摘要: 本实验以湖羊为研究对象。首先，利用q-PCR技术对湖羊Smads基因在出生后不同生长阶段、不同性别、不同骨骼肌（背最长肌、比目鱼肌、腓肠肌、趾长伸肌）的相对表达进行了分析。其次，利用胶原酶和胰酶联合消化法，成功从湖羊肌肉组织中分离出了骨骼肌... 展开 本实验以湖羊为研究对象。首先，利用q-PCR技术对湖羊Smads基因在出生后不同生长阶段、不同性别、不同骨骼肌（背最长肌、比目鱼肌、腓肠肌、趾长伸肌）的相对表达进行了分析。其次，利用胶原酶和胰酶联合消化法，成功从湖羊肌肉组织中分离出了骨骼肌卫星细胞，并采用差速贴壁法对其进行了纯化，所得细胞生长状态良好，纯度较高，低血清诱导后可以分化成肌管。最后，利用脂质体转染法，在湖羊肌卫星细胞中对YAP1进行了过表达后相关研究。初步探讨Hippo-YAP1通路参与调控湖羊肌肉生长、发育的机理。本研究获得了以下结果: 1.Smads基因在湖羊背最长肌中的表达量均低于其他肌肉组织;Smad2、Smad3、Smad4基因均在二日龄的表达量最高，Smad7基因在六月龄时表达量最高;Smad2、Smad3、Smad4基因在二日龄公羊中的表达量高于母羊，六月龄则低于母羊; 2.在四种不同肌肉组织中，Smad2与Smad3，Smad3与Smad4均存在极显著正相关(P＜0.01)，体现了其共同对TGF-β/smad信号通路的抑制作用。YAP1与MSTN间均存在极显著正相关(P＜0.01)，进一步说明了YAP1可能通过参与调控TGF-β/smad通路活性而参与肌肉的增殖和分化过程; 3.成功从湖羊肌肉组织中分离出了肌卫星细胞。并采用差速贴壁法对其进行了纯化。所得细胞生长状态良好，纯度较高，低血清诱导后可以分化成肌管。Q-PCR结果表明在湖羊肌卫星细胞大量分化为肌管的过程中，YAP1与MyoG基因的表达量表现出明显增加的趋势，MSTN则降低; 4.过表达YAP1-Ser42Ala基因能够促进湖羊肌卫星细胞的增殖，但在48h内未能达到显著差异水平。对YAP1基因过表后，发现MSTN表达量降低，而MyoG、Smad3、Smad4、Smad7、Lats1基因表达量则增加，其中Smad3基因表达量差异极显著(P＜0.01)，其它差异均不显著。 收起