摘要: 本文从以下几个部分展开论述： 第一部分 线粒体融合蛋白2（Mfn2）体外诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡作用及机制 目的： 研究Mfn2在体外实验中对人宫颈癌HeLa细胞的作用及影响，并探讨其相关的分子机制。 方法： 设置不同浓度的Adv-Mfn2组... 展开 本文从以下几个部分展开论述： 第一部分 线粒体融合蛋白2（Mfn2）体外诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡作用及机制 目的： 研究Mfn2在体外实验中对人宫颈癌HeLa细胞的作用及影响，并探讨其相关的分子机制。 方法： 设置不同浓度的Adv-Mfn2组，设Adv-control为对照组。采用CCK-8法检测Adv-Mfn2对HeLa细胞增殖的影响；应用流式细胞仪采用Annexin V-FITC/PI双染法检测Adv-Mfn2对HeLa细胞凋亡的影响，同时应用JC-1法检测Adv-Mfn2对HeLa细胞线粒体膜电位变化的影响。应用western blot方法分别检测Adv-Mfn2对HeLa细胞caspase-3和caspase-9活性的影响；检测对Bcl-2家族蛋白中Bax以及Bcl-2的蛋白表达水平的影响；检测p53蛋白表达水平的变化。 结果： Western blot方法结果显示应用Adv-Mfn2干预HeLa细胞。与空白对照组以及Adv-control相比，Mfn2蛋白表达水平增高。应用CCK-8检测结果提示Adv-Mfn2对HeLa细胞的增殖有明显的抑制作用，且呈剂量依赖与时间依赖的关系。Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测方法结果提示Adv-Mfn2可诱导HeLa细胞凋亡，且呈剂量依赖与时间依赖的关系。JC-1法结果证实Mfn2可明显降低HeLa细胞线粒体膜电位。过表达Mfn2可诱导HeLa细胞caspase-3和caspase-9活性增高，活性随着Adv-Mfn2的浓度的增大而增强，呈剂量依赖关系。Western blot方法结果发现随着Adv-Mfn2的浓度的增加，Bax蛋白表达水平升高，Bcl-2蛋白表达降低，Bcl-2/Bax比值的降低；p53蛋白表达水平上调。 结论： 过表达Mfn2可在体外通过线粒体凋亡途径诱导HeLa细胞凋亡。 第二部分 Mfn2体内诱导HeLa细胞凋亡的机制研究 目的： 构建裸鼠人宫颈癌HeLa细胞移植瘤模型，研究过表达Mfn2在动物实验中对HeLa细胞移植瘤肿瘤的作用及影响，并探讨其相关的分子机制。 方法： 选用4至5周龄的BALB/c裸鼠，通过对裸鼠皮下注射人宫颈癌HeLa细胞构建BALB/c裸鼠体内宫颈癌HeLa细胞移植瘤模型；观察移植瘤成瘤情况，随机分为Adv-Mfn2和Adv-control两组，分别进行瘤内注射共计9天观察Adv-Mfn2对HeLa细胞移植瘤的生长的影响。实验结束后取移植瘤肿瘤组织行TUNEL染色以及免疫组化染色观察移植瘤肿瘤组织过表达Mfn2对移植瘤肿瘤细胞凋亡的影响；Western blot方法检测移植瘤肿瘤组织Bcl-2蛋白家族Bax、Bid、p-Bad与Bcl-2的蛋白表达水平；检测移植瘤肿瘤p53蛋白表达水平。 结果： 裸鼠皮下注射人宫颈癌HeLa细胞，构建BALB/c裸鼠体内宫颈癌HeLa细胞移植瘤模型成功。分为Adv-Mfn2和Adv-control两组行瘤内注射。Western blot法检测Adv-Mfn2注射后对移植瘤内Mfn2表达水平的影响，结果显示与对照组相比Mfn2表达水平明显增高。注射期间测量移植瘤体积，结果提示Adv-Mfn2组的裸鼠移植瘤肿瘤的大小与Adv-control组相比明显降低。实验结束后将移植瘤剥离行TUNEL染色以及免疫组化染色，结果发现与Adv-control组相比，Adv-Mfn2组的TUNEL染色阳性细胞数量明显增多，凋亡率增高；移植瘤肿瘤组织cleaved caspase-3表达水平明显增高。Western blot检测Bcl-2家族相关蛋白表达水平结果显示与Adv-control组相比，过表达Mfn2可以上调移植瘤肿瘤组织中Bax以及Bid的表达水平，降低p-Bad与Bcl-2的表达水平；同时p53蛋白表达水平上调。 结论： Mfn2对裸鼠体内人宫颈癌HeLa细胞移植瘤具有抗肿瘤作用并可诱导肿瘤细胞凋亡，证明过表达Mfn2在体内可通过线粒体凋亡途径诱导人宫颈癌HeLa细胞移植瘤凋亡。 收起