摘要: 目的: 1.研究雷公藤内酯醇(TL)对人纤维肉瘤HT-11080细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响； 2.研究TL调控MMP-9表达的意义； 3.探讨TL调控MMP-9表达的机制。 方法: 1.选择人纤维肉瘤细胞系HT-1080为研究对象，常规培养、传代，药物... 展开 目的: 1.研究雷公藤内酯醇(TL)对人纤维肉瘤HT-11080细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响； 2.研究TL调控MMP-9表达的意义； 3.探讨TL调控MMP-9表达的机制。 方法: 1.选择人纤维肉瘤细胞系HT-1080为研究对象，常规培养、传代，药物的3个工作浓度分别为6nM、12nM和18nM，处理时间均为72小时； 2.采用MMT法检测TL对HT-1080细胞增殖能力的影响； 3.用流式细胞仪检测TL致HT-1080细胞凋亡情况； 4.运用RT-PCR检测TL对9个基因mRNA表达的影响，这些基因是：MMP-9和-2，基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMP)-1、-2、-3和-4，DNA甲基转移酶(DNMT)-1、-3A和-3B； 5.用明胶酶谱实验检测TL对HT-1080细胞MMP-9和-2活性的影响； 6.用Transwell侵袭实验检测TL对HT-1080细胞体外侵袭能力的影响； 7.用甲基化特异性PCR(MSP)检测TL对MMP-9基因甲基化水平的影响； 8.用Westem blotting检测TL对DNMT-1、-3A和一3B蛋白表达的影响。 结果: 1.TL作用72小时，随药物浓度的增加，HT-1080细胞的增殖逐渐受到抑制；其中，半数抑制浓度约为25nM； 2.浓度分别为6nM、12nM和18nM的TL处理72小时后，HT-1080细胞的凋亡率分别为16.0％、17.3％和18.8％，对照组凋亡率为17.7％； 3.18nM TL处理HT-1080细胞72小时后，MMP-9mRNA的表达明显下调，但MMP-2、TIMP-1/-2/-3/-4mRNA的表达无明显变化；6nM和12nM TL处理组上述基因的mRNA表达均无明显变化； 4.12nM TL处理HT-1080细胞72小时后，在细胞无血清培养基上清中检测到的MMP-9的活性明显下调，18nM TL处理组无血清培养基上清中则基本检测不到MMP-9；3个药物处理组MMP-2的活性均无明显变化； 5.Transwell侵袭实验发现，18nM TL处理72小时后，穿过人工基底膜的细胞数明显减少，约相当于对照组的65％；抗MMP-9单克隆抗体处理组穿过人工基底膜的细胞数亦明显减少，约相当于对照组的50％；6nM和12nM TL处理组穿过人工基底膜的细胞数均无明显变化； 6.18nM TL处理HT-1080细胞72小时后，MMP-9基因甲基化水平明显上调；6nM和12nM TL处理组MMP-9基因甲基化水平均无明显变化； 7.18nM TL处理HT-1080细胞72小时后，DNMT-1和-3A mRNA及蛋白表达明显上调，DNMT-3B mRNA及蛋白表达无明显变化；6nM和12nM TL处理组DNMT-1、-3A和-3BmRNA及蛋白表达均无明显变化。 结论: 1.TL抑制HT-1080细胞的增殖； 2.TL可能通过抑制MMP-9的表达及活性而抑制肿瘤细胞体外侵袭能力； 3.首次证实TL上调MMP-9基因甲基化水平； 4.首次证实TL上调DNMT-1和-3A的表达。 收起