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国家工程技术图书馆
2022年11月29日
摘要: 目的: 1、探讨Wnt/β-catenin信号通路抑制剂IWR-1对人肝癌细胞株Hep3B细胞增殖的影响及可能的机制; 2、研究Wnt/β-catenin信号通路抑制剂IWP-2对人肝癌细胞Hep3B细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。 方法: 1、IWR-1作用实验;... 展开 目的: 1、探讨Wnt/β-catenin信号通路抑制剂IWR-1对人肝癌细胞株Hep3B细胞增殖的影响及可能的机制; 2、研究Wnt/β-catenin信号通路抑制剂IWP-2对人肝癌细胞Hep3B细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。 方法: 1、IWR-1作用实验;用不同浓度IWR-1(2、4、8、16μmol/L)处理人肝癌Hep3B细胞,采用CCK-8法检测细胞生长抑制率;应用流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡率;Western blot法检测细胞中蛋白表达的变化,实时定量RT-PCR检测β-catenin和c-myc mRNA表达的变化; 2.、IWP-2作用实验;用终浓度分别为0、20、40、80、160、320μmol/L的IWP-2作用于人肝癌Hep3B细胞,采用CCK-8法检测细胞的增值抑制率,FCM法检测细胞周期分布与细胞凋亡率,western blot法检测细胞凋亡蛋白的表达,western blot法检测细胞中Cyclin D1和survivin蛋白表达的变化,实时定量RT-PCR法检测Cyclin D1和survivinmRNA表达的变化。 结果: 1、IWR-1实验结果;IWR-1对人肝癌Hep3B细胞的生长抑制作用呈现剂量和时间依赖性(P<0.01)。流式细胞术结果显示,Hep3B细胞的细胞周期呈现明显的G0/G1期阻滞,且细胞凋亡率明显升高(P<0.01),呈现剂量依赖性。IWR-1可引起β-catenin和c-myc mRNA表达下降,β-catenin、c-myc蛋白表达下降,而Axin1和p-β-catenin蛋白表达上升; 2.IWP-2实验结果;20μmol/L~320μmol/LIWP-2对细胞的增殖均有抑制作用,其抑制作用作用随IWP-2浓度的升高和作用时间的延长而增强,各组与对照组相比差异有统计学意义,P<0.01。FCM检测结果显示,IWP-2(20μmol/L~320μmol/L)能够导致G0/G1期细胞比例上升,S期细胞比例下降,同时诱导细胞凋亡,凋亡率随IWP-2浓度的升高而上升,与对照组相比差异有统计学意义,P<0.01。IWP-2可引起caspase-3和caspase-7蛋白表达水平的升高,并且可下调肝癌细胞中Cyclin D1和survivin基因和蛋白的表达水平,呈明显的剂量依赖性。 结论: 1、IWR-1可以抑制人肝癌细胞株Hep3B的增殖,其机制可能是通过抑制Wnt/β-catenin通路来实现;. 2、IWP-2可抑制Hep3B细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与抑制CyclinD1和survivin的表达有关。 收起
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