摘要: 目的：本课题利用现代分析仪器对金银花药材进行检测分析，对金银花药材进行质量综合评价研究。优化金银花药材中指标性成分绿原酸和木犀草苷的提取方法；建立超高效液相色谱法（UPLC）同时测定金银花中绿原酸、芦丁、木犀草苷含量的分析方法，替代20... 展开 目的：本课题利用现代分析仪器对金银花药材进行检测分析，对金银花药材进行质量综合评价研究。优化金银花药材中指标性成分绿原酸和木犀草苷的提取方法；建立超高效液相色谱法（UPLC）同时测定金银花中绿原酸、芦丁、木犀草苷含量的分析方法，替代2010版《中国药典》金银花项下含量测定方法评价金银花的质量；对不同花期、不同月份、不同产地金银花的指标性成分测定，为金银花的采收花期提供科学的参考依据，同时为不同月份、不同产地的金银花药材质量提供参考依据；建立金银花药材的HPLC和UPLC指纹图谱；对金银花药材进行一般质量研究；对金银花药材的整体质量优劣进行评价。 方法：通过单因素试验及正交试验优化金银花中指标性成分绿原酸和木犀草苷提取工艺；采用HPLC法测定金银花药材中指标性成分绿原酸、芦丁、木犀草苷的含量；采用 UPLC法测定金银花中的绿原酸、芦丁和木犀草苷的含量；建立金银花药材的HPLC和UPLC指纹图谱，分别进行相似度分析及聚类分析，并比较两种指纹图谱的差异；对金银花药材进行一般质量研究，包括水分测定、总灰分测定和酸不溶性灰分的测定。 结果：通过单因素试验及正交试验优化：浸泡30min，70%乙醇120倍量，超声（功率350W，频率40KHz）提取45min。绿原酸的HPLC色谱条件为： Agilent ZORBAX XDB C18(150×4.6mm，5.0μm)色谱柱，流动相为乙腈（B）-0.2%磷酸水（A）（13：87）等度洗脱，流速1.0 mL/min，检测波长为327nm，柱温为30℃，进样量2.0μL。绿原酸在39.6～297.0μg/mL内呈良好的线性关系，r=1.0000，其加样回收率为97.29%，RSD值为0.48%。芦丁的HPLC色谱条件： Diamonsil（钻石）C18(250mm×4.6 mm，5.0μm)色谱柱；流动相为0.5%醋酸水（A）-甲醇（B），梯度洗脱（0～5min，70%A；5～10min，70%～65%A；10～30min，65%A。）流速1.0 mL/min，检测波长257 nm，柱温30℃，进样量10.0μL。芦丁在4.1～41.0μg/mL内呈良好的线性关系，其加样回收率为98.08%，RSD为0.30%。木犀草苷的HPLC色谱条件为：Agilent ZOTBAX XDB-Phenyl C18(250×4.6 mm，5.0μm)色谱柱；流动相为乙腈（B）-0.4%冰醋酸溶液(A)，洗脱梯度：0～15min，90%～80%（A）；15～30min，80%（A）；30～40min，80%～70%（A）。流速1.0 mL/min；柱温30℃；检测波长350nm；进样量10μL。木犀草苷在2.00～30.0μg/mL内呈良好的线性关系，r=0.9996，其加样回收率为97.91%，RSD值为0.49%。采用UPLC法测定金银花中的绿原酸、芦丁和木犀草苷的含量，色谱条件：色谱柱Agilent ZORBAX RH C18(2.1×50mm，1.8μm)，流动相为0.2%磷酸水（A）-乙腈（B），梯度洗脱：0～2 min，13%（B）；2～3 min，13%～25%（B）；3～8 min，25%（B）；流速0.2mL/min，检测波长350nm，柱温30℃，进样量0.5μL。绿原酸、芦丁和木犀草苷的线性范围分别为15.84～316.8μg/mL、1.64～32.8μg/mL、1.60～32.00μg/mL，加样回收率分别为98.99%、98.84%、98.19%。别分建立了不同产地、不同月份金银花HPLC、UPLC指纹图谱，对金银花药材指纹图进行相似度和聚类分析，金银花HPLC指纹图谱获得22个共有峰，金银花UPLC指纹图谱获得23共有峰，并确认了绿原酸、芦丁、木犀草苷、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C等色谱峰；HPLC指纹图谱相似度为0.917～0.992，UPLC指纹图谱相似度为0.848～0.971。建立金银花药材指纹图谱及其质量评价方法。54批金银花药材的水分、总灰分、酸不溶性灰分含量均符合中国药规定。 结论：本课题通过对金银花提取工艺的研究，建立了以绿原酸和木犀草苷含量为指标的提取方法；建立了UPLC法同时测定金银花中绿原酸、芦丁和木犀草苷含量分析方法，UPLC较 HPLC法更加简便迅速，大大提高了分析的通量、灵敏度、速度，同时减少了有机溶剂的消耗；UPLC法可以替代 HPLC法，为金银花药材质量控制提供新的检测方法和科学依据；UPLC指纹图谱方法较 HPLC大大缩短了分析时间，可用于金银花药材的质量评价；对金银花药材进行一般质量研究和杂质检查；综合评金银花药材的质量，更全面的控制金银花药材内在质量。 收起