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国家工程技术图书馆
2022年11月29日
摘要: 目的:肝纤维化是慢性肝脏疾病发展为肝硬化甚至肝癌的必经过程和病理基础。肝星状细胞的增殖、活化已被证实是肝纤维发生、发展的核心事件。miRNA-10a是一种具有调控作用的小分子RNA,可以通过某些途径来影响肝纤维化进程。本文拟从细胞水平出发,探... 展开 目的:肝纤维化是慢性肝脏疾病发展为肝硬化甚至肝癌的必经过程和病理基础。肝星状细胞的增殖、活化已被证实是肝纤维发生、发展的核心事件。miRNA-10a是一种具有调控作用的小分子RNA,可以通过某些途径来影响肝纤维化进程。本文拟从细胞水平出发,探讨miRNA-10a对人肝星状细胞系LX-2活化的作用,研究miRNA-10a对LX-2细胞增殖、凋亡的影响,并探究潜在的分子机制。本课题旨在探究miRNA-10a对LX-2细胞生物学功能的作用及分子机制,为肝纤维化的防治提供新的思路。 方法:培养人肝星状细胞系LX-2,设置空白对照组与TGF-β1刺激组培养24h后,提取细胞总RNA,RT-qPCR检测miRNA-10a的表达情况。培养LX-2,随后分别转染miRNA-10a的模拟物(mimics)或抑制物(inhibitor),提取细胞总RNA,采用RT-qPCR检测miRNA-10a的水平;收集细胞总蛋白和总RNA,采用RT-qPCR或Westernblot分别检测CollagenI、α-SMA的mRNA或蛋白水平;采用CCK-8法检测转染后继续培养不同时间的细胞增殖情况;采用流式细胞术检测转染后继续培养48h的细胞凋亡水平;采用Westernblot检测细胞内GSK-3β、p-GSK-3β和β-catenin蛋白相对表达量。 结果:经TGF-β1诱导培养后,人肝星状细胞系LX-2中miRNA-10a水平显著增加;RT-qPCR和Westernblot实验结果表明,miRNA-10a能诱导CollagenI、α-SMAmRNA或蛋白水平显著上调,而抑制miRNA-10a可显著逆转TGF-β1诱导的CollagenI、α-SMAmRNA或蛋白的上调。CCK-8实验结果显示,miRNA-10a能促进LX-2的增殖,而下调miRNA-10a水平能显著抑制TGF-β1诱导的LX-2增殖。流式细胞术结果表明,miRNA-10a可抑制LX-2的凋亡,而下调miRNA-10a水平能显著增加TGF-β1诱导的LX-2凋亡。机制研究表明,miRNA-10a能上调p-GSK-3β和β-catenin的蛋白表达水平,而下调miRNA-10a水平能显著逆转TGF-β1诱导后p-GSK-3β和β-catenin蛋白表达上调。 结论:miRNA-10a能诱导人肝星状细胞系LX-2增殖,能抑制其凋亡,且可能通过激活Wnt/β-catenin信号转导调节肝纤维化进程。下调miRNA-10a水平能有效的抑制肝纤维化进展,为肝纤维化的防治提供了新思路与理论基础。 收起
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