摘要: 报春花科（Primulaceae）珍珠菜属（Lysimachia）植物细梗香草（Lysimachia capillipes Hemsl.），又名满山香、香排草。民间用于治疗感冒咳嗽、风湿痹痛等。细梗香草主要以黄酮和三萜类皂苷为主要化学成分，其中细梗香草皂苷 B（capilliposide B，LC... 展开 报春花科（Primulaceae）珍珠菜属（Lysimachia）植物细梗香草（Lysimachia capillipes Hemsl.），又名满山香、香排草。民间用于治疗感冒咳嗽、风湿痹痛等。细梗香草主要以黄酮和三萜类皂苷为主要化学成分，其中细梗香草皂苷 B（capilliposide B，LC-B）和细梗香草皂苷C（capilliposide C，LC-C）为主要皂苷类成分。前期药理学研究表明，以LC-B和LC-C为主要成分的细梗香草总皂苷提取物，可有效抑制荷瘤裸鼠肿瘤生长。体外实验证明，LC-B和LC-C对多种肿瘤细胞具有显著的细胞毒作用，具有很好的开发和利用价值。然而，LC-B和LC-C在生物体内的吸收、分布、代谢和排泄性质仍然未知。因此，本课题拟对细梗香草中两种主要成分LC-B和LC-C展开体内外药代动力学研究，为进一步开发和利用细梗香草，提供数据参考。 1. LC-B和LC-C大鼠体内药物动力学研究 建立同时测定大鼠血浆中LC-B和LC-C浓度的LC-MS/MS方法。敌敌畏作为稳定剂可以有效防止分析物结构中酯键被大鼠血浆或者全血中的酯酶水解。通过LC-QTRAP-MS/MS初步表征LC-B和LC-C血浆中代谢产物为其水解产物LC-A。大鼠体内的药物动力学结果表明，LC-B和LC-C经口给药后大鼠体内暴露量很低，生物利用度较差。 2. LC-C体外肠道菌群代谢及其代谢产物活性研究 用体外肠道菌群代谢方法，92.7%的 LC-C转化为其代谢产物。结合UHPLC-QTOF-MS/MS定性分析与细胞存活率分析，快速表征6种LC-C肠道菌群代谢产物，并证明LC-C肠道菌群代谢产物组对HepG2、PC-3和A549细胞具有明显的外抗肿瘤活性。 3. LC-B和LC-C主要代谢产物LC-A的制备及体外活性研究 采用氢氧化钠碱水解方法制备 LC-B和LC-C的酯键水解产物 LC-A。通过质谱、核磁方法结合参考文献鉴定水解产物LC-A。HPLC-ELSD检测LC-A纯度为98.2%。在体外抗肿瘤实验中，LC-A有效抑制HepG2细胞增殖，IC50为17.46±1.55μg/mL。 4. LC提取物中LC-B和LC-C及主要代谢产物LC-A体内外代谢研究 用大鼠肝微粒体和人肝微粒体体外孵育方法，研究 LC-B、LC-C和代谢物LC-A代谢稳定性。结果表明LC-B、LC-C和代谢物LC-A在大鼠肝微粒体和人肝微粒体中代谢稳定，提示 CYP450酶并不是三个化合物的主要代谢酶。用UHPLC-QTRAP-MS/MS方法表征小鼠经口给与LC提取物10天后，血浆、尿液和粪便中的代谢产物。共检测到21个代谢产物。血浆和尿液样品中主要以酯键水解和去糖基化代谢为主。粪便样品中代谢物种类较多，除酯键水解和去糖基化代谢外，还检测到Ⅰ相代谢产物。 5. LC-B静脉给药和LC提取物经口给药小鼠组织分布研究 建立同时测定小鼠各组织中LC-A、LC-B和LC-C浓度的LC-MS/MS方法。LC-B静脉给药后，分布于除骨骼肌外各组织中，肝、脾和肺组织分布浓度较高。代谢产物LC-A主要在肝和肠组织分布。LC提取物经口给药10天后，主要活性成分LC-B和LC-C分布于各组织当中，代谢产物LC-A主要分布于胃和肠组织中。 6. LC-B在大鼠体内排泄研究 建立同时测定大鼠尿液和粪便中LC-A和LC-B浓度的LC-MS/MS方法。采用SPE柱处理尿液和粪便样品。CHAPS作为抗吸附剂，加入到尿液样品中可以有效防止分析物被吸附。1%甲酸调节尿液pH，有利于增强分析物在SPE柱上的保留，提高回收率。LC-B和LC-A在尿液和粪便中总排泄比例为9.69%，提示还有其他形式代谢产物排出。 收起