摘要: 目的:通过大肠杆菌 BL21原核表达获得能够替代天然人源 cTnI的蛋白产物，并用于Balb/c小鼠免疫，制备出高特异性高亲和力的抗人cTnI的单克隆抗体，为后续检测方法的建立奠定基础。 方法:人工合成目的基因cTnI-linker-TnC，针对单体蛋白cTnI和cTnC的... 展开 目的:通过大肠杆菌 BL21原核表达获得能够替代天然人源 cTnI的蛋白产物，并用于Balb/c小鼠免疫，制备出高特异性高亲和力的抗人cTnI的单克隆抗体，为后续检测方法的建立奠定基础。 方法:人工合成目的基因cTnI-linker-TnC，针对单体蛋白cTnI和cTnC的目的基因分别设计引物，通过PCR方法获得cTnI和cTnC的目的基因,然后分别构建重组大肠杆菌BL21，可溶性表达目的蛋白cTnI、cTnC和cTnI-linker-TnC,纯化鉴定后用cTnI-linker-TnC复合物和标准cTnI蛋白单体免疫六周龄Balb/c小鼠，通过经典的杂交瘤技术筛选分泌抗 cTnI单抗的阳性杂交瘤细胞株，制备腹水型单克隆抗体并鉴定。 结果:成功的构建了三种目的蛋白（cTnI、cTnC和cTnI-linker-TnC）的重组表达菌株BL21，并实现了高可溶性表达，对重组表达的目的蛋白cTnI、cTnC和cTnI-linker-TnC进行免疫原性鉴定，结果均具有很好的免疫原性，初步认为可以替代天然人源cTnI并用于后续免疫和检测。标准cTnI蛋白单体免疫并经细胞融合后成功的筛选到8株抗人cTnI的阳性杂交瘤细胞株，其中6H7和4A8的腹水型单抗效价可达4万。用原核表达的cTnI-linker-TnC免疫Balb/c小鼠，经细胞融合后的融合率为100%且阳性率可达30%，且原始孔细胞上清OD值超过2.0的克隆株有18株，进一步筛选工作正在进行之中。 结论:成功的实现了目的蛋白 cTnI、cTnC和cTnI-linker-TnC的高可溶性原核表达，且很好的保持了免疫原性，可以用于后续检测和免疫，有望成为天然蛋白的替代物。成功的筛选到了抗人 cTnI的阳性杂交瘤细胞株，并为后续检测方法的建立打下了基础。 收起