摘要: 目的：构建人羧酸酯酶-II(hCE-II)原核表达质粒并在大肠杆菌中表达，制备多克隆抗体(pAb)及单抗杂交瘤细胞株，并对其特性进行初步鉴定。 方法：以人正常肝cDNA文库为模板，构建重组表达质粒pGEX-4T-1hCE-II(即hCE-II-GST)和pET一32a-hCE-U(即hCE-... 展开 目的：构建人羧酸酯酶-II(hCE-II)原核表达质粒并在大肠杆菌中表达，制备多克隆抗体(pAb)及单抗杂交瘤细胞株，并对其特性进行初步鉴定。 方法：以人正常肝cDNA文库为模板，构建重组表达质粒pGEX-4T-1hCE-II(即hCE-II-GST)和pET一32a-hCE-U(即hCE-II-His)。在宿主菌BL21内进行诱导表达，hCE-II-GST融合蛋白作为免疫原分别免疫大耳白兔和BALB/C小鼠，并用间接ELISA，Western blot及免疫组化检测抗体及杂交瘤细胞的特异性。 结果：成功制备了抗hCE-II的多克隆抗体及抗hCE-II单克隆抗体的杂交瘤细胞。Westernb10t鉴定表明两者均可特异性识别重组蛋白以及天然的人肝微粒体蛋白。免疫组织化学鉴定显示两者可特异性结合肝胞浆中的hCE-II蛋白，而不与血管平滑肌细胞结合。 结论：制备的pAb有较高的效价和较好的特异性，为肝癌诊断试剂盒的研究奠定了实验基础；制备的杂交瘤细胞为单克隆抗体的制备提供了原料。 收起