摘要: 目的：(1)检测STAT3蛋白及c-myc蛋白在肝癌SMMC-7721细胞以及肝细胞肝癌组织中的表达。 (2)抗体干预后观察STAT3及c-myc对肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响以及两者的相互关系，探讨两者在肝癌发生发展中的作用。 方法：(1)免疫细胞化学及RT-... 展开 目的：(1)检测STAT3蛋白及c-myc蛋白在肝癌SMMC-7721细胞以及肝细胞肝癌组织中的表达。 (2)抗体干预后观察STAT3及c-myc对肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响以及两者的相互关系，探讨两者在肝癌发生发展中的作用。 方法：(1)免疫细胞化学及RT-PCR方法观察STAT3及c-myc在肝癌细胞SMMC-7721中的表达。 (2)免疫组织化学方法检测STAT3蛋白及c-myc蛋白在肝细胞肝癌组织中的表达。 (3)分别单独应用STAT3及c-myc的抗体及两种抗体联合应用后，MTT法检测肝癌细胞SMMC-7721的增殖情况，应用流式细胞仪检测细胞凋亡，RT-PCR技术检测STAT3及c-myc mRNA表达的变化。 结果: (1)STAT3及c-myc在肝癌细胞SMMC-7721中均有表达。STAT3蛋白和c-myc蛋白均主要表达于细胞浆。 (2)应用抗STAT3抗体干预后检测到肝癌细胞SMMC-7721增殖受到抑制，呈现时间、剂量依赖性。20μg/mL处理组和40μg/mL处理组与10μg/mL处理组比较，抑制率具有显著差异(p<0.05)。20μg/mL处理组和40μg/mL处理组比较，抑制率无显著差异(p＞0.05)。 (3)应用抗c-myc抗体干预后SMMC-7721细胞增殖受到抑制，细胞活力下降，呈现时间、剂量依赖性，20μg/mL处理组和40μg/mL处理组与10μg/mL处理组比较，抑制率具有显著差异(P<0.01)。20μg/mL处理组和40μg/mL处理组比较，抑制率无统计学差异(P>0.05)。 (4)联合应用抗STAT3及抗C-myc抗体干预后，MTT结果显示对细胞增殖的抑制作用呈时间、剂量依赖性。在24h处理组和48h处理组，联合应用抗体对SMMC-7721细胞增殖的抑制率高于单用一种抗体处理组，具有统计学差异(P＜.05)。72h处理组与单用一种抗体处理组相比，抑制率无统计学意义(P＞0.05)。 (5)流式细胞术检测显示单独应用抗STAT3和抗c-myc抗体及两者联合应用后，细胞的早期凋亡率从对照的0.88％增加到7.12％、10.6％和15.5％，晚期凋亡细胞比率从对照的1.00％增加到3.12％、5.32％和7.14％，联合应用抗STAT3及抗c-myc抗体处理的细胞凋亡率高于单用一种抗体处理组。 (6)RT-PCR检测显示应用抗STAT3抗体作用于细胞48h，c-myc mRNA的表达下降；联合应用两种抗体处理细胞48h，c-myc mRNA的表达明显降低，(7)联合应用抗体作用于细胞48h，RT-PCR检测显示STAT3 mRNA的表达较对照组降低。 (8)STAT3在33例肝细胞肝癌组织中表达，c-myc在32例肝细胞肝癌组织中表达，不同分化程度的肝细胞肝癌中STAT3，c-myc的表达差异有统计学意义(P＜0.05)。 结论: (1)肝癌细胞SMMC-7721中存在STAT3及c-myc信号的过度激活。 (2)抑制STAT3基因或者c-myc基因以及同时抑制STAT3和c-myc基因可以抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖，诱导细胞凋亡。提示STAT3基因和c-myc基因在肝癌的发生发展中发挥了重要作用。 (3)STAT3和c-myc基因在人肝细胞肝癌组织中过表达，STAT3，c-myc的表达强度与肝细胞肝癌的病理分级呈正相关，提示STAT3和c-myc基因参与了肝癌的恶性转化。 (4)抗STAT3抗体作用于肝癌SMMC-7721细胞，可以抑制c-myc基因的表达，提示STAT3可能通过上调c-myc而抑制肝癌细胞凋亡，促进细胞增殖。 收起