摘要: 目的：肿瘤细胞拥有较强的抗氧化能力系统，可中和肿瘤因高代谢率而引起的细胞内ROS水平过高。ROS在研究发现可促进肿瘤的发生和发展，但是过高的过氧化压力超过细胞可中和的能力则会导致细胞不可逆的损伤而影响细胞存活。分子量为38kD的TXNL2是一个T... 展开 目的：肿瘤细胞拥有较强的抗氧化能力系统，可中和肿瘤因高代谢率而引起的细胞内ROS水平过高。ROS在研究发现可促进肿瘤的发生和发展，但是过高的过氧化压力超过细胞可中和的能力则会导致细胞不可逆的损伤而影响细胞存活。分子量为38kD的TXNL2是一个Trx相关蛋白，其蛋白结构有Trx和Grx同源结构域。TXNL2在真核细胞中表达，但是其功能没有相关研究报道。胃癌是我国最为常见的恶性肿瘤之一，且进展期胃癌患者占我国胃癌患者大多数。进展期胃癌患者接受胃癌标准根治术后的5年生存率仍不容乐观，其根本原因在于胃癌的病因及发病机制未明。因此，深入研究胃癌发生发展的分子生物学基础，有助于寻找胃癌治疗的新靶点，从而有效改善胃癌患者的预后。约有30-50％的胃癌中存在Wnt信号通路异常激活，sFRP1和sFRP3是Wnt信号通路的调控蛋白，本课题研究的主要目的在于探讨sFRP1和sFRP3在胃癌组织中的表达和功能，并探索其调控机制。 方法：通过Oncomine网上数据库分析TXNL2在人肿瘤组织中的表达。通过免疫组化的方法分析其在乳腺癌组织中的表达。构建TXNL2下调的乳腺癌细胞株模型，对影响细胞增殖和转移能力进行体内和体外的研究。通过基因芯片技术分析可能的下游基因，并对信号通路进行具体研究。分析收集带随访资料的85例胃癌的肿瘤组织及其对应癌旁组织，运用免疫组织化学染色的方法，检测sFRP1的表达情况并分析与临床病理资料和病人生存期的相关性。利用稳定过表达sFRP1胃癌细胞株为模型，通过体内和体外实验研究sFRP1对胃癌细胞生长和侵袭中的作用。使用AffymetrixU133 plus2.0 array全基因表达谱芯片对sFRP1过表达细胞和对照细胞进行cDNA microarray分析，分析得到差异表达基因，并筛选信号相关下游通路基因作为后续研究。对90例胃癌组织和10例正常组织进行sFRP3/FRZB免疫组织化学染色，并分析其与临床病理资料的相关性。建立sFRP3/FRZB过表达胃癌细胞株模型，对过表达sFRP3/FRZB在胃癌细胞体内外增殖、侵袭能力的作用进行研究。 结果：TXNL2在人肿瘤组织中高表达，TXNL12在人乳腺癌中高表达。抑制TXNL2表达可抑制乳腺癌细胞体内外增殖和转移能力。TXLNL2下调可增加细胞内ROS水平并导致细胞凋亡。TXNL2通过调控ROS水平而调控NF-κB信号通路的活化。TXNL2高表达对乳腺癌病人肺和脑转移有预后提示意义，并且与病人的生存期相关。sFRP1蛋白在胃癌组织中高表达，在正常胃上皮细胞中无/极弱表达。sFRP1蛋白表达高与淋巴结转移及患者生存期短相关，可作为评判胃癌病人预后的潜在指标。过表达sFRP1可促进胃癌细胞在二维和三维条件下的生长。过表达sFRP1可促胃癌细胞迁移、侵袭能力和创伤修复速度。过表达sFRP1可促进胃癌细胞发生EMT转换，过表达sFRP1细胞培养上清可以促进体外血管形成。过表达sFRP1胃癌细胞的裸鼠皮下成瘤能力增强，免疫组化染色发现sFRP1过表达细胞形成的皮下瘤中分裂相细胞增多、凋亡细胞减少、肿瘤微血管密度增加、MMP蛋白表达增高，与体外实验结果一致。使用人全基因组芯片检测sFRP1过表达引起的基因表达改变发现多种增强成瘤能力的基因(RUNX2、ZEB2、DNMT3L、CD44等)，同时也诱导与肿瘤基质重建相关基因(TGFβ1、VEGF、SEPP1、ILs等)和免疫逃逸相关基因(HL-DRA、PD-L2等)的表达。共表达调控网络分析发现18个与sFRP1过表达具有共表达情况的基因，而在空载体对照组中仅有4个基因。通过Realtime-PCR和ELISA验证了差异表达基因，信号通路研究发现TGFβ1/RUNX2信号通路是介导sFRP1下游的重要途径。sFRP3/FRZB在胃癌组织中高表达，在肠型胃癌中表达高于弥漫型，在高分化胃癌中表达高于低分化胃癌。过表达sFRP3/FRZB抑制胃癌细胞体内外增殖能力，促进细胞凋亡。sFRP3/FRZB过表达可抑制胃癌细胞侵袭能力。 结论：TXNL2是调控细胞内环境稳定的重要分子，并在乳腺癌中具有诊断和预后价值。sFRP1蛋白是调控胃癌细胞生长和肿瘤微环境重建的关键分子，可作为胃癌预后的潜在指标和治疗靶点。sFRP3/FRZB是抑制胃癌细胞增殖和促进胃癌细胞分化的重要分子。 收起