摘要: 植物病毒与寄主互作是一个非常复杂的过程，其相互作用机制和效应一直是一个重要的研究热点。烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus，TMV）是多数农作物病毒病的主要病原之一。实验室前期利用酵母双杂交系统，用与TMV血清学关系密切的ToMV CP作为诱饵蛋... 展开 植物病毒与寄主互作是一个非常复杂的过程，其相互作用机制和效应一直是一个重要的研究热点。烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus，TMV）是多数农作物病毒病的主要病原之一。实验室前期利用酵母双杂交系统，用与TMV血清学关系密切的ToMV CP作为诱饵蛋白筛选烟草文库，获得了一个与CP相互作用的FdI。另外，张等人通过酵母双杂交系统筛选到的另一个与ToMV CP互作的烟草蛋白IP-L，双分子荧光互补技术也表明了ToMV CP与IP-L在植物体内也可以发相互作用。后来实验证实这两个蛋白均与TMV CP存在互作，其中FdI还可以与马铃薯X病毒（Potato virus X,PVX）的CP互作。那么FdI以及IP-L是否存在于除了烟草之外其他茄科作物中？其同源性如何？它们在病毒侵染前后的表达变化如何？这些问题的回答对于更好的理解TMV和PVX与寄主互作的生物学效应具有重要参考价值。 本实验中我们也对不同烟草品系以及几种典型的茄科作物叶片中的FdI以及IP-L进行检测，选取了4种烟草品系和3种茄科作物，通过提取总RNA，经过RT-PCR，进行克隆分析。结果证实了在这4种烟草品系中均检测到了FdI和IP-L，在茄子、番茄、辣椒中检测到了IP-L，茄子和番茄中检测到了FdI。通过序列对比分析，FdI在这些植物叶片中核苷酸序列的同源性为95.1％～100％，而IP-L核苷酸序列同源性为88.4％～100％，氨基酸序列的同源性差异也不大。 另外，运用实时荧光定量PCR技术检测病毒的报道已有很多，还有关于检测植物病毒与寄主互作基因表达变化的研究。因此，我们也将通过实时荧光定量PCR技术，分析FdI和IP-L这两个基因在病毒侵染后表达量的变化。我们选取了云烟和番茄，分别接种TMV和PVX，设置了25℃、30℃、35℃的温度恒温培养，另外光照和黑暗处理，在接种病毒23天时通过RT-PCR检测到是否已经接种上病毒，并结合云烟和番茄接种TMV、PVX后以及健康叶片通过实时荧光定量PCR筛选了内参基因，根据geNormPlus软件结果最终选择CYP为云烟的内参基因，ACT为番茄的内参基因。之后，我们通过相对定量表达分析发现，云烟中FdI和IP-L在两种病毒侵染后表达量均下调。随着温度升高，病毒侵染对IP-L下调效应进一步加强，而对FdI的下调作用减弱。番茄中FdI在接种两种病毒后表达量上调，随着温度升高，上调作用进一步加强。 收起