摘要: 背景 弥漫大B细胞淋巴瘤（diffuselargeBcelllymphoma,DLBCL）是最常见的非霍奇金淋巴瘤，近年来在我国发病率逐渐上升。DLBCL的一线标准治疗方案为R-CHOP（利妥昔单抗、环磷酰胺、阿霉素、长春新碱和泼尼松），60%-70%的患者经过此方案治疗后可达... 展开 背景 弥漫大B细胞淋巴瘤（diffuselargeBcelllymphoma,DLBCL）是最常见的非霍奇金淋巴瘤，近年来在我国发病率逐渐上升。DLBCL的一线标准治疗方案为R-CHOP（利妥昔单抗、环磷酰胺、阿霉素、长春新碱和泼尼松），60%-70%的患者经过此方案治疗后可达临床治愈，但仍有约三分之一的患者治疗效果较差，因此亟需深入研究DLBCL的分子机制，探寻新型治疗药物及靶点。近年来，研究者发现一些抑癌基因通过启动子高甲基化驱动表达下调在肿瘤的产生和演进过程中发挥着重要作用。DNA启动子甲基化具有可逆性的特点，因此基于DNA启动子去甲基化的表观遗传学药物治疗研究成为热点。地西他滨（decitabine,DAC）是一种可以逆转DNA启动子甲基化的表观遗传学药物，研究表明地西他滨对DLBCL具有良好的治疗作用，部分基因启动子甲基化水平的改变可能参与了地西他滨的抗肿瘤过程，但具体有哪些靶分子在此过程中发挥重要作用尚不完全清楚。研究表明，抑癌基因原钙粘蛋白10（protocadherin10,PCDH10）在多种淋巴瘤细胞系中出现启动子高甲基化导致表达下调，且启动子高甲基化介导的PCDH10表达下调对淋巴瘤细胞化疗耐药有促进作用。但PCDH10在DLBCL组织中的表达情况、启动子甲基化状态及与临床病理特征相关性，是否参与地西他滨对DLBCL的抗肿瘤作用，尚不完全清楚。 目的 本研究旨在探讨PCDH10在DLBCL组织中的表达情况与启动子甲基化状态，并探究DAC对LY8细胞增殖、凋亡的影响，DAC对PCDH10启动子甲基化状态的改变，为探索DLBCL的分子机制和完善DLBCL的临床诊疗策略提供实验理论依据。方法 1.免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）法检测DLBCL石蜡标本中PCDH10蛋白的表达，甲基化特异性PCR（methylationspecificPCR，MSP）法检测DLBCL石蜡标本中PCDH10基因启动子甲基化状态，并分析启动子甲基化状态与患者临床病理特征的相关性。 2.运用CCK-8法检测不同浓度地西他滨（0.625μmol/L、1.25μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L）干预LY8细胞的增殖抑制率；采用流式细胞仪检测地西他滨干预LY8细胞的凋亡率。 3.MSP法检测地西他滨作用于LY8细胞后PCDH10基因启动子甲基化状态的改变；荧光定量PCR法检测地西他滨作用于LY8细胞后PCDH10基因mRNA表达水平的改变；WesternBlotting法检测地西他滨作用于LY8细胞后PCDH10蛋白及Caspase-3等凋亡相关蛋白表达水平的改变。 结果 1.DLBCL石蜡样本组织中PCDH10表达阳性率为29.0%（16/55），显著低于增生淋巴结组织65.2%（15/23）（P＜0.05）。 2.DLBCL石蜡样本组织中PCDH10基因启动子甲基化阳性率为72.7%（40/55），显著高于增生淋巴结组织26.1%（6/23）（P＜0.05），且DLBCL中PCDH10基因启动子甲基化阳性与LDH水平、Ki-67表达水平、AnnArbor分期和国际预后评分指数（IPI）均相关（P＜0.05），而与患者性别、年龄、有无骨髓侵犯均无关（P＞0.05）。 3.PCDH10基因启动子甲基化的DLBCL组织中，PCDH10表达阳性率为7.5%（3/40），显著低于PCDH10基因启动子非甲基化DLBCL组织中阳性表达率86.7%（13/15），差异具有统计学意义（P＜0.05）。 4.CCK-8法检测增殖抑制率：0.625μmol/L、1.25μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L地西他滨干预LY8细胞24h增殖抑制率分别为（12.5±0.29）%、（21.97±0.12）%、（34.53±0.33）%、（39.93±0.25）%，48h分别为（29.83±0.83）%、（43.27±0.25）%、（55.8±0.36）%、（62.9±0.29）%，72h分别为（35.97±0.29）%、（57.47±0.31）%、（69.03±0.74）%、（79.17±0.82）%，提示地西他滨干预后LY8细胞增殖抑制率呈时间及浓度依赖性增加（P＜0.05）。 5.流式细胞仪检测凋亡：2.5μmol/L地西他滨处理LY8细胞48h后凋亡率为（38.41±0.08）%，显著高于未加药组（8.36±0.13）%（P＜0.05）。 6.地西他滨作用LY8细胞后，PCDH10基因启动子非甲基化状态明显增高，PCDH10基因mRNA及蛋白表达增加；凋亡相关蛋白Caspase-3和Bax表达增加，Bcl-2表达减低。 结论 1.DLBCL组织中存在PCDH10基因启动子高甲基化伴低表达，且PCDH10基因启动子高甲基化与DLBCL患者不良预后相关。 2.PCDH10基因启动子甲基化可导致PCDH10表达下调，地西他滨可以通过逆转LY8细胞中PCDH10基因启动子甲基化状态，发挥抑制增殖和促进凋亡的作用。 收起