摘要: 目的：克隆人白细胞介素(interleukin，IL)-38基因，构建其真核、原核表达载体，完成 IL-38重组蛋白的表达、纯化及活性分析；构建 IL-38慢病毒表达载体，并进行其慢病毒包装与鉴定，研究 IL-38对博来霉素诱导的小鼠肺纤维化的作用及机制。 方法：... 展开 目的：克隆人白细胞介素(interleukin，IL)-38基因，构建其真核、原核表达载体，完成 IL-38重组蛋白的表达、纯化及活性分析；构建 IL-38慢病毒表达载体，并进行其慢病毒包装与鉴定，研究 IL-38对博来霉素诱导的小鼠肺纤维化的作用及机制。 方法：从人皮肤组织中提取总RNA，通过RT-PCR方法扩增IL-38基因的全长编码序列，将其克隆入真核表达载体 pcDNA3.1/V5-His-TOPO，构建其 pcDNA-3.1-hIL-38-V5-His重组质粒；以pcDNA-3.1-hIL-38-V5-His为模板扩增IL-38成熟蛋白编码区，构建IL-38 pET-44-hIL-38原核表达载体，将测序正确的表达载体转化入 BL21(DE3)大肠杆菌表达菌株中获得 IL-38表达工程菌株，用适当浓度的IPTG诱导工程菌株表达IL-38重组蛋白，并利用其C末端的组氨酸标签(His-tag)进行镍离子亲和层析纯化目的蛋白，将纯化的重组IL-38作用于脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)诱导的THP-1细胞，研究纯化IL-38蛋白的生物学活性；构建IL-38慢病毒表达载体 pLVX-hIL-38-IRES-Green1，将该重组表达载体与其余三个包装载体共转染293T细胞株，包装并收集慢病毒，建立博来霉素(bleomycin，BLM)滴鼻给药C57BL/6雄性小鼠诱导的肺纤维化动物模型，将 IL-38病毒上清滴鼻小鼠，研究 IL-38对小鼠肺纤维化发病的影响。 结果：构建的IL-38真核、原核及慢病毒表达载体的测序结果均与 GenBank中的基因序列一致；IPTG诱导产生的IL-38蛋白主要以可溶性形式存在，纯化的目的蛋白经 SDS-PAGE凝胶电泳分析和Western blot鉴定发现，蛋白纯度可达98%，细胞实验证明纯化的目的蛋白具有较高的生物学活性；动物实验结果表明，IL-38可减少肺部炎症细胞的浸润、细胞外基质及胶原的沉积，可改善肺肺泡壁结构，可抑制肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)-α、IL-4、IL-6、IL-17、单核细胞趋化蛋白(monocyte chemotactic protein，MCP)-1、巨噬细胞炎性蛋白(macrophage inflammatory protein，MIP)-2、粒-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor，GM-CSF)等前炎症因子和促纤维化因子的产生，也可促进抗纤维化因子干扰素(interferon，IFN)-γ的产生。 结论：本文构建了IL-38的真核、原核表达载体和慢病毒载体，成功制备了具有生物活性的IL-38重组蛋白并且成功包装了其慢病毒，利用慢病毒介导表达的IL-38，对 IL-38与博来霉素诱导小鼠肺纤维化的关系做了初步探讨，发现它具有减缓小鼠肺纤维化的作用，为进一步进行IL-38的理论研究及临床应用研究奠定了基础。 收起