摘要: 【目的】 1. 探讨人参皂苷Rb1(Ginsenoside Rb1,GRb1)是否具有促进大鼠间充质干细胞(Rat Mesenchymal stem cells, rMSCs)向成骨分化的作用及初步探讨其作用机制； 2. 探讨GRb1是否具有预防去卵巢大鼠骨质疏松的作用。 【方法】 1. 选取具... 展开 【目的】 1. 探讨人参皂苷Rb1(Ginsenoside Rb1,GRb1)是否具有促进大鼠间充质干细胞(Rat Mesenchymal stem cells, rMSCs)向成骨分化的作用及初步探讨其作用机制； 2. 探讨GRb1是否具有预防去卵巢大鼠骨质疏松的作用。 【方法】 1. 选取具有多向分化功能的rMSCs为实验对象，用维生素C与地塞米松配成的成骨诱导液处理rMSCs促其成骨分化，通过MTT法、硝基苯二磷酸底物法(BCIP/NBT)、茜素红染色法检测GRb1对rMSCs的增殖、碱性磷酸酶活性(ALP)及矿化结节的作用，以观察GRb1对rMSCs是否存在促进成骨分化增殖的作用，并观察其时效和量效关系，筛选最佳用药浓度。提取GRb1处理7d后的rMSCs的RNA，利用RT-PCR，检测成骨相关基因骨桥蛋白(OPN)、ALP、Runx2和骨钙素(OCN)的表达水平。 2. 选用4月龄的SPF级SD雌性大鼠，随机分成5组，基础组(Basal)、假手术组(Sham)、去卵巢组(OVX)、GRb1高剂量组(HGRb1，腹腔注射6mg/kg，1次/d)以及GRb1低剂量组(LGRb1，腹腔注射3mg/kg，1次/d)。OVX术后3d开始给药，连续给药14w。实验结束前，采取钙黄绿素作荧光标记。取血清测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)。取左侧股骨作骨密度及骨生物力学性能检测。取右胫骨作不脱钙骨切片，观察胫骨松质骨和皮质骨的动静态参数。取子宫作石蜡切片观察子宫组织形态改变。 【结果】 1. GRb1对rMSCs的影响 MTT法检测结果显示，GRb1处理rMSCs细胞24h后，出现促进增殖的现象。其中浓度为10-6M时效果最佳(P<0.05)。用成骨诱导液诱导rMSCs细胞成骨分化，并选取10-6M及10-8M浓度处理rMSCs细胞，7d后，诱导液组(OIM)rMSCs细胞的ALP活力比CON组强(P<0.05)；与CON组对比，GRb1明显增强ALP活性(P<0.05)，以浓度为10-6M最佳(P<0.05)；与OIM组对比，10-6M用药组ALP活性增强(P<0.05)。 给予诱导液诱导成骨7d、10、14d后，行茜素红染色。结果显示，与OIM组对比，7d时，10-6 M GRb1组出现明显结节(P<0.05)；在10d时，与CON组对比，OIM组出现明显结节(P<0.05)，与OIM组对比，10-6 M GRb1组出现明显结节(P<0.05)；在14d时，与OIM组对比，10-6 M GRb1和10-8M GRb1组的矿化结节数量与面积比OIM组明显增多(P<0.05)，显示GRb1对rMSCs有促进成骨矿化的作用。 用GRb1处理rMSCs，7d后，提取总RNA，RT-PCR结果显示，与CON组对比，OIM组的ALP、OPN均明显升高(P<0.05)；与OIM组对比，GRb1可以明显提高 ALP、OPN的表达量(P<0.05)，对OCN及RUNX2的表达量有促进的趋势，但无统计学意义。 对rMSCs给予10-6M的GRb1处理24h后，用不同浓度的H2O2进行干预， 24h后MTT检测细胞活力。结果显示，GRb1对H2O2处理过的rMSCs有一定程度的保护作用。 2. GRb1对OVX大鼠的影响 (1) 对各组大鼠的子宫进行称重及切片染色，发现OVX大鼠的子宫湿重明显下降，GRb1未能改善子宫质量减轻的现象；对子宫病理切片分析，发现OVX组大鼠子宫内膜变薄，子宫萎缩，腺体减少，GRb1未能改善子宫病理状态； (2) 与Sham组对比，OVX组大鼠血清TC、TG和LDL均升高(P<0.05)，而HDL、SOD和GSH 均降低(P<0.05)。与OVX组对比，GRb1高、低剂量组血清相关指标均无明显变化(P>0.05)。 (3) 与Sham组对比，OVX组大鼠右侧胫骨上段静态参数骨小梁面积百分数、骨小梁数量均明显下降(P<0.05)，骨小梁分离度增大(P<0.05)。与OVX组对比， GRb1高、低剂量组静态参数均无统计学差异(P>0.05)。与Sham组对比，OVX组大鼠胫骨上段动态参数骨转换率(BFR/BV)升高(P<0.05)，骨形成率(BFR/TV)下降(P<0.01)，但其余动态参数均无明显变化(P>0.05)。与OVX组对比， GRb1高、低剂量组胫骨上段动态参数均无统计学差异(P>0.05)。 (4) 与Sham组对比，OVX组大鼠胫骨中段皮质骨面积(Ct.Ar)与皮质骨面积百分数(%Ct.Ar)均有明显下降(P<0.05) ，而骨髓腔面积百分数(%Ma.Ar)升高(P<0.05)。与OVX组对比，GRb1高、低剂量组静态参数均无统计学差异(P>0.05)。与Sham组对比，OVX大鼠胫骨中段皮质骨内膜骨形成率(E-BFR/BS)显著增加(P<0.01)，其余动态参数无统计学意义(P>0.05)。与OVX组对比，GRb1高、低剂量组胫骨中段皮质骨动态参数统计学上无意义(P>0.05)。 (5) 与Sham组对比，OVX组大鼠的股骨密度、股骨近端密度、股骨远端密度及腰椎骨密度均明显下降(P<0.05)。与OVX组对比，GRb1高、低剂量组股骨和腰椎骨密度均无统计学意义(P>0.05)。骨生物力学结果显示，OVX组大鼠股骨最大载荷、断裂载荷与刚度均比Sham组明显降低(P<0.05)。与OVX组对比， GRb1高、低剂量组股骨生物力学参数均无统计学意义。 【结论】 1. GRb1可以促进rMSCs增殖，同时具有促进rMSCs成骨分化的作用，能够加快矿化结节的形成，且在一定程度上能保护rMSCs免受氧化损伤。 2. 剂量为3mg/kg及6mg/kg的GRb1对OVX大鼠骨质疏松无预防作用。 收起