核仁清晰。 4.移植7d，与模型组、NSCs组、OECs组比较，联合组的IL-6、IL-1β表达水平降低（P＜0.05），NGF蛋白含量增加（P＜0.05）。 5.移植28d，联合组中p75（标记OECs）及Nestin（标记NSCs）阳性的细胞分布范围更广。联合组的NGF阳性结果显著高于TBI组、NSCs组、OECs组（P＜0.05）。 结论： NSCs和NT-3-OECs联合移植可通过提高NGF蛋白表达水平，减轻损伤灶区域炎症反应，促进神经功能恢复，从而达到神经保护和修复作用。 收起