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国家工程技术图书馆
2022年11月29日
摘要: 骨不连接及大段骨缺损是临床常见的骨科疾病,目前的临床治疗方法尚不能有效地治疗。组织工程骨是治疗这类疾病最理想的方式,但这种治疗方式仍需有效解决成骨支架、种子细胞和成骨诱导因子等问题。骨形态蛋白9(BMP9)具有高效诱导干细胞骨向分化的能... 展开 骨不连接及大段骨缺损是临床常见的骨科疾病,目前的临床治疗方法尚不能有效地治疗。组织工程骨是治疗这类疾病最理想的方式,但这种治疗方式仍需有效解决成骨支架、种子细胞和成骨诱导因子等问题。骨形态蛋白9(BMP9)具有高效诱导干细胞骨向分化的能力,具有很好的临床应用前景。本研究在课题组前期工作的基础上,进一步分析COX-2促进BMP9诱导干细胞骨分化的可能机制。 本研究采用RT-PCR、Western blot、细胞免疫荧光染色、碱性磷酸酶(ALP)组化染色、茜素红S染色、周期分析、萤光素酶报告质粒及ChIP等实验方法进行相关研究。首先,本研究进一步确认BMP9对干细胞骨向分化的诱导作用;然后分析BMP9对COX-2表达的影响,以及COX-2影响BMP9诱导干细胞骨分化作用与PGE2/EPs途径的关系;最后,分析BMP9骨分化诱导作用中促进Wnt/β-catenin信号与COX-2的关系。结果显示,BMP9能明显诱导MEFs骨分化,并同时诱导COX-2表达;抑制COX-2则减弱BMP9的骨向分化诱导作用;BMP9明显升高PGE2的蛋白水平,抑制PGE2受体(EP2或EP4)均抑制BMP9的作用;其中,抑制EP4受体对BMP9作用的影响更明显;COX-2对BMP9成骨诱导作用的影响可能与抑制细胞增殖无关。BMP9能增加Wnt/β-catenin信号的转导活性,过表达COX-2能增强这种作用,而抑制COX-2则减弱 BMP9对该信号的促进作用;抑制EPs受体和cAMP同样减弱BMP9对Wnt/β-catenin信号转导的促进作用;COX-2对该信号的影响可能与经PGE2途经调节CREB磷酸化水平,进而与直接调节β-catenin的表达有关。另抑制COX-2对干细胞分化的抑制作用可能被ATRA(全反式视黄酸)取消或逆转。结果提示,COX-2可能与Wnt/β-catenin信号形成反馈性调节,共同促进BMP9诱导干细胞骨向分化。 收起
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