摘要: 目的:抑癌基因异常甲基化不仅参与了胃癌的发生发展,与胃癌细胞对化疗药物的敏感性也密切相关。目前,虽然随着新的化疗药物的不断发展,仍然有众多胃癌患者因为对化疗药物不敏感而导致肿瘤复发或转移,以至于患者生存期缩短及生活质量不高。因此,从表观... 展开 目的:抑癌基因异常甲基化不仅参与了胃癌的发生发展,与胃癌细胞对化疗药物的敏感性也密切相关。目前,虽然随着新的化疗药物的不断发展,仍然有众多胃癌患者因为对化疗药物不敏感而导致肿瘤复发或转移,以至于患者生存期缩短及生活质量不高。因此,从表观遗传学角度出发,寻求新的胃癌治疗分子靶点,去甲基化药物与化疗药物联合使用,可能是胃癌患者化疗药物选择的新方向。为此,探讨甲基化抑制剂地西他滨联合化疗药物5-氟尿嘧啶和紫杉醇对胃癌SGC-7901细胞的增殖和凋亡的影响,观察地西他滨是否能协同化疗药物抗肿瘤。除此之外,为进一步探讨地西他滨在体内试验中的协同抗肿瘤作用,建立胃癌裸鼠异体移植瘤模型并观察地西他滨和化疗药物单独或联合使用对裸鼠肿瘤体积生长的影响,并检测未加药物处理的对照组和各用药组抑癌基因E-cadherin甲基化状态及其表达情况,以期从分子水平探讨甲基化抑制剂地西他滨对化疗药物5-氟尿嘧啶联合紫杉醇的协同抗肿瘤作用机制。 方法:应用MTS方法检测不同浓度梯度的地西他滨组和化疗药物组(5-氟尿嘧啶联合紫杉醇)单独或联合应用24,48及72h对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;并采用流式细胞仪检测地西他滨单独或联合化疗药物处理胃癌SGC-7901细胞72h后对细胞凋亡的影响。建立胃癌裸鼠异体移植瘤模型,裸鼠瘤体直径长至5-7mm时,将裸鼠随机分为不加任何药物的对照组、地西他滨组、化疗药物5-氟尿嘧啶联合紫杉醇组以及地西他滨联合化疗药物组,分组后共观察7周,每两天记录一次裸鼠肿瘤长短径,计算裸鼠体积大小。至实验结束后,取裸鼠胃癌组织并采用MSP方法检测各组抑癌基因E-cadherin甲基化状态,应用RT-PCR方法和Western Blot方法分别检测E-cadherin基因mRNA和蛋白表达情况。 结果:地西他滨对胃癌SGC-7901细胞的半数有效浓度为10.88μM,对胃癌细胞的抑制作用呈时间和浓度的依赖性。5-氟尿嘧啶1.92μM联合紫杉醇0.15μM在12,24及72h对胃癌细胞增殖抑制率分别为19.38%,30.3%和42.86%;当地西他滨1.67μM联合5-氟尿嘧啶289μM及紫杉醇0.1μM时,在12,24及72h对胃癌细胞增殖抑制率较前两组均显著升高,分别为25.64%,66.6%和73.57%(P<0.05)。5-氟尿嘧啶联合紫杉醇组作用于胃癌SGC-7901细胞72h,细胞凋亡率为32.61%,地西他滨联合组肿瘤细胞凋亡率显著上升(P<0.05),为62.65%。此外,较化疗药物单独使用组相比,地西他滨联合组明显减缓裸鼠胃癌体积的生长,在逆转抑癌基因E-cadherin基因甲基化的同时,能显著增加E-cadherin基因mRNA和蛋白的表达。 结论:地西他滨能协同化疗药物(5-氟尿嘧啶联合紫杉醇)抗肿瘤细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制胃癌异体移植瘤的生长。且此种协同作用可能通过逆转抑癌基因E-cadherin甲基化状态和促进其mRNA和蛋白表达而实现。 收起