摘要: 目的：邻苯二甲酸单（2-乙基己基）酯（Mono-(2-ethylhexyl) phthalate，MEHP）是邻苯二甲酸（2-乙基己基）酯(di-(2-ethylhexyl) phthalate，DEHP)的有效毒性代谢产物。由于塑料产品中和日常饮食中DEHP越来越多的被使用，所以DEHP和其水解物MEHP对人... 展开 目的：邻苯二甲酸单（2-乙基己基）酯（Mono-(2-ethylhexyl) phthalate，MEHP）是邻苯二甲酸（2-乙基己基）酯(di-(2-ethylhexyl) phthalate，DEHP)的有效毒性代谢产物。由于塑料产品中和日常饮食中DEHP越来越多的被使用，所以DEHP和其水解物MEHP对人体的伤害值得重视。已经有研究表明邻苯二甲酸酯类代谢物与很多慢性疾病有关，像肥胖和二型糖尿病等。而累积DNA损伤和一些氧化性损伤与胰岛素抵抗和肥胖的发生都有直接关系。近年来发现在DNA损伤的发生过程中还会检测到自噬的发生，自噬的出现对细胞是有利还是有害不是完全清楚，其间作用的信号通路也不是很明朗。白藜芦醇作为抗氧化剂可以消除细胞内活性氧，达到化学预防的作用，对肥胖和糖尿病等慢性病有着积极的治疗作用。所以在本实验中，探究MEHP对INS-1细胞造成的DNA损伤，分析造成DNA损伤的机制途径，同时还探究自噬的发生与DNA损伤的关系及其对细胞的影响；选用白藜芦醇作为保护剂，观察其在MEHP产生细胞毒性过程中的作用。 方法：INS-1细胞被选为研究对象。MTT实验用来检测MEHP对INS-1细胞的毒性作用和对细胞生存率的影响；彗星实验用来评定MEHP对INS-1细胞的遗传毒性、DNA损伤水平；实时荧光定量PCR检测INS-1细胞内DNA损伤相关基因ATM和P53的表达量变化。检测细胞内ROS变化使用2',7'-二氯二氢荧光素荧光染料(DCFH-DA)，检测溶酶体膜稳定性用吖啶橙（AO），检测线粒体膜电位变化用JC-1染色，使用分光光度计和荧光显微镜观察拍照。用蛋白印迹法检测相关蛋白表达量变化。检测白藜芦醇和自噬抑制剂的作用都需要预先对细胞进行处理，再加MEHP作用。 结果：与对照组相比，MEHP作用后INS-1细胞产生明显的DNA损伤，表现为彗星实验中细胞拖尾现象加剧等，MEHP还导致细胞内活性氧（ROS）水平升高、溶酶体膜稳定性下降、溶酶体内组织蛋白酶 B释放增多、线粒体膜电位崩溃以及自噬蛋白表达增加。经白藜芦醇预处理后上述现象均减轻，经自噬抑制剂预处理后自噬蛋白表达减少，细胞内ROS水平反而增多。 结论：MEHP对INS-1细胞具有遗传毒性。MEHP诱导产生的INS-1细胞DNA损伤是氧化应激造成的。MEHP诱导产生的INS-1细胞DNA损伤跟溶酶体-线粒体轴损伤有关。MEHP诱导产生INS-1细胞DNA损伤同时也诱导细胞自噬增加，而自噬对INS-1细胞在DNA损伤过程中起到一种保护作用。白藜芦醇可以通过减轻氧化应激和恢复溶酶体-线粒体轴的稳定性来减少 MEHP对 INS-1细胞造成的DNA损伤。 收起