摘要: 目的：近年来，随着医疗事业飞速发展，胶质瘤的早发现、早诊断已得到了有效保障；术中运用显微外科技术及神经导航仪，一定条件下大大提高了胶质瘤的手术切除率；此外，术后个体化的放化疗、免疫治疗等综合治疗手段也已到达广泛使用。然而，即使胶质... 展开 目的：近年来，随着医疗事业飞速发展，胶质瘤的早发现、早诊断已得到了有效保障；术中运用显微外科技术及神经导航仪，一定条件下大大提高了胶质瘤的手术切除率；此外，术后个体化的放化疗、免疫治疗等综合治疗手段也已到达广泛使用。然而，即使胶质瘤诊疗水平不断的提高，胶质瘤患者预后的改善、生存质量的提高极为有限，作为目前颅内最常见的恶性肿瘤的平均生存期仅为15-18个月。 导致肿瘤发生，并且迅速生长的原因有很多，包括基因突变，药物致癌，物理致癌，化学致癌，遗传等因素。在这其中癌基因的激活和抑癌基因的失活已得到研究界普遍认可。近期研究发现人类婆罗双树样基因4（SALL4）具有调控肿瘤的功能，并成为评估肿瘤预后的一个新标记物。SALL4与参与果蝇多种器官发育的果蝇婆罗双树基因Spalt为同源基因，是近期新发现的原癌基因，编码一种锌指蛋白转录因子，位于人类20号染色体q13，分为SALL4A和SALL4B两亚型。研究表明干性基因SALL4具有维持胚胎干细胞的多能性和自我更新的功能，与许多肿瘤的发生发展密切相关，包括白血病，肝癌，胃癌，食管癌，肺癌等常见恶性肿瘤。敲除SALL4基因能够抑制某些肿瘤细胞的增殖，增加其凋亡，降低其侵袭能力，在肝细胞肝癌中高表达SALL4基因往往意味着更短的生存期和较差的预后。而抑癌基因PTEN的缺失或者突变亦参与多种恶性肿瘤的发生和发展，在某些肿瘤中SALL4可以靶向抑制PTEN的表达，发挥促癌作用。SALL4与胶质瘤的关系尚不清楚。因此，我们首先检测SALL4在胶质瘤中的表达，再运用siRNA,下调胶质瘤细胞株中SALL4表达，PTEN阻滞剂phen(bpv)处理低表达SALL4的细胞，研究SALL4对胶质瘤生物学功能的影响及其作用机制。 方法：我们收集苏州大学附属第一医院神经外科近3年来，手术切除的不同级别的胶质瘤标本69例，标本液氮中冷冻保存并提取其总得RNA，运用实时定量PCR技术，检测肿瘤标本中SALL4的表达水平以及不同级别中SALL4表达有无差异。体外实验，我们分析不同级别胶质瘤细胞株中SALL4表达水平，并选择合适的胶质瘤细胞株作为实验对象。运用将siRNA-SALL4转染技术，下调胶质瘤细胞株U87和U251中SALL4基因的表达，与此同时使用PTEN抑制剂，进而对肿瘤细胞增殖能力进行检测，予以细胞周期分析等。Wstern Blot分析 PTEN/PI3K/AKT信号通路相关蛋白,如PTEN,PI3K,P-PI3K,AKT,P-AKT,cyclin D1的表达变化。 结果： 1.SALL4在人脑胶质瘤及胶质瘤细胞株中表达。运用实时定量PCR技术，对6例非瘤脑组织及69例不同级别的人脑胶质瘤标本中SALL4表达进行分析。其结果提示：在胶质瘤标本中SALL4水平比非瘤脑组织高（P<0.05），且随着肿瘤级别增高SALL4表达水平亦明显增高。不同种级别胶质瘤细胞株中SALL4表达不同，与肿瘤标本类似，级别越高的胶质瘤细胞株SALL4表达水平越高（P<0.05）。 2.敲除SALL4基因，抑癌基因PTEN的表达明显提高。SALL4-siRNA转染肿瘤细胞后，下调了SALL4的表达，分别从蛋白水平及mRNA水平检测抑癌基因PTEN的表达，结果提示：下调SALL4，PTEN蛋白及mRNA明显增加（P<0.05）。 3.下调SALL4的表达，U87及U251细胞增殖明显受抑制。胶质瘤细胞转染SALL4-siRNA后，增殖能力下降，进一步行细胞周期分析，结果提示细胞阻滞在G1，即处于静止G1期细胞比例增加，而处于分裂S期细胞所占比例降低，而PTEN抑制剂能够很大程度上逆转这种抑制效应。 4. Western Blot技术分析敲除SALL4后，PTEN,PI3K/AKT通路相关蛋白改变。敲除SALL4后，PTEN表达上调，PI3K/AKT磷酸化水平下降，p-PI3K,p-AKT表达 水平受抑制，细胞周期素cyclinD1表达下降。预先用SALL4-siRNA处理胶质瘤细胞株，再用PTEN抑制剂处理细胞，PI3K/AKT磷酸化水平的抑制效应明显改变。 结论:SALL4在人脑胶质瘤中表达水平明显高于非瘤脑组织，且随着肿瘤级别增高表达水平亦增加。下调SALL4能够阻滞细胞周期在G1期，一定程度上将也就抑制细胞增殖。SALL4可抑制PTEN的表达，进而增加PI3K/AKT信号通路的活性，促进胶质瘤细胞增殖。 收起