摘要: 目的：沉默信息调节因子1（silent information regulator1，SIRT1）为第III类组蛋白去乙酰化酶家族的一员，研究表明SIRT1在多种肿瘤中呈异常表达并与肿瘤的耐药密切相关。本研究通过细胞水平研究靶向SIRT1的小干扰RNA对宫颈癌Hela细胞增殖、迁移、侵... 展开 目的：沉默信息调节因子1（silent information regulator1，SIRT1）为第III类组蛋白去乙酰化酶家族的一员，研究表明SIRT1在多种肿瘤中呈异常表达并与肿瘤的耐药密切相关。本研究通过细胞水平研究靶向SIRT1的小干扰RNA对宫颈癌Hela细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响，探讨其在宫颈癌发生发展中的作用。在此基础上将siRNA-SIRT1与顺铂联合作用Hela细胞，检测SIRT1对相关耐药基因的影响。 方法：化学合成靶向SIRT1的小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）及其阴性对照序列，应用Lipofectamine RNAi MAX脂质体转染宫颈癌Hela细胞。实验分为三组：空白细胞对照组、阴性对照siRNA转染组和siRNA-SIRT1转染组。转染72h后，分别提取各组细胞总RNA和总蛋白。RT-PCR检测细胞中SIRT1mRNA的表达；免疫印迹检测细胞SIRT1蛋白的表达。采用siRNA转染和顺铂药物联合作用Hela细胞，CCK-8法测定Hela细胞的增殖及顺铂对Hela的IC50值；RT-PCR和qRT-PCR检测Hela细胞ABCC1和ABCG2mRNA的表达；免疫印迹法检测Hela细胞ABCC1蛋白的表达水平；Transwell小室分别检测细胞的迁移和侵袭能力；流式细胞术检测Hela细胞凋亡。 结果：RT-PCR结果显示：与阴性对照siRNA组和空白细胞对照组相比，siRNA-SIRT1组SIRT1mRNA表达均明显下调（P＜0.05）。免疫印迹结果显示：与阴性对照siRNA组和空白对照组相比，siRNA-SIRT1组SIRT1蛋白的表达明显下调（P＜0.05）。CCK-8结果显示：顺铂对Hela细胞的IC50值分别为5.34μM（24h）和3.70μM（48h）。siRNA-SIRT1与顺铂联合作用组中顺铂对Hela细胞的IC50为1.58μM（24h），明显低于单独顺铂作用组。siRNA-SIRT1组细胞增殖抑制率为28.6%，而阴性对照siRNA组细胞增殖抑制率为6.3%，空白细胞对照组细胞增殖抑制率为4.7%。siRNA-SIRT1转染组的细胞增殖抑制率明显高于其他对照组（P＜0.05）。RT-PCR和qRT-PCR结果均显示：与阴性对照siRNA组和空白对照组相比，siRNA-SIRT1组ABCC1mRNA的表达明显下调（P＜0.05），而ABCG2表达无显著性差异。免疫印迹结果显示：与阴性对照siRNA组和空白对照组相比，siRNA-SIRT1组ABCC1蛋白的表达明显下调（P＜0.05）。与阴性对照siRNA和顺铂联合作用组及空白对照和顺铂联合作用组相比，siRNA-SIRT1转染和顺铂联合作用组的ABCC1蛋白的表达明显下调（P＜0.05）。细胞迁移和侵袭实验结果显示：siRNA-SIRT1转染组的细胞迁移和细胞侵袭能力均明显高于其他对照组（P＜0.05）。流式检测结果表明：空白细胞对照组细胞的早期凋亡率为2.9%，阴性siRNA对照组细胞的早期凋亡率为3.7%，siRNA-SIRT1组的细胞早期凋亡率为11.7%。与阴性对照siRNA组和空白细胞对照组相比，siRNA-SIRT1组细胞的早期凋亡率明显提高（P＜0.05）。 结论：siRNA-SIRT1不仅能抑制宫颈癌发生细胞的增殖、迁移和侵袭，并诱导细胞凋亡，而且可以下调耐药基因ABCC1的表达，其与顺铂的联合作用可以通过降低耐药基因ABCC1表达进而提高Hela细胞对顺铂的敏感性。SIRT1有望通过影响ABCC1的表达进一步逆转宫颈癌的化疗耐药。 收起