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国家工程技术图书馆
2022年11月29日
摘要: 目的:Shh蛋白对永久性脑缺血大鼠血脑屏障的保护及其机制的研究 方法:采取改良线栓法制作SD大鼠左侧大脑中动脉栓塞模型(MCAO),术后立即进行侧脑室注射并分别给予rHuShh(Shh组)、PBS(PBS组)、rHu Shh+Cyclopamine(Shh+ Cyc组),并于1天... 展开 目的:Shh蛋白对永久性脑缺血大鼠血脑屏障的保护及其机制的研究 方法:采取改良线栓法制作SD大鼠左侧大脑中动脉栓塞模型(MCAO),术后立即进行侧脑室注射并分别给予rHuShh(Shh组)、PBS(PBS组)、rHu Shh+Cyclopamine(Shh+ Cyc组),并于1天后观察神经行为缺损评分,采用干湿称重法检测模型大鼠脑水肿,应用依文斯蓝外渗法检测血脑屏障通透性,TTC法检测模型梗塞面积,应用实时荧光定量PCR检测梗塞灶边缘区Ang-1及血脑屏障相关分子(ZO-1, occludin, claudin-5)的mRNA表达水平,免疫印迹法检测上述分子表达水平。原代培养星形胶质细胞和大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs),应用糖氧剥夺模拟体外缺血模型,给予Shh、PBS、Shh+ Cyc预处理,4小时后采用ELISA检测Ang-1表达水平,分别应用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测Ang-1及血脑屏障相关关键分子(ZO-1、occludin、claudin-5)的mRNA和蛋白表达水平。 结果:(1)侧脑室注射Shh可以显著减轻脑缺血导致的神经功能缺损,减轻脑水肿,降低血脑屏障通透性,减小梗塞面积;Shh导致缺血梗塞区边缘ZO-1,occludin、claudin-5、Ang-1的mRNA水平和蛋白水平的表达增高;Cyc可以逆转Shh对上述分子的表达调控及对血脑屏障的保护作用;(2)Shh可显著升高OGD处理的原代星形胶质细胞Ang-1的表达及分泌水平; Shh可提高OGD处理BMECs中ZO-1, occludin、claudin-5、Ang-1的mRNA水平和蛋白水平的表达,应用Ang-1抗体可以逆转Shh对脑微血管内皮细胞的作用。 结论:外源性Shh可促进星形胶质细胞分泌Ang-1作用于脑微血管内皮细胞,增加ZO-1, occludin,、claudin-5的表达,减少血脑屏障破坏及渗漏。 收起
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