摘要: 背景和目的: RabGEF1(Rab guanine nucleotide exchange factor1)是Rab5的鸟嘌呤-核苷酸交换因子(GEF)，属于小G蛋白家族。越来越多的研究表明，RabGEF1在某些人类癌症中起到致癌作用。然而，目前还没有关于RabGEF1在神经胶质瘤中的研究。前期研究... 展开 背景和目的: RabGEF1(Rab guanine nucleotide exchange factor1)是Rab5的鸟嘌呤-核苷酸交换因子(GEF)，属于小G蛋白家族。越来越多的研究表明，RabGEF1在某些人类癌症中起到致癌作用。然而，目前还没有关于RabGEF1在神经胶质瘤中的研究。前期研究发现，RabGEF1在人胶质瘤肿瘤组织中明显上调。另外，RabGEF1敲减后胶质瘤细胞活力明显降低，诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡，同时细胞迁移和侵袭也受到抑制。通过对细胞通路AKT和Erk的研究，发现RabGEF1敲减时，p-AKT、p70S6K和p-Erk均降低，说明RabGEF1可能通过AKT和Erk通路作用于胶质瘤的增殖、侵袭和凋亡。本研究报道了RabGEF1抑制下的胶质瘤的体外增殖、转移及诱导自噬，并通过AKT和Erk信号通路在U251细胞中发挥致癌作用。 方法: 收集手术切除的胶质瘤病理标本，免疫组化(IHC)分析方法测定RabGEF1在胶质瘤组织和正常脑组织中的表达。利用sina1-4对RabGEF1基因的不同位点进行靶向性研究，并通过qRT-PCR检测其整合效率。Western blot检测目的蛋白的表达。细胞用CCK-8和克隆形成法检测细胞增殖。细胞迁移和分别采用划痕法和transwell法进行了侵袭分析。流式细胞术用于检测细胞周期分布和凋亡。 结果: 免疫组化(IHC)分析RabGEF1在胶质瘤中的内源性表达，与正常脑组织相比，人胶质瘤肿瘤组织中RabGEF1明显上调。通过qRT-PCR和western blot检测证实了RabGEF1敲减在mRNA和蛋白水平上的有效性。CCK8法和克隆形成法进一步证实了RabGEF1敲减后对胶质瘤细胞的抑制作用。RabGEF1敲减后，U251细胞活力降低，细胞的增殖明显受到抑制，诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡。当RabGEF1敲减时，细胞迁移和侵袭也受到抑制。通过敲减RabGEF1机制的研究说明，RabGEF1对Cyclin D1和CDK4/6均有显著抑制，CyclinD1与CDK4或CDK6形成复合物，并作为调控亚基。这两种依赖于细胞周期蛋白依赖性激酶是从G1期向S期过渡所必需的。通过下调RabGEF1，p53介导的凋亡通路被激活，包括p53、Bim、Bax、Active-caspase3表达增加，Bcl2减少，与促进细胞凋亡的方向一致。此外，RabGEF1敲减也会诱导胶质瘤细胞自噬，导致Beclin-1、LC3的上升及p62下降。通过对AKT和Erk通路的研究提示RabGEF1敲减时，p-AKT、p70S6K和p-Erk均降低。 结论: 综上所述，数据表明，RabGEF1在人脑胶质瘤中表达上调，而RabGEF1的下调通过使AKT和Erk信号通路失活抑制胶质瘤细胞的增殖、转移和诱导自噬。 收起