摘要: 目的：建立人脐血间充质干细胞(UCB-MSCs)的体外分离培养体系，观察体外分离培养UCB-MSCs的生物学特性及补肾中药血清联合BMP-2对体外培养UCB-MSCs增殖、碱性磷酸酶(ALP)及骨钙素(BGP)表达的影响，探讨其对UCB-MSCs向成骨细胞分化的诱导作用。 方法... 展开 目的：建立人脐血间充质干细胞(UCB-MSCs)的体外分离培养体系，观察体外分离培养UCB-MSCs的生物学特性及补肾中药血清联合BMP-2对体外培养UCB-MSCs增殖、碱性磷酸酶(ALP)及骨钙素(BGP)表达的影响，探讨其对UCB-MSCs向成骨细胞分化的诱导作用。 方法：取18只SD大鼠，补肾中药连续灌胃7天，颈总动脉取血制备补肾中药血清，采集人脐血标本，密度梯度离心法分离UCB-MSCs，倒置相差显微镜下观察原代培养的UCB-MSCs生物学特性，并经流式细胞仪进行细胞鉴定。取第3代UCB-MSCs随机分为4组，即A组（对照组）、B组（5%补肾中药血清组）、C组（50ng/mlBMP-2组）、D组(5%补肾中药血清+50ng/mlBMP-2组)。分别于诱导第1、3、5dMTT法观察各组对UCB-MSCs增殖的影响；第3、6、9、12d通过ALP染色及活性检测、骨钙素(BGP)含量检测观察补肾中药血清联合BMP-2对UCB-MSCs成骨活性表达的影响。 结果：①原代培养的UCB-MSCs呈圆形，原代培养72h仅见少量贴壁细胞，近似圆形或椭圆形，7d首次换液可见分散的MSCs小集落，呈放射状生长。2周时细胞形态呈长梭形,3周时细胞集落彼此融合。传代细胞大部分24h内贴壁，一般3d即可达到80%-90%融合，细胞排列紧密，形态较均一，以梭形为主。 ②诱导培养第3、5d时，与对照组相比，补肾中药血清联合BMP-2组、BMP-2组均能够促进UCB-MSCs的增殖(P＜0.05)，尤以补肾中药血清联合BMP-2组为最佳(P＜0.01)；第5天补肾中药血清联合BMP-2组与BMP-2组相比差异有统计学意义(P=0.041＜0.05)，而单独补肾中药血清组与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05)。 ③各诱导组第7dALP染色阳性表达较弱，第14dALP染色阳性增强，但各组强弱不等，其中对照组阳性表达较弱，补肾中药血清联合BMP-2组及BMP-2组较为显著，而联合组阳性表达最优，第21d染色阳性表达有所减弱。 ④与对照组比较，补肾中药血清联合BMP-2组、BMP-2组在诱导后3、6、9、12d均能提高ALP活性(P＜0.05)，其中补肾中药血清联合BMP-2组在诱导后3、6、9dALP活性与对照组相比有显著性差异(P＜0.01)；补肾中药血清联合BMP-2组在诱导第6d时ALP活性与BMP-2组比较，差异有统计学意义（P=O.011＜0.05）。 ⑤与对照组比较，BMP-2组、补肾中药血清联合BMP-2组在诱导后6、9、12d均能提高细胞上清液中骨钙素(BGP)含量，差异有统计学意义(P＜0.05)。其中，补肾中药血清联合BMP-2组在诱导第9d时BGP含量与对照组比较差异有显著性意义(P=0.004＜0.01)。 结论：基于“肾主骨、生髓”理论的补肾中药血清联合BMP-2体外诱导人脐血间充质干细胞定向成骨分化的方法有效可行，二者能明显促进UCB-MSCs增殖与定向成骨分化，而单纯补肾中药血清此作用并不显著。 收起